羅漢松生藥學(xué)研究

羅漢松生藥學(xué)研究

羅漢松是羅漢松科植物的羅漢松。d.修剪樹干，又名羅漢杉、長唐杉、土杉、金錢松、仙白、羅漢柏和江南白。這是一棵多年生的樹。產(chǎn)于江蘇、浙江、福建、安徽、江西、湖南、四川、云南、貴州、廣西、廣東等省區(qū),日本也有分布。根皮能活血,止痛,殺蟲,外用于風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、疥瘡;葉子能止血,用于咳血、吐血、風(fēng)濕跌打損傷;球果種子能補中益氣,補腎益肺,用于心胃疼痛、血虛面色萎黃。在廣東,羅漢松科植物羅漢松及其變種短葉羅漢松干燥葉或帶葉的枝梢曾當(dāng)做側(cè)柏葉藥材使用。廣東省藥材公司雖然在1966年下達文件,將羅漢松改為江南柏,但實際上仍存在混用的現(xiàn)象。為保證臨床用藥的安全有效,本文對羅漢松的性狀、顯微特征及理化鑒定方法進行研究,為該藥臨床應(yīng)用、質(zhì)量標準的制定及進一步研究打下基礎(chǔ)。1材料和機器1.1藥物、試劑和儀器本實驗所用羅漢松藥材分別是:樣品1(批號:20101201)采自廣州大學(xué)城廣東藥學(xué)院藥圃、樣品2(批號:20110103)采自廣州華南植物園、樣品3(批號:20110214)采自廣州大學(xué)城廣中醫(yī)藥圃。經(jīng)廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院中藥資源系李書淵教授鑒定為羅漢松科羅漢松屬植物羅漢松Podocarpusmacrophyllus;所用試劑為氯仿、甲醇、乙醇(95%),薄層層析硅膠G(青島海洋化工有限公司);穗花杉雙黃酮對照品(批號:111638-200402,購于中國藥物生物制品檢定所);β-蛻皮甾酮對照品(批號:111637-200301,購于中國藥物生物制品檢定所)。1.2實驗儀器和設(shè)備SK250LH超聲波清潔器(超聲功率為100W,上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)、YOKO-PN電動噴霧器(武漢藥科新科技開發(fā)有限公司)、HHS型電熱恒溫水浴鍋(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)、DGX-9143B-2電烘箱(上海?，攲嶒炘O(shè)備有限公司)、200克手提式高速中藥粉碎機DFT-200(溫嶺市林大機械有限公司)、NikonYS100生物顯微鏡(日本尼康公司)、HCCP11B·5架盤藥物天平(北京市宣武區(qū)天平廠),以及實驗常用器皿等。2方法和結(jié)果2.1羅漢松屬genus,清生長所依自然意識羅漢松為廣東地方習(xí)用藥材,始載于《本草綱目拾遺》:治心胃痛,大補元氣?！吨参锩麑崍D考》:滇南羅漢松,實大如拇指,綠首絳跗,形狀端好,跗嫩味甘,饤盤尤雅。俗云食之能益心氣,蓋與松柏子同功,治血虛面色萎黃,心胃痛?！墩憧柑炷可剿幹仓尽?“血虛面色萎黃”羅漢松屬常綠喬木,葉螺旋狀互生,條狀披針形,兩面中脈顯著,雌雄異株?；ㄆ?～5月。種子廣卵形或球形,8～9月成熟,初為深紅色,后變?yōu)樽仙?有白粉;其種子似頭狀,種托似袈裟,全形宛如披袈裟之羅漢,故而得名羅漢松。2.2花托的形狀商品藥材除葉外,有的還具帶葉小枝。枝條粗2～5mm,表面淡黃色褐色,粗糙,具似三角形的葉基脫落痕。葉條狀披針形,長7～12cm,寬4～7mm;先端短尖或鈍,上面灰綠色至暗褐色,下面黃綠色至淡棕色。質(zhì)脆,易折斷。氣微,味淡。種子橢圓形、類圓形或斜卵圓形,長8～11mm,直徑7～9mm。外表灰白色或棕褐色,多數(shù)被白霜,具突起的網(wǎng)紋,基部著生于倒鐘形的肉質(zhì)花托上。質(zhì)硬,不易破碎,折斷面種皮厚,中心粉白色。氣微,味淡。2.3輕微檢測2.3.1維管束內(nèi)木細胞組織組織(1)表皮:上表皮細胞一層,長方形,排列緊密,無氣孔。下表皮細胞比上表皮細胞長,呈長方形,外壁被角質(zhì)層。表面觀氣孔成行排列,與主脈平行。(2)葉肉:兩面葉;柵欄組織通過主脈,由1～2列細胞組成,細胞多呈長方形。海綿組織2～6列細胞,近圓形,排列疏松;草酸鈣方晶散在。