PCR實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備與要求

PCR實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備與規(guī)定臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室管理暫行方法第一章總則第一條為規(guī)范臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室管理，確保臨床基因擴(kuò)增檢查質(zhì)量，使臨床診療和治療更為科學(xué)、合理，特制訂本方法。第二條臨床基因擴(kuò)增檢查技術(shù)指以臨床診療治療為目的，以擴(kuò)增檢測(cè)DNA或RNA為辦法的檢測(cè)技術(shù)，如聚合酶鏈反映（PCR）、連接酶鏈反映（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng)（TAS）自主序列復(fù)制系統(tǒng)（3SR）和鏈替代擴(kuò)增（SDA）等。第三條本方法合用于開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢查的實(shí)驗(yàn)室。臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室設(shè)立在二級(jí)以上醫(yī)院。第四條臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室必須使用經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局同意的臨床檢查試劑開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢查項(xiàng)目。第五條衛(wèi)生部臨床檢查中心（下列簡(jiǎn)稱衛(wèi)生部臨檢中心）和省、自治區(qū)、直轄市臨床檢查中心（下列簡(jiǎn)稱省臨檢中心）負(fù)責(zé)對(duì)所轄行政區(qū)域內(nèi)臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作。第二章實(shí)驗(yàn)室設(shè)立和驗(yàn)收第六條擬設(shè)立臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)療機(jī)構(gòu)按照《臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)立原則》（見(jiàn)附件）籌建實(shí)驗(yàn)室；籌建完畢后，由法定代表人向衛(wèi)生部臨檢中心提出技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)。申請(qǐng)時(shí)需提交下列材料：（一）《醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證》復(fù)印件；（二）可行性研究報(bào)告；1、擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室機(jī)構(gòu)的所在地醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、本機(jī)構(gòu)的基本狀況、對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢查的需求以及臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的預(yù)測(cè)分析；2、擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室的設(shè)立平面圖；3、擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室將開(kāi)展的檢查項(xiàng)目、實(shí)驗(yàn)設(shè)備條件和有關(guān)技術(shù)人員資料第七條衛(wèi)生部臨檢中心和省臨檢中心共同組織有關(guān)專業(yè)的專家組（下列簡(jiǎn)稱專家組），按照《臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)立原則》對(duì)提出申請(qǐng)的臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收。驗(yàn)收完畢后，在20日內(nèi)將驗(yàn)收?qǐng)?bào)告寄送至申請(qǐng)機(jī)構(gòu)。第八條經(jīng)專家組技術(shù)驗(yàn)收合格的醫(yī)療機(jī)構(gòu)將本方法第六條規(guī)定的材料及專家組驗(yàn)收?qǐng)?bào)告送至省級(jí)行政部備案。在將符合規(guī)定的全部材料送達(dá)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)后15日內(nèi)未收到省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)不同意的意見(jiàn)，方可開(kāi)展專家組技術(shù)驗(yàn)收合格的臨床基因擴(kuò)增檢查項(xiàng)目。第九條未經(jīng)專家組驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)備案的醫(yī)療機(jī)構(gòu)不得私自開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢查項(xiàng)目。第三章實(shí)驗(yàn)室監(jiān)督管理第十條臨床基因檢查實(shí)驗(yàn)室必須按照《臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》（另發(fā)）開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢查工作。第十一條臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn)。經(jīng)培訓(xùn)合格者，由培訓(xùn)單位發(fā)給合格證書(shū)，并將培訓(xùn)合格人員名單報(bào)衛(wèi)生部臨檢中心備案。獲得培訓(xùn)合格證書(shū)者方可從事臨床基因擴(kuò)增檢查工作。培訓(xùn)單位為衛(wèi)生部臨檢中心，或由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)指定并經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)定的機(jī)構(gòu)。培訓(xùn)時(shí)使用規(guī)定的統(tǒng)一教材。第十二條以科研為目的的基因擴(kuò)增檢查項(xiàng)目。不得向臨床出具檢查報(bào)告，不得向病人收取任何費(fèi)用。第十三條臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室必須按照《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)量控制，并參加衛(wèi)生部臨檢中心組織的室內(nèi)質(zhì)量評(píng)價(jià)。第十四條衛(wèi)生部臨檢中心按照本辦法和《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》協(xié)調(diào)、組織省臨檢中心對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室的檢查質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)成果報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)，同時(shí)抄送被監(jiān)測(cè)的臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)。第十五條衛(wèi)生部臨檢中心或省級(jí)臨檢中心受省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門(mén)委托可對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查，現(xiàn)場(chǎng)檢查工作人員在推行職責(zé)時(shí)應(yīng)出示證件。在進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查時(shí)，檢查人員有權(quán)調(diào)閱有關(guān)資料，被檢查機(jī)構(gòu)不得回絕或隱瞞。第十六條衛(wèi)生部臨檢中心對(duì)在室間質(zhì)量評(píng)價(jià)中不合格的臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室提出警告，對(duì)持續(xù)二次或三次中有二次發(fā)現(xiàn)臨床基因擴(kuò)增檢查成果不合格的臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室，衛(wèi)生部臨檢中心報(bào)省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門(mén)由省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門(mén)責(zé)令其暫停有關(guān)臨床基因擴(kuò)增檢查項(xiàng)目，限期整治。經(jīng)專家組進(jìn)行再次技術(shù)驗(yàn)收并合格，并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)核準(zhǔn)后，方可重新開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢查項(xiàng)目。第十七條對(duì)于未經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組技術(shù)驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生部門(mén)備案，私自開(kāi)展臨床基因檢查項(xiàng)目的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例》第四十七條和《醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例實(shí)施細(xì)則》第八十條予以處分，并予以公示。