第二章植物組織培養(yǎng)(園藝)課件

1第二章植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室和基本技術(shù)2.1組培實(shí)驗(yàn)室及基本設(shè)備

2.1.1組培實(shí)驗(yàn)室的組成及其功能

2.1.1.1準(zhǔn)備室（基本操作實(shí)驗(yàn)室）基本功能常用儀器和設(shè)備

22.1.1.2無菌操作室⒈功能⒉組成緩沖室（間）：接種室（間）：⒊無菌操作室的消毒⒋主要設(shè)備超凈工作臺(tái)金屬器械消毒器32.1.1.3培養(yǎng)室功能主要設(shè)備環(huán)境條件

2.1.1.4溫室功能452.1.2組培實(shí)驗(yàn)室的布局

2.1.2.1布局基本要求便于隔離，便于操作，便于滅菌和便于觀察。

2.1.2.2基本布局規(guī)律根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作程序排列實(shí)驗(yàn)室；接種室和培養(yǎng)室設(shè)在與外界環(huán)境隔離性好的區(qū)域；滅菌室與接種室相鄰；其他實(shí)驗(yàn)室的布局可根據(jù)條件，以方便使用為宜。6培養(yǎng)室準(zhǔn)備室滅菌室儲(chǔ)藏室接種室緩沖室植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室布局示意圖72.1.2.3設(shè)計(jì)組培實(shí)驗(yàn)室時(shí)的注意事項(xiàng)為了減少污染，實(shí)驗(yàn)室最好設(shè)一走廊且走廊上方最好安裝紫外燈；培養(yǎng)室最好設(shè)在南面，設(shè)大玻璃窗，以雙層玻璃窗為最好。如果培養(yǎng)室是設(shè)在房屋的邊側(cè)，其東邊或西邊的墻上也可設(shè)置大玻璃窗；培養(yǎng)室房間及門要小，而且密閉性要好，最好裝移門；無菌操作室要小，要設(shè)緩沖間，也最好裝移門，且門要稍大一些。82.1.3組培實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備

2.1.3.1器皿和器械類⒈玻璃器皿⒉器械鑷子類解剖刀剪刀接種針細(xì)菌過濾器

2.1.2.2儀器設(shè)備⒈無菌操作設(shè)備超凈工作臺(tái)9高壓蒸汽滅菌器10電熱烘箱接種器具消毒器1112⒉培養(yǎng)設(shè)備空調(diào)加濕器和去濕機(jī)定時(shí)器培養(yǎng)架搖床或旋轉(zhuǎn)床培養(yǎng)箱⒊藥品貯存和配制儀器設(shè)備冰箱天平酸度計(jì)⒋觀察分析儀器設(shè)備體視顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡倒置顯微鏡⒌其它儀器設(shè)備離心機(jī)恒溫水浴鍋13142.2培養(yǎng)基組培中培養(yǎng)基的重要性：基本培養(yǎng)基：指只含有維持離體植物細(xì)胞基本生命活動(dòng)所需的營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。通常包括水分、無機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分和有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分，不包括激素和天然有機(jī)附加物。完全培養(yǎng)基：指在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上另外附加激素或天然有機(jī)附加物所組成的培養(yǎng)基。152.2.1培養(yǎng)基的構(gòu)成

2.2.1.1水

2.2.1.2無機(jī)鹽類大量元素化合物微量元素化合物

2.2.1.3有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分糖類維生素類氨基酸類162.2.1.4植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑1、生長(zhǎng)素類常用類型：NAA,2,4-D,IBA,IAA功能培養(yǎng)基中常用濃度：10-7～10-5mol/L或0.1～10mg/L2、細(xì)胞分裂素類常用類型：6-BA,KT.TDZ,2-ip功能培養(yǎng)基中常用濃度：10-7～10-5mol/L或0.1～10mg/L17183、組織培養(yǎng)時(shí)，植物激素的使用規(guī)律在生長(zhǎng)素存在的條件下，細(xì)胞分裂素的作用有加強(qiáng)的趨勢(shì)，但二者在使用上有一定的順序關(guān)系，處理順序不同，培養(yǎng)物的分化狀態(tài)也不同。規(guī)律如下：