(3)副轉(zhuǎn)輸組織:在維管束的兩側(cè),橫向伸長,5～7列細胞,與主脈維管束垂直,管胞壁上通常為伸長的單紋孔。(4)葉脈:只有一條明顯的主脈,無側(cè)脈,維管束外韌形,木質(zhì)部由20～35列徑向排列的管胞組成,每列細胞2～4個。在維管束的兩側(cè)各有一組轉(zhuǎn)輸組織,轉(zhuǎn)輸組織主要由轉(zhuǎn)輸管胞、蛋白質(zhì)細胞及轉(zhuǎn)輸薄壁細胞3部分構(gòu)成。韌皮部細胞呈徑向排列,在維管束和轉(zhuǎn)輸組織的周圍有一圈不明顯的維管束鞘,由厚壁組織2～3列細胞排列于主脈兩側(cè);下表皮與韌皮部之間有三個樹脂道。(5)射線細胞徑向排列整齊,每列12～15個,韌皮射線橫切面積大于木射線。見圖1。2.3.2氣孔石細胞結(jié)構(gòu)粉末淺綠色,氣微,味淡;(1)管胞大部分呈梭形,具緣紋孔管胞、較細長的環(huán)紋管胞和螺紋管胞常相伴存在。(2)氣孔直軸式,成行整齊排列,保衛(wèi)細胞壁增厚。(3)表皮細胞為長方形,排列緊密,寬50～80μm。(4)纖維梭形,長達1300μm,寬30～50μm,邊緣波浪狀彎曲。(6)石細胞呈楔形或類長圓形,長120～160μm,寬約50～60μm。(7)草酸鈣方晶大小不一。見圖2。2.4物理鑒定2.4.1供試品溶液制備供試品溶液的制備:取本品粉末8g,加80%甲醇50mL,超聲處理30分鐘,加熱回流1h,濾過,濾液用石油醚脫脂,蒸干,殘渣加水16mL,微熱使其溶解,將上述溶液加在D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑為1.5cm,柱高為15cm)上,用水300mL洗脫,棄去水液,再用20%乙醇100mL洗脫,棄去洗脫液,繼用50%乙醇100mL洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘渣加甲醇1mL使溶解,作為供試品溶液一。繼用80%乙醇100mL洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘渣加甲醇1mL使溶解,作為供試品溶液二。2.4.1.單一相環(huán)合物vib的合成取β-蛻皮甾酮對照品,加甲醇分別制成每1mL含1mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VIB)試驗,吸取上述供試品溶液一和對照品溶液各10μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以氯仿∶甲醇∶水∶甲酸(10∶4∶0.1∶0.05)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以5%的香草醛硫酸溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點,見圖3。2.4.1.聚酰胺薄膜的表征取穗花杉雙黃酮對照品,加甲醇分別制成每1mL含1mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VIB)試驗,吸取上述供試品溶液和對照品溶液各10μL,分別點于同一聚酰胺薄膜上,以氯仿∶甲醇∶甲酸(4∶2∶0.25)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,晾干,置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點,見圖4。3顯微研究發(fā)現(xiàn)了樣品的基本特征本課題對羅漢松科植物羅漢松進行系統(tǒng)的生藥學(xué)研究。其中,顯微鑒別發(fā)現(xiàn),葉子橫切面觀為兩面葉;在維管束的兩側(cè),橫向伸長有5～7列的副轉(zhuǎn)輸組織,與主脈維管束垂直。在維管束的兩側(cè)各有一組轉(zhuǎn)輸組織。其次,通過對其粉末的顯微研究發(fā)現(xiàn),管胞有具緣紋孔管胞、環(huán)紋管胞和螺紋管胞。氣孔直軸式,成行整齊排列,保衛(wèi)細胞壁增厚。纖維邊緣波浪狀彎曲。以上特征可作為鑒別羅漢松的重要依據(jù)。在大孔吸附樹脂純化樣品的實驗中,曾試以用20%,35%,50%,80%的一系列不同濃度的乙醇溶