公示所需費(fèi)用由被公示機(jī)構(gòu)支付。第十八條出現(xiàn)下列狀況之一的臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室，由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)責(zé)令其停止開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢查，并對(duì)其所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)予以公示。公示所需費(fèi)用由被公示機(jī)構(gòu)支付：（一）開(kāi)展超出衛(wèi)生部臨檢中心組織的技術(shù)驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)備案臨床基因擴(kuò)增檢查項(xiàng)目的；（二）使用未經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局同意的試劑開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢查的；（三）在臨床基因擴(kuò)增檢查中未開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)量控制的；（四）在臨床基因擴(kuò)增檢查中未參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的；（五）在臨床基因擴(kuò)增檢查中弄虛作假的；（六）以科研為目的的基因擴(kuò)增檢查項(xiàng)目向病人收取費(fèi)用的；（七）使用未經(jīng)培訓(xùn)合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴(kuò)增檢查的；第四章附則第十九條對(duì)采供血機(jī)構(gòu)的基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展基因擴(kuò)增檢查項(xiàng)目的管理，參考本方法執(zhí)行。第二十條衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組對(duì)申請(qǐng)開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢查的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收所需費(fèi)用按國(guó)家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。第二十一條本方法由衛(wèi)生部負(fù)責(zé)解釋。第二十二條本方法自公布之日起施行。附：臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)立原則根據(jù)《臨床檢查擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室管理暫行方法》，制訂本原則一、臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)立原則（一）臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)立原則1、試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)2、標(biāo)本制備區(qū)3、擴(kuò)增反映混合物配制和擴(kuò)增區(qū)4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)如使用全自動(dòng)分析儀，區(qū)域可適宜合并。（二）各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。（三）進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)—>標(biāo)本制備區(qū)—>擴(kuò)增反映混合物配制和擴(kuò)增區(qū)—>擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。（四）不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開(kāi)各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。二、工作區(qū)域儀器設(shè)備配備原則（一）試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)1、2-8C和-15C冰箱2、混勻器3、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）4、移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓解決的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）6、專用工作服和工作鞋7、專用辦公用品（二）標(biāo)本制備區(qū)1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱2、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)3、混允器4、水浴箱或加熱模塊5、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）6、可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）7、超凈工作臺(tái)8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓解決的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）9、專用工作服和工作鞋10、專用辦公用品如需解決大分子DNA，應(yīng)含有超聲波水浴儀。（三）擴(kuò)增反映混合物配制和擴(kuò)增區(qū)1、核酸擴(kuò)增儀2、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）3、可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）4、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓解決的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）5、專用工作服和工作鞋6、專用辦公用品(四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)視檢查辦法不同而定?；緝x器設(shè)備以下：1、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）2、可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）3、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）4、專用工作服和工作鞋5、專用辦公用品臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范為使基因擴(kuò)增檢查技術(shù)有效地應(yīng)用于臨床，更加好地為疾病的防止、診療和治療服務(wù)，確保檢查質(zhì)量，特制訂本規(guī)范。一、臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化設(shè)立及其管理臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化設(shè)立詳見(jiàn)《臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室管理暫行方法》(衛(wèi)醫(yī)發(fā)[]10號(hào)文)附件《臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)立原則》。為避免污染，必須嚴(yán)格遵照《臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室設(shè)立原則》設(shè)立臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室。臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室四個(gè)隔開(kāi)的工作區(qū)域中每一區(qū)域都須有專用的儀器設(shè)備。各區(qū)域都必須有明確的標(biāo)記，以避免設(shè)備物品如加樣器或試劑等從其各自的區(qū)域內(nèi)移出從而造成不同的工作區(qū)域間設(shè)備物品發(fā)生混淆。進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵照單一方向次序，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反映混合物配制和擴(kuò)增區(qū)(簡(jiǎn)稱擴(kuò)增區(qū))至產(chǎn)物分析區(qū)，避免發(fā)生交叉污染。在不同的工作區(qū)域應(yīng)使用不同顏色或有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服，方便于鑒別。另外，當(dāng)工作者離開(kāi)工作區(qū)時(shí)，不得將各區(qū)特定的工作服帶出。清潔辦法不當(dāng)也是污染發(fā)生的一種重要因素，因此實(shí)驗(yàn)室的清潔應(yīng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)至擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)有其各自的清潔用品以避免交叉污染。(一)試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)下述操作在該區(qū)進(jìn)行：貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反映混合液的制備。貯存試劑和用于標(biāo)本制備的材料應(yīng)直接運(yùn)輸至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能通過(guò)產(chǎn)物分析區(qū)。