基于d-半乳糖衰老模型的蒙醫(yī)灸療法抗衰老組穴配伍規(guī)律研究

基于d-半乳糖衰老模型的蒙醫(yī)灸療法抗衰老組穴配伍規(guī)律研究

為了促進(jìn)蒙古醫(yī)學(xué)按摩的抗衰老研究，提高了多穴藥物聯(lián)合用藥的效率，已成為未來的發(fā)展趨勢(shì)。在分析按摩的原理并選擇有效的抗衰老素食者針的基礎(chǔ)上，本研究探討了蒙藥灸療法的抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者的多穴藥物聯(lián)合用藥規(guī)律。為多穴組合規(guī)律的研究奠定基礎(chǔ)，促進(jìn)和促進(jìn)蒙藥灸療法的抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者抗衰老素食者的抗衰老素食者的抗衰老素食者的抗衰老素食者的抗衰老素食者的抗衰老素食者的抗衰老素食者的抗衰老素食者的抗衰老素食者的抗衰老素食者的抗衰老素食者。1材料和方法1.1材料表面1.1.1動(dòng)物1.1.2設(shè)備1.1.3試劑盒D-半乳糖(南京建成生物研究中心,20080122)、血清超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物研究中心,20080328)、過氧化氫酶(CAT)試劑盒(南京建成生物研究中心,20080521)、丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物研究中心,20080321)、艾灸由北京中醫(yī)藥大學(xué)提供,直徑3mm,長(zhǎng)1cm、灸墊厚度0.5mm.1.2方法1.2.1飼料和水量將160只Wistar大鼠按體重隨機(jī)分成16組.分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、單穴組、雙穴組.造模前將大鼠雄雌分開,在干凈舒適環(huán)境中飼養(yǎng).每天將更換顆粒飼料飲用水和窩墊.實(shí)驗(yàn)第六周開始分別對(duì)所進(jìn)飼料和水量進(jìn)行記錄.1.2.2大鼠體重、體重變化除正常對(duì)照組外均用D-半乳糖按每天150mg/kg的比例頸背部皮下注射,正常對(duì)照組注射同劑量生理鹽水.在造摸期間每周稱一次大鼠體重,并觀察大鼠外部特征.造摸時(shí)間為6周.出現(xiàn)大鼠皮毛顏色變黃脫落,眼光變呆,動(dòng)作緩慢,出現(xiàn)無精打采、駝背、怕冷,體重增加不明顯等外部特征,與文獻(xiàn)報(bào)道一致,即造模成功.1.2.3對(duì)大鼠進(jìn)行不同穴從第七周開始施灸.其中對(duì)正常對(duì)照組和模型對(duì)照組只給固定條件,不做任何處理.對(duì)灸療組參照文獻(xiàn)對(duì)大鼠頂會(huì)穴、胃穴、腎穴、火衰穴剪去穴位周圍鼠毛,分單穴、雙穴、三穴進(jìn)行施灸.單穴每次施灸15min,雙穴、三穴合計(jì)施灸15min,7天為一療程,隔一天施灸一次(每次行3艾拄),共施灸3個(gè)療程.1.2.4學(xué)習(xí)技能檢測(cè)灸療結(jié)束前一周進(jìn)行該試驗(yàn).每階段進(jìn)行三次訓(xùn)練.每次訓(xùn)練后休息5分鐘.整個(gè)訓(xùn)練過程結(jié)束后休息2h并開始檢測(cè).記錄到達(dá)終點(diǎn)安全岸臺(tái)時(shí)所用的時(shí)間和在迷宮中出錯(cuò)次數(shù),5min中內(nèi)如果不出去的按5min記錄.從而檢測(cè)大鼠的學(xué)習(xí)技能,24h后再進(jìn)行檢查評(píng)定大鼠的記憶能力.1.3脾常見變化指數(shù)測(cè)定采用斷頭取血方法,將新取出的血放入高速離心機(jī),按3500r/min的速度進(jìn)行15分鐘離心后提取血清,超氧化物歧化酶(SOD)活性采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定,丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法測(cè)定,過氧化氫酶(CAT)含量采用比色法測(cè)定.之后取脾臟和胸腺用生理鹽水洗干凈后進(jìn)行稱重.計(jì)算出脾(胸腺)指數(shù)公式為:脾(胸腺)指數(shù)=脾(胸腺)重量(mg)/體重(g).1.4統(tǒng)計(jì)處理2結(jié)果2.1不同評(píng)估大鼠體重、體重增加、動(dòng)作比模型大鼠體重增長(zhǎng)變慢由表1可知,正常對(duì)照組與模型對(duì)照組比較,有明顯差異(P<0.01);表明造模后模型對(duì)照組體重增長(zhǎng)變緩慢.表2可知,造模后各灸療組與模型組大鼠體重比較,各灸療組大鼠體重增加比模型組快(P<0.05),說明造模成功后模型組大鼠體重增長(zhǎng)受限.