⑴先用生長(zhǎng)素處理，后用細(xì)胞分裂素處理，有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不容易分化,容易產(chǎn)生多倍體細(xì)胞。

⑵先用細(xì)胞分裂素處理，后用生長(zhǎng)素處理，細(xì)胞分裂也分化。⑶用生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素同時(shí)處理，細(xì)胞脫分化后分化頻率提高。但二者的使用濃度比值可以決定器官分化方向：生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素比值高時(shí)，有利于根分化，抑制芽形成。反之，有利于芽分化，抑制根形成。比值適中時(shí)，促進(jìn)愈傷組織的形成和生長(zhǎng)。19202.2.1.5天然有機(jī)添加物質(zhì)椰汁：CM100～150ml/L酵母提取液：YE0.01%～0.5%番茄汁：5%～10%馬鈴薯汁：100g/L～200g/L香蕉泥（汁）：150mg/L～200mg/L2.2.1.6培養(yǎng)基的pH值滅菌前pH值調(diào)控范圍：pH=5.7～5.8pH對(duì)培養(yǎng)基凝固的影響pH調(diào)節(jié)劑2.2.1.7凝固劑⒈瓊脂：用量范圍：3～10g/L影響瓊脂凝固的因素⒉Gelrite：植物凝膠2.2.1.8其他添加物活性炭（AC）、維生素C、抗生素等21222.2.2基本培養(yǎng)基的選擇

2.2.2.1基本培養(yǎng)基的類型⒈高無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基代表類型：MS，LS，BL，ER⒉硝酸鉀含量較高的培養(yǎng)基代表類型：B5，N6，SH⒊中等無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基代表類型：Nitsch，Miller，H⒋低無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基代表類型：White，WS，HE

2.2.2.2基本培養(yǎng)基的選擇MS培養(yǎng)基B5培養(yǎng)基N6培養(yǎng)基改良的White培養(yǎng)基WPM培養(yǎng)基★培養(yǎng)基是否適合所培養(yǎng)的植物，必須通過試驗(yàn)進(jìn)行篩選。23242.2.3培養(yǎng)基的配制

母液稀釋法2.2.3.1培養(yǎng)基母液的配制和保存

1、基本培養(yǎng)基母液的配制

⑴單配法⑵混配法①按照避免難溶性沉淀形成的原則和物質(zhì)種類的不同，將基本培養(yǎng)基配方所包括的物質(zhì)進(jìn)行分組；25

②基本培養(yǎng)基配方中物質(zhì)劃分組數(shù)的多少，即配制母液數(shù)的多少可根據(jù)實(shí)際情況而定，如MS培養(yǎng)基可以配制三液式、四液式、五液式等；例如：MS培養(yǎng)基五液式大量元素母液鈣鹽母液微量元素母液鐵鹽母液有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分母液

26

2、激素母液的配制⑴激素母液的濃度1～10mmol/L或0.1～1mg/L⑵配制方法生長(zhǎng)素類細(xì)胞分裂素類⑶培養(yǎng)基的保存27

2.2.3.2培養(yǎng)基的配制水準(zhǔn)備母液混合定容調(diào)pH加入瓊脂糖加熱溶解

培養(yǎng)器皿清洗干燥分裝封口高壓蒸汽滅菌冷卻凝固接種培養(yǎng)基具體配制操作過程：P21培養(yǎng)基配制程序282.3組培實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù)

2.3.1器皿和器具的洗滌P191.洗滌劑：無磷中性的肥皂粉、洗衣粉和洗潔精2.常用清洗方法洗滌劑清洗法超聲波清洗法

3.玻璃器皿的清洗新購置的玻璃器皿的清洗用過的培養(yǎng)器皿的清洗已經(jīng)污染的玻璃器皿的清洗29302.3.2滅菌

2.3.2.1器具的滅菌方法干熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法（濕熱滅菌法）火焰灼燒滅菌法

2.3.2.2培養(yǎng)基的滅菌方法高溫蒸汽滅菌法過濾除菌法31培養(yǎng)基滅菌方法

-------濕熱滅菌法培養(yǎng)基濕熱滅菌最少時(shí)間

液體容積（ml）121℃所需時(shí)間（min）

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