在打開(kāi)含有反映混合液的離心管或試管前，應(yīng)將其快速離心數(shù)秒。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。當(dāng)貯存試劑溶液經(jīng)檢查可用后，應(yīng)將其分裝貯存?zhèn)溆?，避免由于?jīng)常打開(kāi)反映管吸液而造成污染。含反映混合液的離心管或試管在冰凍前都應(yīng)快速離心數(shù)秒。大多數(shù)用于擴(kuò)增的試劑都應(yīng)冰凍貯存。為避免因單次反映取液而頻繁的凍融主貯存試劑，應(yīng)分裝冰凍貯存試劑溶液。貯存試劑的分裝體積根據(jù)普通在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)一次測(cè)定所需的擴(kuò)增反映數(shù)來(lái)決定。主反映混合液的構(gòu)成成分特別是聚合酶的合用性和穩(wěn)定性通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)檢查，評(píng)價(jià)成果必須有書(shū)面報(bào)告。對(duì)于"熱啟動(dòng)"技術(shù)(在第一種高溫變性環(huán)節(jié)后加入酶)，聚合酶也可不包含在主反映混合液中。在整個(gè)本區(qū)的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。另外，操作中使用一次性帽子也是一種有效地避免污染的方法。嚴(yán)禁用嘴吸取液體，加樣器和吸頭等必須經(jīng)高壓解決。工作結(jié)束后必須立刻對(duì)工作區(qū)進(jìn)行清潔。本工作區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面應(yīng)可耐受諸如次氯酸鈉的化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面的紫外照射應(yīng)方便有效。由于紫外照射的距離和能量對(duì)去污染的效果非常核心，因此可使用可移動(dòng)紫外燈(254nm波長(zhǎng))，在工作完畢后調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺(tái)上60~90cm內(nèi)照射。由于擴(kuò)增產(chǎn)物僅幾百bp，對(duì)紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴(kuò)增片段必須延長(zhǎng)照射時(shí)間，最佳是照射過(guò)夜。實(shí)驗(yàn)室及其設(shè)備的使用必須有日常統(tǒng)計(jì)。(二)標(biāo)本制備區(qū)下述操作在該區(qū)進(jìn)行：臨床標(biāo)本的保存，核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反映管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。要對(duì)的使用加樣器。由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)憤怒溶膠所致的污染，因此應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)?？赏ㄟ^(guò)在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染，加入待測(cè)核酸后，必須蓋好含反映混合液的反映管。對(duì)含有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，必須有明確的樣本解決和滅活程序。用過(guò)的加樣器吸頭必須放入專門(mén)的消毒(例如含次氯酸鈉溶液)容器內(nèi)。實(shí)驗(yàn)室桌椅表面每次工作后都要清潔，實(shí)驗(yàn)材料(原始血標(biāo)本、血清標(biāo)本、提取中的標(biāo)本與試劑的混合液等)如出現(xiàn)外濺，則必須分別解決并作出統(tǒng)計(jì)。對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)適宜的紫外照射(254nm波長(zhǎng)，與工作臺(tái)面近距離)適合于滅活去污染?？梢苿?dòng)紫外線管燈可用來(lái)確保工作后對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面的充足照射。樣本解決對(duì)核酸擴(kuò)增有很大影響，必須使用有效的核酸提取辦法，可在開(kāi)展臨床標(biāo)本檢測(cè)前對(duì)提取辦法進(jìn)行評(píng)價(jià)。用于RNA擴(kuò)增檢測(cè)的樣本制備好后來(lái)，應(yīng)立刻進(jìn)行cDNA合成，由于cDNA鏈較RNA穩(wěn)定，保存相對(duì)容易。為確保逆轉(zhuǎn)錄反映的需要，應(yīng)在標(biāo)本制備區(qū)設(shè)立一種以上的溫育裝置。cDNA合成的抱負(fù)溫度依所使用的酶而定，傾向于使用一步法：即使用在擴(kuò)增反映緩沖液條件下含有逆轉(zhuǎn)錄活性的熱穩(wěn)定的DNA聚合酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，其較cDNA合成后再開(kāi)蓋以調(diào)節(jié)緩沖液或加入聚合酶進(jìn)行擴(kuò)增發(fā)生污染的可能性減少。待測(cè)RNA的cDNA拷貝須保存在標(biāo)本制備區(qū)，不得在本區(qū)對(duì)樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增。(三)擴(kuò)增區(qū)下述工作在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行：DNA或cDNA擴(kuò)增。另外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區(qū))的加入和主反映混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反映混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式PCR測(cè)定中，普通在第一輪擴(kuò)增后必須打開(kāi)反映管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。不能從本區(qū)再進(jìn)入任何"上游"區(qū)域，可減少本區(qū)的氣壓以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動(dòng)。如有加樣則應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。打開(kāi)預(yù)解決過(guò)的反映混合液時(shí)必須避免液體濺出，特別是在巢式擴(kuò)增環(huán)節(jié)之間。一種簡(jiǎn)樸的辦法是在打開(kāi)反映管前快速離心數(shù)秒。可使用體積較小的離心機(jī)，因其所占實(shí)驗(yàn)臺(tái)面小，易于用一只手操作，適合于大多數(shù)超凈臺(tái)。防潮屏障如石蠟油或輕礦物油也含有防污染作用，但必須注意的是，礦物油本身也可能成為一種持續(xù)性的污染源。用過(guò)的加樣器必須注意清潔消毒。完畢操作及每天工作后都必須對(duì)實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面進(jìn)行清潔和消毒，紫外照射辦法與前面區(qū)域相似。如有溶液濺出，必須解決并作出統(tǒng)計(jì)。(四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)下述操作在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行：擴(kuò)增片段的測(cè)定。核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析辦法多個(gè)多樣，如膜上或微孔板上探針雜交辦法(同位素標(biāo)記或非同位素標(biāo)記)、瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測(cè)序辦法等?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)的商品試劑盒絕大部分均采用非同位素標(biāo)記的微孔板上探針雜交辦法，即PCR-ELISA辦法，也有膜上探針雜交辦法。本區(qū)是最重要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，因此必須注意避免通過(guò)本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA辦法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，必須使用洗板機(jī)洗板，廢液必須收集至1mol/LHC1中，并且不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒，而應(yīng)至遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。用過(guò)的吸頭也必須放至1mol/LHCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序解決，如焚燒。由于本區(qū)有可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或同位素等，故應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。本區(qū)的清潔消毒和紫外照射辦法同前面區(qū)域。本區(qū)如采用負(fù)壓條件或減壓狀況下(如安裝排電扇)可減少擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至前面區(qū)域的可能性。二、臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量確保臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量確保涉及到整個(gè)基因擴(kuò)增檢查的全部階段，即測(cè)定分析前的標(biāo)本采集解決、測(cè)定中的核酸提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析以及測(cè)定后的成果報(bào)告等。(一)標(biāo)本的采集慣用于基因擴(kuò)增檢測(cè)的臨床標(biāo)本涉及EDTA或枸櫞酸鈉抗凝全血或骨髓、血清或血漿、痰、腦脊液、尿及分泌物等。