第四章 藥物定量分析

第四章藥物定量分析與

分析方法驗(yàn)證

一、定量分析樣品的前處理方法

1．概述（1）含金屬或鹵素的藥物，在分析前需要經(jīng)過不同方法處理后，方可進(jìn)行測(cè)定。（2）處理方法因金屬或鹵素在分子中結(jié)合的牢固程度而異。（3）而含金屬的有機(jī)藥物，有兩種情況：一是金屬原子不直接與碳原子相連，通常為有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物，稱為含金屬的有機(jī)藥物。二是金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連接，結(jié)合狀態(tài)比較牢，稱為有機(jī)金屬藥物。2．不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（1）直接測(cè)定法（2）經(jīng)水解后測(cè)定法1)直接回流后測(cè)定法

例如：三氯叔丁醇的含量測(cè)定（銀量法）2)用硫酸水解后測(cè)定法

例如：硬脂酸鎂含量測(cè)定2．不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（3）經(jīng)氧化還原后測(cè)定法1）堿性還原后測(cè)定法鹵素結(jié)合于芳環(huán)上時(shí)，由于分子中碘的結(jié)合較牢固，需在堿性溶液中加還原劑（如鋅粉）回流，使碳－碘鍵斷裂，形成無機(jī)碘化物后測(cè)定。例如：泛影酸含量測(cè)定（銀量法）

2）酸性還原后測(cè)定法例如：碘番酸含量測(cè)定（3）經(jīng)氧化還原后測(cè)定法3）利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量（間接碘量法）a．含銻藥物

b．含鐵藥物將含鐵藥物加酸溶解后，便游離出Fe3＋，利用Fe3＋在酸性溶液中氧化碘化鉀，析出的碘可用硫代硫酸鈉滴定液滴定以測(cè)定含量。3．經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法條件：含金屬有機(jī)藥物及有機(jī)鹵素藥物結(jié)構(gòu)中的金屬原子、鹵素與碳原子結(jié)合牢固者，用水解或氧化還原后測(cè)定方法難以將有機(jī)結(jié)合的金屬原子及鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)的金屬化合物及鹵素化合物。3．經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（1）濕法破壞1）硝酸－高氯酸法破壞能力強(qiáng)，反應(yīng)比較強(qiáng)烈。故進(jìn)行破壞時(shí)，必須嚴(yán)密注意切勿將容器中的內(nèi)容物蒸干，以免發(fā)生爆炸。適用于血、尿、組織等生物樣品的破壞。經(jīng)本法破壞后，所得的無機(jī)金屬離子，一般為高價(jià)態(tài)。對(duì)含氮雜環(huán)藥物的破壞不夠完全，此時(shí)宜選用干法燒灼進(jìn)行破壞。3．經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（1）濕法破壞2）硝酸－硫酸法適用于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)的破壞，如燃料、中間體或藥物等。經(jīng)本法破壞分解所得的無機(jī)金屬離子均為高價(jià)態(tài)。因堿土金屬可與硫酸形成不溶性的硫酸鹽，將會(huì)吸附被測(cè)定的金屬離子，使測(cè)定的結(jié)果偏低。所以本法不適用于含堿土金屬有機(jī)藥物的破壞。此時(shí)，可改用硝酸－高氯酸法進(jìn)行破壞。3．經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（1）濕法破壞3）硫酸－硫酸鹽法所用硫酸鹽為硫酸鉀或硫酸鈉，因硫酸鈉為含水化合物，不利于有機(jī)破壞，故一般多采用硫酸鉀。加入硫酸鹽的目的，是為了提高硫酸的沸點(diǎn)，以使樣品破壞完全。同時(shí)，也防止硫酸在加熱過程中過早地分解為三氧化硫而損失。（1）濕法破壞注意a.濕法破壞所用的儀器，一般為硅玻璃或硼玻璃制成的凱氏燒瓶；b.所用試劑及蒸餾水均不應(yīng)含有被測(cè)金屬離子或干擾測(cè)定的其它金屬離子等組分；c.由于整個(gè)操作過程所用礦酸量數(shù)倍于樣品，所以必須按相同條件進(jìn)行空白試驗(yàn)校正；d.操作時(shí)應(yīng)在通風(fēng)櫉內(nèi)進(jìn)行。