除此之外我們還觀察到,模型大鼠動(dòng)作比正常對(duì)照組變遲緩,毛色枯黃,精神萎靡不振等外部特征.2.2不同種穴組sod活性的比較由表3可知,模型對(duì)照與組正常對(duì)照組比較,SOD活性活性明顯下降(P<0.01),施灸頂會(huì)穴、火衰穴、胃穴、腎穴,與模型對(duì)照組比較,SOD活性明顯提高(P<0.01),二穴組中的頂會(huì)穴與火衰穴配伍組和三穴組中的頂會(huì)穴、火衰穴、腎穴配伍組與模型組比較,SOD活性無明顯差異(P>0.05),其他配伍組SOD活性均明顯提高(P<0.01).2.3各組大鼠cat含量比較由表4可知,正常對(duì)照組與模型對(duì)照組比較,CAT含量明顯下降(P<0.01),施灸頂會(huì)穴、火衰穴、胃穴、腎穴,與模型對(duì)照組比較,明顯CAT含量明顯增多(P<0.01),二穴組中的頂會(huì)穴、火衰穴組和三穴組中的頂會(huì)穴、火衰穴、腎穴組與模型組比較,CAT含量無明顯差異(P>0.05),其他組與模型對(duì)照組比較CAT含量明顯增多(P<0.01).2.4不同穴位評(píng)估m(xù)da含量由表5可知,模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較,血清MDA含量明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01);施灸頂會(huì)穴、火衰穴、胃穴、腎穴與模型對(duì)照組比較,MDA含量明顯降低(P<0.01),二穴組中的頂會(huì)穴、腎穴配伍組和三穴組中的頂會(huì)穴、火衰穴、腎穴配伍組與模型組比較,MDA含量無明顯差異(P>0.05),其他各灸療組血清MDA與模型組比較均有明顯降低(P<0.05或P<0.01).2.5胸徑指數(shù)變化由表6可知,模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較,大鼠脾臟、胸腺指數(shù)明顯低于正常對(duì)照組(P<0.01);各灸療組大鼠脾臟、胸腺指數(shù)明顯高于模型對(duì)照組(P<0.05).大鼠脾臟、胸腺指數(shù)與正常對(duì)照組比較無明顯差異.2.6學(xué)習(xí)能力和記憶能力比較由表7可知,模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較,大鼠學(xué)習(xí)能力和記憶能力明顯低于正常對(duì)照組(P<0.01);頂會(huì)穴、火衰穴、胃穴、腎穴灸療組學(xué)習(xí)能力和記憶能力明顯高于模型對(duì)照組(P<0.01).頂會(huì)穴與火衰穴配伍組、腎穴與火衰穴配伍組、頂會(huì)穴、火衰穴、腎穴配伍組學(xué)習(xí)能力和記憶能力與模型對(duì)照組比較無明顯差異(P>0.05),其他配伍組學(xué)習(xí)能力和記憶能力與模型對(duì)照組比較均有明顯差異(P<0.01或P<0.05).3對(duì)不同穴位的配伍禁忌通過本實(shí)驗(yàn)我們可以得到以下幾個(gè)方面的結(jié)論:正常對(duì)照組與模型對(duì)照組體重變化、SOD、CAT、MDA變化、脾臟(胸腺)指數(shù)以及學(xué)習(xí)能力、記憶力等指標(biāo)的比較均有明顯差異(P<0.01或P<0.05),說明本實(shí)驗(yàn)所用模型成功.該研究從血清SOD、CAT、MDA變化、脾臟(胸腺)指數(shù)以及學(xué)習(xí)能力、記憶力等相關(guān)指標(biāo)驗(yàn)證了頂會(huì)穴、火衰穴、胃穴、腎穴等四個(gè)穴位的抗衰老作用,并有效地驗(yàn)證了蒙醫(yī)文獻(xiàn)記載.二穴組配伍中的頂會(huì)穴、火衰穴配伍組和三穴組配伍中的頂會(huì)穴、火衰穴、腎穴配伍組與模型組比較,SOD活性、MDA、CAT含量均無顯著差異,這可能說明,這三個(gè)具有抗衰老作用的單穴在配伍時(shí)互相抵消或三個(gè)穴位作用途徑并不是通過同樣機(jī)理完成的,這對(duì)灸療法抗衰老臨床組穴配伍給于實(shí)驗(yàn)學(xué)提示,也就是臨床上的配伍禁忌.我們從大鼠脾臟、胸腺指數(shù)變化上看,雖然各配伍組大鼠脾臟、胸腺指數(shù)比模型對(duì)照組明顯提高(P<0.01或P<0.05),但是大鼠脾臟、胸腺指數(shù)與正常對(duì)照組比較無明顯差異(P>0.05).說明蒙醫(yī)灸療法抗衰老是通過提高免疫力來達(dá)到目的的.頂會(huì)穴與火衰穴配伍組、腎穴與火衰穴配伍組以及頂會(huì)穴、火衰穴、腎穴配伍組學(xué)習(xí)能力、記憶力與模型對(duì)照組比較無明顯差異(P>0.05),說明頂會(huì)穴的“開竅醒目、通白脈”作用與腎穴的“固精補(bǔ)腎,補(bǔ)翁格吉勒”途徑與火衰穴“助胃火,促進(jìn)精華糟粕分化”等作用在同時(shí)施灸時(shí)可能互相干擾.除了上述配伍禁忌外,該四個(gè)穴位在抗衰老臨床上可以自由配伍組穴.該結(jié)論能夠?yàn)榭顾ダ吓R床提供客觀依據(jù).我們認(rèn)為蒙醫(yī)灸療法抗衰老途徑不僅僅表現(xiàn)在上述方面,可能還有其他作用途徑,該研究只是蒙醫(yī)灸療法作用機(jī)理研究的開端,我們下一步計(jì)劃,通過尋找更先進(jìn)成熟模型大鼠、更敏感、特異性更強(qiáng)客觀指標(biāo),努力揭示蒙醫(yī)灸療抗衰老奧秘,為蒙醫(yī)灸療法甚至各民族醫(yī)學(xué)外治療法作用機(jī)理研究提供更可靠的客觀依據(jù),促進(jìn)民族醫(yī)學(xué)外治療法作用機(jī)理研究.160只純種7個(gè)月齡Wistar大鼠