采血液等樣本時(shí)，應(yīng)使用一次性密閉容器，如真空采血管。當(dāng)使用非密閉采樣系統(tǒng)時(shí)，如尿、分泌物和骨髓的采樣，必須注意避免來(lái)自采樣者的皮屑或分泌物的污染。采樣時(shí)必須戴一次性手套。玻璃器皿在使用前應(yīng)高壓解決，由于玻璃器皿常含有不易失活的RNA酶。最佳是熱滅菌，250℃烘烤4小時(shí)以上可使RNA酶永久性失活。全血和骨髓標(biāo)本必須進(jìn)行抗凝解決。EDTA和枸櫞酸鹽是首選的抗凝劑。不能使用肝素抗凝，由于肝素是Taq酶的強(qiáng)克制劑，并且在其后的核酸提取環(huán)節(jié)中很難去除。臨床用于RNA(如HCVRNA)擴(kuò)增檢測(cè)的血標(biāo)本建議進(jìn)行抗凝解決，并盡快(3小時(shí)以內(nèi))分離血漿，以避免RNA的降解。如未作抗凝解決，則抽血后，必須在1小時(shí)內(nèi)分離血清。(二)標(biāo)本的穩(wěn)定化解決用于DNA擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)本，采集后普通不需要特殊的穩(wěn)定化解決，但標(biāo)本應(yīng)及時(shí)送至實(shí)驗(yàn)室。由于RNA易受RNA酶的降解，因此用于RNA測(cè)定的標(biāo)本有時(shí)必須進(jìn)行穩(wěn)定化解決，如流行病學(xué)調(diào)查的現(xiàn)場(chǎng)采樣。異硫氰酸胍鹽(Guanidinethiocyanate,GITC)可使DNA酶和RNA酶立刻失活，因此在采集標(biāo)本時(shí)，可將標(biāo)本材料如血清或血漿按1:4的比例加至含有5mol/LGITC的試管中，從而使血清(漿)中的RNA酶不可逆失活。經(jīng)上述穩(wěn)定化解決后，標(biāo)本普通不需要冷藏即可郵寄。對(duì)于特定的檢測(cè)項(xiàng)目，上述穩(wěn)定化解決辦法的效果終究如何，要使用對(duì)應(yīng)的逆轉(zhuǎn)錄PCR測(cè)定辦法來(lái)評(píng)價(jià)。(三)標(biāo)本的運(yùn)輸標(biāo)本采集后必須盡快送至實(shí)驗(yàn)室。通過(guò)適宜穩(wěn)定化解決的標(biāo)本可在常溫下通過(guò)郵寄運(yùn)輸。如用于DNA擴(kuò)增檢測(cè)的EDTA抗凝全血標(biāo)本及用于RNA擴(kuò)增檢測(cè)的經(jīng)GITC穩(wěn)定化解決的標(biāo)本。普通在運(yùn)輸時(shí)，應(yīng)采用不易破碎的容器裝載標(biāo)本。用于RNA檢測(cè)的標(biāo)本，如果未經(jīng)穩(wěn)定化解決，則必須速凍后，放在干冰中運(yùn)輸。(四)標(biāo)本的貯存臨床體液標(biāo)本如血清/血漿等可于-70℃下長(zhǎng)時(shí)間貯存。用于DNA測(cè)定的已純化核酸樣本可在10mmol/LTris-1mmol/LEDTA緩沖液(pH中4℃保存。用于RNA測(cè)定的已純化核酸樣本應(yīng)在緩沖液中-80℃或液氮中貯存。用乙醇沉淀的核酸樣本貯存在-20℃即可。用GITC解決的RNA標(biāo)本在室溫可保存7天。(五)標(biāo)本的解決(核酸提取)標(biāo)本解決即核酸提取純化是決定擴(kuò)增檢測(cè)成敗的核心性環(huán)節(jié)，在使用商品核酸提取試劑提取臨床標(biāo)本中的核酸模板前，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行充足評(píng)價(jià)以驗(yàn)證其提取的有效性。普通，核酸制備質(zhì)量不高是由于克制物去除不完全所致，克制物可能來(lái)源于標(biāo)本本身(如血紅素及其前體或降解產(chǎn)物)或核酸提取過(guò)程中殘留的有機(jī)溶劑(如酚、氯仿等)，這些物質(zhì)對(duì)其后的Taq酶擴(kuò)增反映環(huán)節(jié)含有強(qiáng)烈的克制作用，從而影響靶核酸的擴(kuò)增測(cè)定。當(dāng)標(biāo)本為痰時(shí)，則必須先進(jìn)行液化解決，再提取核酸。需注意的是，液化時(shí)不能加熱，液化時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)。另外，當(dāng)靶核酸為RNA時(shí)，逆轉(zhuǎn)錄PCR測(cè)定失敗的常見(jiàn)因素是標(biāo)本在運(yùn)輸前未經(jīng)充足的穩(wěn)定化解決及核酸提取試劑的RNA酶的污染。對(duì)于前者，要核查測(cè)定分析前的環(huán)節(jié)，如果發(fā)現(xiàn)有RNA降解的證據(jù)，實(shí)驗(yàn)室則應(yīng)回絕接受標(biāo)本，規(guī)定重新采用標(biāo)本，并對(duì)運(yùn)輸者給以具體的指導(dǎo)。對(duì)于后者，建議使用高質(zhì)量的商品核酸提取試劑。(六)靶核酸的逆轉(zhuǎn)錄(RT)和擴(kuò)增1、靶RNA的逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成為逆轉(zhuǎn)錄PCR中的第一種酶反映環(huán)節(jié)，所產(chǎn)生的cDNA為靶RNA的反向互補(bǔ)鏈，為背面擴(kuò)增的模板。下述因素普通影響cDNA合成的效率：(1)逆轉(zhuǎn)錄效率的減少或完全缺少。其可能的因素有逆轉(zhuǎn)錄酶質(zhì)量不高、試劑降解變質(zhì)或加樣錯(cuò)誤等；(2)用于逆轉(zhuǎn)錄的標(biāo)本中存在逆轉(zhuǎn)錄或Taq酶的克制物(如酚、氯仿、血紅素等)；(3)RNA酶的存在造成RNA的降解。2、核酸的擴(kuò)增有多個(gè)因素可引發(fā)核酸擴(kuò)增檢測(cè)的假陽(yáng)性或假陰性成果，如擴(kuò)增靶核酸中克制劑存在、Taq酶失活、退火溫度不對(duì)、Mg++濃度不佳、患者標(biāo)本或試劑受污染等。擴(kuò)增儀孔中熱傳導(dǎo)的均一性極為重要，必須定時(shí)對(duì)擴(kuò)增儀的溫度控制和加熱模塊中熱傳導(dǎo)的一致性進(jìn)行檢查，以避免假陰性成果。(七)污染在實(shí)際工作中，常見(jiàn)有下列幾個(gè)污染類型：擴(kuò)增片段的污染(產(chǎn)物污染)；天然基因組DNA的污染、試劑污染(貯存液或工作液)以及標(biāo)本間交叉污染(如氣溶膠從一種陽(yáng)性標(biāo)本擴(kuò)散到原本陰性的標(biāo)本)。臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室中污染的最重要來(lái)源是擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。由于一旦發(fā)生污染后，再圍繞實(shí)驗(yàn)室來(lái)尋找污染源不僅耗時(shí)并且還很繁瑣，因此避免污染重在防止。但如果發(fā)生了污染，實(shí)驗(yàn)就必須停止，直到發(fā)現(xiàn)了污染源為止，并且實(shí)驗(yàn)成果必須作廢。1、測(cè)定分析前的污染源測(cè)定分析前實(shí)驗(yàn)材料的污染重要來(lái)自非病人標(biāo)原來(lái)源的核酸。2、測(cè)定分析階段的污染源普通，測(cè)定分析階段的每一步都可能發(fā)生對(duì)樣本的污染。反映混合液的任何成分及核酸的制備和反映建立階段所涉及到的實(shí)驗(yàn)設(shè)備的任何部位都是可能的污染源。如受污染的試劑(例如牛血清白蛋白，明膠或礦物油)、商品酶制劑、消耗品(如反映管，吸頭)和實(shí)驗(yàn)設(shè)備(如加樣器、離心機(jī))等。在前面三個(gè)工作區(qū)中，不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作會(huì)引發(fā)所使用的試劑、消耗品或?qū)嶒?yàn)設(shè)備的污染。而在產(chǎn)物分析區(qū)，當(dāng)吸取擴(kuò)增產(chǎn)物用于檢測(cè)時(shí)，非常容易引發(fā)污染，因此必須制訂原則操作程序(SOP)，并嚴(yán)格執(zhí)行。3、污染的避免要避免污染，首先應(yīng)是防止而不是排除污染，前面所述對(duì)工作區(qū)的嚴(yán)格劃分的目的即是為了防止污染。為避免以前測(cè)定中所產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，可設(shè)法將其破壞掉。如在擴(kuò)增反映中用dUTP取代部分dTTP，使得產(chǎn)生的特異擴(kuò)增片段含有尿嘧啶，這樣擴(kuò)增前在反映混合液中加入尿嘧啶糖苷酶(UNG)，可破壞來(lái)自以前測(cè)定的擴(kuò)增產(chǎn)物，從而避免其對(duì)后來(lái)要進(jìn)行的擴(kuò)增測(cè)定的污染。另外一種辦法是持續(xù)的長(zhǎng)波紫外燈照射，通過(guò)異補(bǔ)骨脂素光化學(xué)產(chǎn)生DNA加合物，由于DNA加合物對(duì)擴(kuò)增沒(méi)有反映但又不妨礙PCR后雜交過(guò)程，因此這種辦法也能避免污染。上述防污染辦法只在一定程度上有效，因此不能用其來(lái)替代嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室設(shè)立和管理，特別是這些辦法不能避免外來(lái)非擴(kuò)增的天然DNA的污染。4、去除污染的方法工作完后必須定時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)室采用有效的去污染方法，結(jié)合多個(gè)不同的辦法可達(dá)成最佳效果。去污染方法涉及但不僅限下面幾個(gè)：(1)用10%(v/v)次氯酸鈉清潔表面；(2)實(shí)驗(yàn)后長(zhǎng)時(shí)間的紫外照射實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)面和其它表面；(3)實(shí)驗(yàn)設(shè)備如加樣器的高壓消毒。(八)擴(kuò)增產(chǎn)物的分析擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定有多個(gè)辦法，如電泳、限制性酶切、斑點(diǎn)印跡、探針雜交、測(cè)序、分光光度法定量等，但臨床PCR檢查項(xiàng)目基本上都使用探針雜交辦法。雜交成果不充足的因素可能是基因探針不適宜、標(biāo)記辦法不對(duì)、對(duì)探針的標(biāo)記不夠、雜交或洗滌辦法不適宜等。最常使用的基因探針有：DNA片段、合成的寡核苷酸和體外轉(zhuǎn)錄的反義RNA探針。探針的標(biāo)記物慣用的有生物素、地高辛、熒光素和同位素等。