（2）干法破壞1)將有機(jī)物灼燒灰化以達(dá)分解的目的。2)應(yīng)注意的問題a.加熱或灼燒時(shí)，應(yīng)控制溫度在420℃以下，以防止某些被測(cè)金屬化合物的揮發(fā)。b.灰化完全與否，直接影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。c.經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但此時(shí)切勿棄去。（2）干法破壞3)適用于濕法不易破壞完全的有機(jī)物（如含氮雜環(huán)類有機(jī)藥物）以及某些不能用硫酸進(jìn)行破壞的有機(jī)藥物。不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等）有機(jī)藥物的破壞。

（3）氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法是將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉的燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測(cè)物質(zhì)吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐校缓蟾鶕?jù)欲測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別，檢查或測(cè)定含鹵素有機(jī)藥物或含硫、氮、硒等其它元素的有機(jī)藥物。是快速分解有機(jī)物的簡(jiǎn)單方法，它不需要復(fù)雜設(shè)備，就能夠使有機(jī)化合物中的待測(cè)元素定量分解成離子型。二、定量分析方法特點(diǎn)

1．容量分析法（1）容量分析法是將已知濃度的滴定液（中國(guó)藥典中稱滴定液）由滴定管滴加到待測(cè)藥物的溶液中，直到所加滴定液與被測(cè)藥物按化學(xué)計(jì)量反應(yīng)完全為止，然后根據(jù)滴定液的濃度和消耗的體積，就可以計(jì)算出被測(cè)藥物的含量。（2）容量分析的關(guān)鍵問題是如何確定等當(dāng)點(diǎn)。（3）容量分析通常用于測(cè)定高含量或中含量組分，即被測(cè)組分的含量在1％以上。容量分析法比較準(zhǔn)確，一般情況下相對(duì)誤差可達(dá)0.2％以下。（4）容量分析法操作簡(jiǎn)便、快速、比較準(zhǔn)確，所用儀器普通易得，在藥品檢驗(yàn)工作中具有很大的實(shí)用價(jià)值。（5）容量分析法的計(jì)算問題1）滴定度指每1ml某摩爾濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的重量。中國(guó)藥典用毫克（mg）表示。2）滴定度（T）的計(jì)算在容量分析中，被測(cè)藥物（B）與滴定液（A）之間都按一定的摩爾比進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)可表示為：2）滴定度（T）的計(jì)算滴定度（T）可按下式計(jì)算：M－滴定液的摩爾濃度b－被測(cè)藥物的摩爾數(shù)a－滴定液的摩爾數(shù)B－被測(cè)藥物的毫摩爾質(zhì)量（分子量）3）百分含量計(jì)算在測(cè)定藥物含量時(shí)，常用直接滴定法和回滴定法，其計(jì)算方法如下：a.直接滴定法用滴定液直接滴定，以求得被測(cè)藥物的含量。

T－滴定度值W－供試品取量V－消耗滴定液的體積

在實(shí)際工作中，所配制的滴定液的摩爾濃度與藥典中規(guī)定的摩爾濃度不一定恰好符合，此時(shí)就不能直接應(yīng)用藥典上所給出的滴定度（T），但只要乘以滴定液濃度校正因數(shù)（F）即可換算成實(shí)際的滴定度（T’），3）百分含量計(jì)算b.回滴定法（剩余滴定法）此法是先加入定量過量的滴定液A，使其與被測(cè)藥物反應(yīng)，待此反應(yīng)進(jìn)行完全后，再用另一滴定液B來回滴反應(yīng)中剩余的滴定液A。b.回滴定法I.不做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算方法

（VA×FA-VB×FB）×T含量%=×100%W

VA－先加入的定量過量的滴定液A體積VB－滴定液B消耗體積FA－滴定液A濃度校正因數(shù)FB－滴定液B濃度校正因數(shù)W－供試品取量T－滴定度II.做空白試驗(yàn)的百分含量計(jì)算方法