在擴(kuò)增后的雜交檢測(cè)中,應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格恪守商品試劑盒擬定的雜交程序和雜交條件。溫度太低或離子強(qiáng)度太高都會(huì)減少雜交的嚴(yán)格性，還會(huì)給檢測(cè)信號(hào)的特異性帶來(lái)負(fù)面影響。相反，提高溫度和/或減少離子強(qiáng)度會(huì)增加雜交的嚴(yán)格性。因此，嚴(yán)密控制溫度和試劑的離子強(qiáng)度是避免假陽(yáng)性和假陰性成果的先決條件。要注意的是，溫度和離子強(qiáng)度不能同時(shí)變化。(九)質(zhì)量控制質(zhì)量控制涉及兩個(gè)方面，即室內(nèi)質(zhì)量控制(下列簡(jiǎn)稱質(zhì)控)和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。1、室內(nèi)質(zhì)量控制必須對(duì)DNA和RNA分析的各步進(jìn)行質(zhì)量控制，以避免假陽(yáng)性和假陰性，確保測(cè)定成果的精確性和重復(fù)性。由于核酸擴(kuò)增測(cè)定的高敏感性，因此標(biāo)本制備、逆轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增本身和產(chǎn)物分析中的每一步都規(guī)定有質(zhì)控方法。(1)標(biāo)本制備：慣用瓊脂糖凝膠電泳來(lái)檢測(cè)DNA提取效果，以判斷所提取的DNA與否發(fā)生降解。用常規(guī)的手工提取辦法制備的DNA的平均長(zhǎng)度普通為~100kb，用適合PCR的DNA提取試劑盒制備的DNA的長(zhǎng)度平均范疇為30-40kb。明顯出現(xiàn)降解的DNA(在1和10kb的低分子量范疇內(nèi))在經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離和用溴化乙錠染色后也可見(jiàn)強(qiáng)的熒光信號(hào)。用對(duì)甲基化不敏感的限制性內(nèi)切酶(如EcoRI)消化DNA，然后電泳分離，能夠?qū)γ富钚缘目酥苿┻M(jìn)行質(zhì)控(在克制劑存在的狀況下，高分子量的片段不被酶切)。潛在的克制劑的存在普通用260nm和280nm的分光光度測(cè)定來(lái)預(yù)計(jì)，質(zhì)量好的DNA提取物，A260/A280比值應(yīng)當(dāng)在~之間;否則,殘留的蛋白或酚可能會(huì)很高。僅用光度計(jì)比色辦法不能對(duì)DNA的完整性下結(jié)論。最快的對(duì)總RNA提取質(zhì)量控制的辦法是在非變性條件下作瓊脂糖凝膠電泳,這一點(diǎn)跟DNA分離相似。但如果對(duì)成果有疑問(wèn),就應(yīng)當(dāng)在變性的條件下作瓊脂糖凝膠電泳以檢測(cè)RNA的完整性。在抱負(fù)狀況下,三種重要的核糖體RNA(28S、18S和5S)在凝膠上出現(xiàn)的帶相對(duì)較窄。如發(fā)生RNA的降解，則出現(xiàn)大量低分子量帶或出現(xiàn)帶的消失。測(cè)定核糖體RNA帶的密度指數(shù)可作為對(duì)RNA制備的質(zhì)量評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的原則；對(duì)向低分子量拖尾的、不對(duì)稱性的峰的評(píng)定也是RNA完整性的適宜的指標(biāo)。另外，瓊脂糖凝膠電泳能顯示出在RNA的制備中被DNA污染的程度。由于這些因素，單獨(dú)的光度計(jì)比色辦法也不能對(duì)RNA的完整性下結(jié)論。對(duì)于血清（漿）中病毒的測(cè)定，則要評(píng)價(jià)標(biāo)本出現(xiàn)溶血、脂血和黃膽狀況下標(biāo)本解決辦法對(duì)擴(kuò)增檢測(cè)的影響，避免由于標(biāo)本解決辦法的不當(dāng)而出現(xiàn)假陰性成果。另外，還可采用已知濃度標(biāo)本評(píng)價(jià)核酸提取辦法的效果。(2)逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增：本部份涉及陽(yáng)性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。對(duì)逆轉(zhuǎn)錄和核酸擴(kuò)增的質(zhì)控既可使用內(nèi)標(biāo)質(zhì)控辦法也可采用外標(biāo)質(zhì)控辦法。逆轉(zhuǎn)錄-擴(kuò)增檢測(cè)的內(nèi)標(biāo)普通為在整個(gè)細(xì)胞周期中均勻體現(xiàn)的mRNA，如HLA、β肌動(dòng)蛋白和組蛋白的mRNA或14SrRNA等。另外，也可在標(biāo)本制備時(shí)將外來(lái)內(nèi)標(biāo)加入到樣本中共同提取、逆轉(zhuǎn)錄及擴(kuò)增。當(dāng)標(biāo)本中存在逆轉(zhuǎn)錄克制物，或核酸提取中發(fā)生RNA降解，或逆轉(zhuǎn)錄酶失活，內(nèi)標(biāo)即會(huì)體現(xiàn)為陰性成果。對(duì)于DNA測(cè)定內(nèi)標(biāo)可使用對(duì)有機(jī)體存活所必須的靶基因，如維生素D血漿結(jié)合蛋白的基因。對(duì)于病原體的基因檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)多采用人工制備的競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)標(biāo)。內(nèi)標(biāo)能夠監(jiān)控每一擴(kuò)增孔中假陰性的產(chǎn)生狀況?，F(xiàn)在的商品試劑盒大部分沒(méi)采用內(nèi)標(biāo)辦法質(zhì)控。因此在測(cè)定血清/血漿病原體核酸如HBVDNA、HCVRNA等時(shí)，應(yīng)使用已知的弱陽(yáng)性血清/血漿作為質(zhì)控樣本，與待測(cè)臨床標(biāo)本等同解決提取核酸及擴(kuò)增，以判斷逆轉(zhuǎn)錄及擴(kuò)增檢測(cè)的效果。使用這些外加弱陽(yáng)性質(zhì)控不僅可檢測(cè)擴(kuò)增反映液的質(zhì)量，還可獲得有關(guān)PCR試劑的檢測(cè)下限和特異性的信息。這些質(zhì)控樣本在擴(kuò)增檢測(cè)時(shí)必須使用與患者的標(biāo)本相似的主反映混合液。每一種PCR實(shí)驗(yàn)中都必須設(shè)有外加陰性質(zhì)控(污染監(jiān)測(cè)質(zhì)控)，為判斷擴(kuò)增過(guò)程中污染出現(xiàn)的階段，陰性質(zhì)控可涉及以下幾個(gè)，即在樣品制備的整個(gè)過(guò)程中所帶的空白管、僅有擴(kuò)增反映液但不含擴(kuò)增模板的反映管、陰性標(biāo)本等。陰性標(biāo)本能夠評(píng)定PCR實(shí)驗(yàn)的綜合質(zhì)量。在擴(kuò)增靶RNA的RT-PCR實(shí)驗(yàn)中，可做省略逆轉(zhuǎn)錄的污染質(zhì)控，通過(guò)這種辦法，可發(fā)現(xiàn)以前擴(kuò)增的DNA片段所引發(fā)的污染。(3)板上雜交和膜上斑點(diǎn)印跡雜交的質(zhì)控：在板上雜交和斑點(diǎn)雜交時(shí)，陽(yáng)性和陰性質(zhì)控應(yīng)當(dāng)在同一板或膜上與病人標(biāo)本平行進(jìn)行分析，這可排除不同反映中因使用不同雜交條件所致的對(duì)成果的錯(cuò)誤解釋。(4)測(cè)定成果的評(píng)價(jià)與報(bào)告：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)辦法，在判斷成果時(shí)，應(yīng)先對(duì)擴(kuò)增的熒光信號(hào)作出定性判斷，然后再進(jìn)行定量分析，避免某些非特異熒光信號(hào)對(duì)成果分析的干擾。成果的報(bào)告必須簡(jiǎn)樸清晰。定性測(cè)定報(bào)告"陽(yáng)性"或"陰性"即可。定量測(cè)定則必須報(bào)告量的多少，如成果高于測(cè)定辦法線性范疇上限，則對(duì)樣本稀釋后再測(cè)，成果乘上稀釋倍數(shù)；如成果低于辦法的測(cè)定范疇下限，則報(bào)?lt;多少即可，不能報(bào)告為"0"或"陰性"。2、室間質(zhì)量評(píng)價(jià)全部開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢查的實(shí)驗(yàn)室都必須參加由衛(wèi)生部臨床檢查中心組織的全國(guó)臨床基因擴(kuò)增檢查項(xiàng)目的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)成果將作為其開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢查的根據(jù)之一。本工作規(guī)范自公布之日起實(shí)施。如何迎接臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收陶志華（溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院檢查科）臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室重要應(yīng)用把PCR（聚合酶鏈反映）技術(shù)應(yīng)用于疾病的診療與治療監(jiān)測(cè)。PCR技術(shù)發(fā)明是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉，含有深遠(yuǎn)歷史意義，但在上世紀(jì)九十年代中國(guó)，在我國(guó)由于部分醫(yī)部機(jī)構(gòu)受利益的驅(qū)動(dòng)，在缺少技術(shù)、設(shè)備以及規(guī)范化管理的狀況下，PCR技術(shù)臨床應(yīng)用泛濫，出現(xiàn)大量假陽(yáng)性和假陰性成果，甚至出現(xiàn)虛假檢測(cè)報(bào)告，造成檢查成果和臨床意義應(yīng)用十分混亂，嚴(yán)重?cái)_亂正常醫(yī)療秩序，特別在性病基因檢測(cè)方面，甚至還帶來(lái)一系列道德倫理、家庭糾紛以及社會(huì)和法律問(wèn)題。PCR技術(shù)臨床應(yīng)用所出現(xiàn)的一系列問(wèn)題引發(fā)衛(wèi)生部管理層高度重視，衛(wèi)生部醫(yī)政司于1988年下發(fā)了衛(wèi)醫(yī)發(fā)[1998]9號(hào)文獻(xiàn)宣布PCR技術(shù)暫停應(yīng)用于臨床診療。通過(guò)近四年重復(fù)論證，衛(wèi)生部1月14日公布“臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室管理暫行方法”，同年2月20日衛(wèi)生部臨床檢查中心公布“臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范”。兩個(gè)文獻(xiàn)宣布了PCR技術(shù)臨床應(yīng)用解凍，明確規(guī)定臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展PCR技術(shù)必需含有的基本條件：①規(guī)范的PCR實(shí)驗(yàn)室②編寫(xiě)適合本實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量手冊(cè)③經(jīng)PCR專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)的技術(shù)人員（PCR上崗證）④使用有生產(chǎn)批文的PCR試劑。含有條件的二級(jí)以上醫(yī)院可向衛(wèi)生部或省臨床檢查中心申請(qǐng)技術(shù)驗(yàn)收。本人作為通過(guò)衛(wèi)生部臨床檢查中心驗(yàn)收的臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室一名實(shí)驗(yàn)室工作人員，同時(shí)也作為專家多次參加衛(wèi)生部臨床檢查中心組織的實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收，就臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收的前期準(zhǔn)備工作和現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)驗(yàn)收整個(gè)過(guò)程作一簡(jiǎn)樸介紹，并談?wù)劚救梭w會(huì)。一、為什么要進(jìn)行臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)增收臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室采用PCR技術(shù)用于臨床基因診療，由于PCR技術(shù)對(duì)所檢測(cè)的核酸模板進(jìn)行大量擴(kuò)增，容易出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室污染造成臨床檢測(cè)標(biāo)本假陽(yáng)性成果；另外由于PCR技術(shù)規(guī)定高、影響因素多（特別是RNA標(biāo)本），實(shí)驗(yàn)過(guò)程解決不當(dāng)易造成核酸模板無(wú)擴(kuò)增現(xiàn)象，造成臨床標(biāo)本假陰性成果。因此臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收和規(guī)范化管理是PCR技術(shù)本身需要，也是在臨床上順利應(yīng)用該技術(shù)前提。二、PCR實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收準(zhǔn)備工作（一）硬件準(zhǔn)備——實(shí)驗(yàn)室基本建設(shè)1.根據(jù)文獻(xiàn)規(guī)定，臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)；標(biāo)本制備區(qū)；擴(kuò)增反映混合物配制和擴(kuò)增區(qū)；擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測(cè)，此區(qū)域可不設(shè)。2.各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。3.進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一流向進(jìn)行，即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反映混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。4.不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（不同的顏色）。工作人員離開(kāi)各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。5.工作區(qū)域儀器設(shè)備配備原則（1）試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)2～8℃和-15℃冰箱：混勻器；微量加樣器（覆蓋1～1000μl）；移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓解決的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）；專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。（2）標(biāo)本制備區(qū)2～8℃冰箱，-20℃或-80℃冰箱；高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)；混勻器；水浴箱或加熱模塊；微量加樣器（覆蓋1～1000μl）；可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；超凈工作臺(tái)，消耗品；一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓解決的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）；專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。（3）擴(kuò)增反映混合物配制和擴(kuò)增區(qū)核酸擴(kuò)增儀；微量加樣器（覆蓋1～1000μl）；可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓解決的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）；專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。（4）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)視檢測(cè)辦法不同而定?；緝x器設(shè)備以下：微量加樣器（覆蓋1～200μl）；可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓解決的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）；專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。（二）軟件建設(shè)——質(zhì)量手冊(cè)編寫(xiě)與實(shí)施、人才資源（上崗證培訓(xùn)與有關(guān)知識(shí)學(xué)習(xí)）1.臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量手冊(cè)編寫(xiě)質(zhì)量手冊(cè)是闡明臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量方針，并描述過(guò)其質(zhì)量體系的文獻(xiàn)。質(zhì)量手冊(cè)規(guī)定了質(zhì)量體系的基本構(gòu)造，是實(shí)施和保持質(zhì)量體系應(yīng)長(zhǎng)久遵照的文獻(xiàn)。臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)編寫(xiě)應(yīng)根據(jù)衛(wèi)生部下發(fā)兩個(gè)文獻(xiàn)，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)際狀況編寫(xiě)適合本實(shí)驗(yàn)室的切實(shí)可行的質(zhì)量手冊(cè)。質(zhì)量手冊(cè)的提綱應(yīng)涉及三部分：質(zhì)量方針和宗旨；工作制度；原則操作文獻(xiàn)（SOP）（1）質(zhì)量方針和宗旨制訂臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理目的和質(zhì)量確保體系的構(gòu)造體系和總方針。（2）工作制度普通應(yīng)涉及下列文獻(xiàn)：實(shí)驗(yàn)室的設(shè)立、布局及組織構(gòu)造；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度；實(shí)驗(yàn)室的人員配備及管理制度；生物的防護(hù)與安全制度；實(shí)驗(yàn)室廢棄物解決制度；實(shí)驗(yàn)室清潔消毒制度；儀器設(shè)備的管理制度；儀器、試劑、耗材購(gòu)置程序及管理制度；臨床標(biāo)本的管理制度；實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)的管理制度；質(zhì)量控制工作管理制度；成果報(bào)告管理制度；埋怨的內(nèi)部解決制度；負(fù)責(zé)人及質(zhì)檢員職責(zé)；崗位設(shè)立和責(zé)任制等……（3）原則操作程序（SOP）普通涉及：消毒液配制原則操作程序：消毒原則操作程序；超凈工作臺(tái)使用原則操作程序；超凈工作臺(tái)維護(hù)和保養(yǎng)原則操作文獻(xiàn)；PCR儀使用原則操作程序；PCR儀維護(hù)和保養(yǎng)原則操作程序；高速低溫離心機(jī)使用原則操作程序；移液器使用原則操作程序；冰箱維護(hù)和保養(yǎng)原則操作程序；電熱恒溫水浴箱操作程序；電子天平使用和校正操作程序；可移動(dòng)紫外消毒車(chē)使用操作程序；加樣器校準(zhǔn)原則操作程序；離心機(jī)維護(hù)保養(yǎng)操作程序；溫度計(jì)校準(zhǔn)程序；試劑的質(zhì)檢操作程序；標(biāo)本唯一標(biāo)記編號(hào)編制規(guī)則；臨床標(biāo)本的采集及解決操作程序；臨床標(biāo)本的保存程序；乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)原則操作程序；丙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)原則操作程序；結(jié)核分枝桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