V0－空白試驗(yàn)消耗硫酸滴定液體積VB－樣品測(cè)定試驗(yàn)消耗滴定液體積T－滴定度F－滴定液濃度校正因數(shù)W－供試品取樣量（g）2．光譜分析法（1）紫外－可見分光光度法1）特點(diǎn)紫外－可見分光光度法是根據(jù)物質(zhì)分子對(duì)波長(zhǎng)為200nm～760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的光譜分析方法。主要特點(diǎn)如下：a.靈敏度高，可達(dá)10-4g/ml～10-7g/ml。b.準(zhǔn)確度高，相對(duì)誤差為2％～5％。c.儀器價(jià)格較低廉，操作簡(jiǎn)單，易于普及。d.應(yīng)用廣泛。

（1）紫外－可見分光光度法2）朗伯－比耳定律

3）儀器校正和檢定4）對(duì)溶劑的要求5）測(cè)定法 a.對(duì)照品比較法b.吸收系數(shù)法c.計(jì)算分光光度法（2）熒光分析法1）特點(diǎn)2）干擾因素的排除3）測(cè)定法3．色譜分析法色譜分析法（又稱層析法）根據(jù)其分離原理可分為：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜。又可根據(jù)分離方法分為：紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。三、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的是證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測(cè)要求需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目有：鑒別試驗(yàn)，雜質(zhì)定量或限度檢查，原料藥或制劑中有效成分含量測(cè)定以及制劑中其它成分（如降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測(cè)定驗(yàn)證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）專屬性檢測(cè)限定量限線性范圍和耐用性1．準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般以回收率（％）表示。（1）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度1）原料藥可用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。2）制劑可用含已知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，或與另一個(gè)已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。3）制劑的含量測(cè)定（2）數(shù)據(jù)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，例如制備3個(gè)不同濃度的樣品，各測(cè)定3次。應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率（％），或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限2．精密度精密度是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。含量測(cè)定和雜質(zhì)定量測(cè)定考慮方法的精密度。（1）精密度表示方法1）偏差（deviation，d）a.b.相對(duì)誤差（relativedeviation，RD）：

若兩份平行操作，設(shè)A、B為兩次測(cè)得值，則其相對(duì)偏差為：c.最大相對(duì)偏差：相對(duì)偏差用來表示測(cè)定結(jié)果的精密度，根據(jù)對(duì)分析工作的要求不同而制訂的最大值（也稱“允許差”）。一般，各種含量測(cè)定的允許差如下：容量分析法為0.3％；重量分析法為0.5％；凱氏定氮法為1％；氧瓶燃燒法為0.5％；儀器分析法為3％。（1）精密度表示方法2）標(biāo)準(zhǔn)偏差（Standarddeviation，SD或S）

（1）精密度表示方法3）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relativestandarddeviation，RSD）也稱變異系數(shù)（coefficientofvariation，CV）（2）重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性1）重復(fù)性a.在相同條件下，由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性。b.在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，如制備3個(gè)不同濃度的樣品，各測(cè)定3次，或把被測(cè)物濃度當(dāng)作100％，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。2）中間精密度a.在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度，稱為中間精密度。b.為考查隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，應(yīng)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。變動(dòng)因素為不同提起、不同分析人員、不同設(shè)備。3）重現(xiàn)性a.在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度，稱為重現(xiàn)性。b.當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。如建立藥典分析方法時(shí)通過協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗(yàn)的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。（3）數(shù)據(jù)要求均應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和可信限。3．專屬性專屬性是指在其它成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法，均應(yīng)考查其專屬性。3．專屬性（1）鑒別反應(yīng)應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分，不含被測(cè)成分的樣品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。（2）含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定1）色譜法和其它分離方法，應(yīng)附代表性圖譜，以說明專屬性。圖中應(yīng)標(biāo)明諸成分的位置，色譜法中的分離度應(yīng)符合要求。2）在雜質(zhì)可獲得的情況