)原則操作程序；沙眼衣原體核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)原則操作程序等……（4）引用圖表：PCR擴(kuò)增可接受標(biāo)本統(tǒng)計(jì)表；PCR擴(kuò)增拒收標(biāo)本統(tǒng)計(jì)表；室內(nèi)質(zhì)控成果統(tǒng)計(jì)表；室間質(zhì)控統(tǒng)計(jì)表；消耗性材料驗(yàn)收統(tǒng)計(jì)表；試劑驗(yàn)收統(tǒng)計(jì)表；故障解決表；臺(tái)階式高速離心機(jī)使用統(tǒng)計(jì)表；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)使用統(tǒng)計(jì)表；擴(kuò)增儀維護(hù)保養(yǎng)統(tǒng)計(jì)表；人員培訓(xùn)計(jì)劃及培訓(xùn)統(tǒng)計(jì)表；實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表；重要設(shè)備一覽表；實(shí)驗(yàn)室清潔消毒統(tǒng)計(jì)表；工作區(qū)溫度、濕度統(tǒng)計(jì)表；埋怨統(tǒng)計(jì)表；標(biāo)本超低溫保存統(tǒng)計(jì)表；應(yīng)急解決統(tǒng)計(jì)表；垃圾解決統(tǒng)計(jì)表；冰箱溫度統(tǒng)計(jì)表；水浴箱溫度統(tǒng)計(jì)表；移動(dòng)紫外消毒車(chē)統(tǒng)計(jì)表；設(shè)備校正統(tǒng)計(jì)表；檢測(cè)成果報(bào)告流程；報(bào)告單樣張；臨床送檢標(biāo)本流程圖；實(shí)驗(yàn)室組織構(gòu)造圖。三、臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)（1）填寫(xiě)臨床擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)表（a）基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室基本狀況涉及檢查科基本狀況特別是基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室基本運(yùn)行狀況，必要性與可行性，著重分析開(kāi)展項(xiàng)目運(yùn)行狀況、人員配備現(xiàn)狀、內(nèi)部質(zhì)量管理體系執(zhí)行狀況與效果分析。（b）應(yīng)提供資料醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證；擬設(shè)立基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室醫(yī)院的醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢查的需求狀況以及實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的預(yù)測(cè)分析；擬設(shè)基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室的設(shè)立平面圖；實(shí)驗(yàn)室重要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表；實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表（附實(shí)驗(yàn)室工作人員簡(jiǎn)歷）；重要儀器設(shè)備表；擬開(kāi)展的臨床基因診療項(xiàng)目；臨床基因診療質(zhì)量手冊(cè)；檢查報(bào)告單2份。（c）但愿驗(yàn)收時(shí)間根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室建設(shè)進(jìn)展?fàn)顩r和試運(yùn)行進(jìn)展，提出大致的現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)驗(yàn)收時(shí)間。（d）聲明志愿申請(qǐng)，承當(dāng)兩義務(wù)：恪守《臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室管理暫行方法》和《臨床基因診療實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》及有關(guān)規(guī)定；不管能否獲準(zhǔn)通過(guò)驗(yàn)收，預(yù)付驗(yàn)收階段的全部費(fèi)用。（2）衛(wèi)生部或省臨床檢查中心預(yù)審對(duì)申報(bào)文獻(xiàn)和現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行預(yù)驗(yàn)收，初步擬定與否進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)驗(yàn)收和驗(yàn)收時(shí)間。四、現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)驗(yàn)收衛(wèi)生部臨床檢查中心臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)任務(wù)書(shū)現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)專家構(gòu)組員構(gòu)成技術(shù)驗(yàn)收工作日程表驗(yàn)收組預(yù)備會(huì)初次會(huì)議現(xiàn)場(chǎng)驗(yàn)收實(shí)驗(yàn)室設(shè)立及儀器設(shè)備配備狀況實(shí)驗(yàn)室原則操作程序文獻(xiàn)有關(guān)統(tǒng)計(jì)現(xiàn)場(chǎng)考核現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)收組全體會(huì)議擬定驗(yàn)收結(jié)論和驗(yàn)收?qǐng)?bào)告末次會(huì)議驗(yàn)收組宣布驗(yàn)收結(jié)論實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人講話５.臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收體會(huì)（１）對(duì)驗(yàn)收文獻(xiàn)的學(xué)習(xí)不夠、理解不深，造成編制程序性文獻(xiàn)偏離，應(yīng)對(duì)照驗(yàn)收規(guī)定逐條貫徹，切實(shí)可行。（２）目的性認(rèn)識(shí)局限性：受老觀念的影響，總覺(jué)得實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收準(zhǔn)備工作是為專家而準(zhǔn)備的，沒(méi)意識(shí)到這是本實(shí)驗(yàn)室檢查質(zhì)量的內(nèi)在需要，覺(jué)得只要通過(guò)專家現(xiàn)場(chǎng)驗(yàn)收，拿到合格證書(shū)就萬(wàn)事大吉了。（３）質(zhì)量控制意識(shí)不強(qiáng)我們編寫(xiě)的質(zhì)量手冊(cè)的目的是規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作整個(gè)過(guò)程，做到實(shí)驗(yàn)過(guò)程有章可循，實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)有據(jù)可查，確保明驗(yàn)成果的可靠性和精確性。由于基因擴(kuò)增技術(shù)特殊性，即使嚴(yán)格按質(zhì)量手冊(cè)進(jìn)行操作，也難免出現(xiàn)錯(cuò)誤成果，因此還應(yīng)當(dāng)強(qiáng)化質(zhì)量控制意識(shí)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格設(shè)立質(zhì)控標(biāo)本，涉及試劑空白對(duì)照、陰性標(biāo)本對(duì)照、臨界值陽(yáng)性標(biāo)本對(duì)照等，分別監(jiān)測(cè)試劑配制與加樣過(guò)程中與否存在污染？標(biāo)本核酸模板提取過(guò)程中與否存在污染？標(biāo)本檢測(cè)過(guò)程中與否存在假陰性成果和成果與否精確？等。但有些醫(yī)院由于考慮到多個(gè)實(shí)際問(wèn)題而沒(méi)有較好貫徹，應(yīng)引發(fā)高度重視。（4）程序文獻(xiàn)實(shí)施難問(wèn)題在許多醫(yī)院，由于基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室是現(xiàn)在大多檢查科唯一通過(guò)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收的實(shí)驗(yàn)室，可能受周邊其它實(shí)驗(yàn)室不規(guī)范行為的干擾和存在人員配備方面問(wèn)題，可能出現(xiàn)文獻(xiàn)貫徹方面問(wèn)題，特別是原始標(biāo)本的接受和統(tǒng)計(jì)方面。（5）工作量少影響質(zhì)量確保體系實(shí)施嚴(yán)格按臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)規(guī)定通過(guò)驗(yàn)收的實(shí)驗(yàn)室，存在一定運(yùn)行成本，需要有一定臨床標(biāo)本量的支持；如果某一醫(yī)院醫(yī)療資源局限性，標(biāo)原來(lái)源局限性以支持運(yùn)行成本時(shí)，就會(huì)想方設(shè)法去減少運(yùn)行成本（涉及試劑成本和勞務(wù)成本），造成檢查質(zhì)量難以得到確保。因此建議欲建立臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室的單位，應(yīng)充足考慮自己醫(yī)療資源狀況，擬定是自己建立臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室合算？還是外送標(biāo)本合算？。同時(shí)衛(wèi)生部和省臨床檢查中心在初審應(yīng)充足考慮這方面狀況，以及現(xiàn)場(chǎng)驗(yàn)收專家應(yīng)嚴(yán)加把關(guān)。以上僅代表本人的意見(jiàn)和見(jiàn)解，若有不當(dāng)之處，請(qǐng)多多指正。摘自《華東區(qū)臨床檢查中心協(xié)作組臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理及新技術(shù)應(yīng)用高級(jí)研討會(huì)》臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)的書(shū)寫(xiě)許斌（江蘇省臨床檢查中心）1質(zhì)量管理的歷史1950年代臨床實(shí)驗(yàn)室開(kāi)始質(zhì)量控制（QualityControl,QC）;1980年代參考工業(yè)的GMP管理思路建立良好實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐準(zhǔn)則（GoodLaboratoryPractice,GLP）；進(jìn)入質(zhì)量確保（Qualityassurance,QA）；1990年代實(shí)驗(yàn)室引入質(zhì)量體系認(rèn)證及實(shí)驗(yàn)室承認(rèn)制度，實(shí)現(xiàn)全方面質(zhì)量管理（TQM，TotalQualityManagement）。質(zhì)量體系認(rèn)證——ISO9000（）；實(shí)驗(yàn)室承認(rèn)——ISO/IEC原則17025-《校準(zhǔn)和檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室資格的通用規(guī)定》；ISO/DIS原則15189-1999“醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理。”2美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證?發(fā)證機(jī)構(gòu)：HCFA（HealthGareFinancingAdministrations）,衛(wèi)生保健署?認(rèn)證根據(jù)，CLOA38，行業(yè)承認(rèn)，強(qiáng)制，體系+能力?認(rèn)證中介機(jī)構(gòu)：*JCAHO（JointCommissiononAccreditationofHealthcareOrganizations）衛(wèi)生機(jī)構(gòu)承認(rèn)聯(lián)合委員會(huì)*CAP(CollegeofAmericanPathologist)美國(guó)病理家學(xué)會(huì)*COLA（CommissiononOfficeLaboratory

Accred-itation）醫(yī)生實(shí)驗(yàn)室承認(rèn)委員會(huì)3我國(guó)實(shí)驗(yàn)室合格評(píng)定?承認(rèn)*根據(jù)：ISO/IEC17025，15189*國(guó)家評(píng)審，自愿，體系+能力?認(rèn)證*根據(jù)：ISO9000：*中介機(jī)構(gòu)，自愿，體系?行業(yè)技術(shù)驗(yàn)收*《臨床實(shí)驗(yàn)室管理方法》，《江蘇省醫(yī)院檢查科建設(shè)與管理規(guī)范》*省、市臨床檢查中心，強(qiáng)制，體系+能力4PCR驗(yàn)收意義及驗(yàn)收根據(jù)開(kāi)始的PCR實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收工作開(kāi)創(chuàng)臨床檢查技術(shù)準(zhǔn)入的先河、推動(dòng)臨床實(shí)驗(yàn)室原則化建設(shè)、規(guī)范檢測(cè)市場(chǎng)、建立醫(yī)療事故防止機(jī)制。其根據(jù)為：《臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室管理暫行方法》衛(wèi)醫(yī)發(fā)[]10號(hào)《臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》衛(wèi)檢字[]8號(hào)《有關(guān)成立臨床基因擴(kuò)增檢查專家組的告知》蘇衛(wèi)醫(yī)[]42號(hào)5規(guī)定應(yīng)含有的SOP（13個(gè)）儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)程序、儀器設(shè)備的校準(zhǔn)程序、儀器設(shè)備的操作程序、臨床標(biāo)本收集程序、臨床標(biāo)本的解決（核酸純化）程序、臨床標(biāo)本的保存程序、試劑的質(zhì)檢操作程序、消耗品購(gòu)置驗(yàn)收和儲(chǔ)存程序、廢棄物的解決程序、內(nèi)務(wù)管理程序、室內(nèi)質(zhì)量控制程序、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析檢測(cè)的操作程序、埋怨解決程序。6質(zhì)量管理體系定義

在質(zhì)量方面指揮和控制組織的管理體系。（QualityManagementSystem）管理體系是指建立方針和目的并實(shí)現(xiàn)這些目的的體系。實(shí)驗(yàn)室通過(guò)把組織機(jī)構(gòu)、職責(zé)、工作程序、質(zhì)量活動(dòng)過(guò)程和各類資源、信息等協(xié)調(diào)統(tǒng)一起來(lái)所形成的有機(jī)整體即為實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量體系。質(zhì)量體系的文獻(xiàn)構(gòu)成第一層：質(zhì)量手冊(cè)（大綱性文獻(xiàn)）；第二層：程序性文獻(xiàn)（體系要素的規(guī)定）；第三層：作業(yè)指導(dǎo)書(shū)（具體項(xiàng)目的操作指導(dǎo)）；第四層：統(tǒng)計(jì)涉及表格、簽名、原始統(tǒng)計(jì)、報(bào)告等質(zhì)量統(tǒng)計(jì)和技術(shù)統(tǒng)計(jì)。質(zhì)量手冊(cè)定義GB/T6583定義：質(zhì)量手冊(cè)是闡明一種實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量方針，并描述質(zhì)量體系的文獻(xiàn)。它既是質(zhì)量體系的表征形式，又是質(zhì)量體系建立和運(yùn)行的大綱。它對(duì)實(shí)驗(yàn)室的組織構(gòu)造（含職責(zé)）、程序、活動(dòng)能力（過(guò)程）和資源作出規(guī)定，是實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)久遵照的文獻(xiàn)。質(zhì)量手冊(cè)的分類根據(jù)手冊(cè)的內(nèi)容和用途分為二類：質(zhì)量確保手冊(cè)——用于證明，供客戶使用，質(zhì)量管理手冊(cè)——用于運(yùn)行，供實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部使用。質(zhì)量手冊(cè)的作用編寫(xiě)質(zhì)量手冊(cè)的健全和完善質(zhì)量體系的首要環(huán)節(jié)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)外因素合理調(diào)節(jié)、選擇體系要素，分派和貫徹質(zhì)量職責(zé)，理順管理關(guān)系，明確管理責(zé)任，合理安排各類文獻(xiàn)的層次，把實(shí)驗(yàn)室積累的經(jīng)驗(yàn)變成法規(guī)性文獻(xiàn)。協(xié)調(diào)各工作環(huán)節(jié)的準(zhǔn)則。內(nèi)部質(zhì)量審核的根據(jù)；對(duì)外證明實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量確保能力，提高客戶的信任度。質(zhì)量手冊(cè)的特性?以客戶為關(guān)注焦點(diǎn)：以病人為中心，為臨床服務(wù)?領(lǐng)導(dǎo)作用：發(fā)明使員工能夠充足參加實(shí)現(xiàn)目的的環(huán)境?全員參加：各負(fù)其責(zé)?過(guò)程辦法：將資源和活動(dòng)作為過(guò)程進(jìn)行有效管理?管理的系統(tǒng)辦法：各個(gè)過(guò)程的有效連接?持續(xù)改善：根據(jù)實(shí)際不停完善?基于事實(shí)的決策辦法：遵照科學(xué)，實(shí)事求是出報(bào)告?與供方互利的關(guān)系：互相協(xié)作，共同獲利質(zhì)量手冊(cè)的構(gòu)造?封面?同意頁(yè)：涉及實(shí)驗(yàn)室名稱、標(biāo)志，發(fā)行版次，生效日期，同意人簽名，手冊(cè)編號(hào)，受控狀態(tài)。?實(shí)驗(yàn)室公正性聲明?修訂頁(yè)：以表格描述修訂序號(hào)、修訂的章節(jié)條款和簡(jiǎn)要內(nèi)容、同意人及日期。?目錄：各章節(jié)條款的名稱及頁(yè)碼?前言：介紹實(shí)驗(yàn)室的普通狀況和手冊(cè)的合用范疇以及手冊(cè)中術(shù)語(yǔ)或縮略語(yǔ)的定義?手冊(cè)的管理：對(duì)手冊(cè)的保存、分發(fā)、評(píng)審、修訂以及保密作出規(guī)定?質(zhì)量方針及目的?組織構(gòu)造及人員責(zé)權(quán)利關(guān)系?要素描述：由系列SOP文獻(xiàn)對(duì)溯源、人、機(jī)、料、樣、法、測(cè)等質(zhì)量諸要素的陳說(shuō)?支持性文獻(xiàn)：涉及實(shí)驗(yàn)室平面圖、人員一覽表、儀器設(shè)備一覽表、引用原則及參考文獻(xiàn)等原則操作程序StandardOperationalProcedure,簡(jiǎn)稱SOP。程序的定義為：為進(jìn)行某項(xiàng)活動(dòng)所規(guī)定的途徑。SOP是臨床實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部以文獻(xiàn)的形式對(duì)質(zhì)量活動(dòng)用規(guī)定的辦法進(jìn)行持續(xù)而恰當(dāng)?shù)目刂?。?shí)驗(yàn)室的SOP應(yīng)涵蓋全部的質(zhì)量活動(dòng)，涉及檢測(cè)或校準(zhǔn)計(jì)劃、管理性程序、技術(shù)性程序、項(xiàng)目操作程序和統(tǒng)計(jì)表格等。由于影響每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量活動(dòng)的條件和因素不同，一種SOP只在某個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有效，而不一定合用于其它實(shí)驗(yàn)室。原則操作程序的普通規(guī)定?對(duì)