《茶青中吡蟲啉的快速檢測方法 膠體金免疫層析法》征求意見稿

1T/FQIA014-2023茶青中吡蟲啉的快速檢測方法膠體金免疫層析法本文件規(guī)定了吡蟲啉農(nóng)藥殘留的膠體金免疫層析法的原理、試劑與設備、分析步驟、結(jié)果判定。本文件適用于茶青中吡蟲啉農(nóng)藥殘留的快速檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法NY/T2102-2011茶葉抽樣技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義膠體金免疫層析法Colloidalgoldimmunochromatographicmethod膠體金免疫層析法就是以膠體金為顯色媒介，利用免疫學中抗原抗體特異性結(jié)合原理，在層析過程中完成這一反應，從而達到檢測目的的方法。4原理本方法采用競爭抑制免疫層析原理。試樣中吡蟲啉經(jīng)提取后與膠體金標記的吡蟲啉特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和檢測線（T線）上偶聯(lián)抗原的免疫反應，從而導致T線顏色深淺的變化。通過T線的顯色深淺及與質(zhì)控線（C線）顏色深淺比較，對試樣中吡蟲啉進行定性判定。5試劑與材料5.1試劑5.1.1甲醇（CH3OH，CAS號：67-56-1）。5.1.2樣品提取試劑：茶青試樣膠體金免疫層析檢測卡（或試紙條）專用提取試劑。5.2標準品吡蟲啉標準品的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1，純度≥99%。表1吡蟲啉標準品的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量C9H10ClN5O25.3標準溶液的配制5.3.1吡蟲啉標準儲備液（50mg/L）：準確稱取5.0mg（精確至0.01mg）吡蟲啉標準品（5.2），置于50mL燒杯中，加入適量甲醇（5.1）溶解后，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖2T/FQIA014-2023勻，配制成濃度為50mg/L的吡蟲啉標準儲備液。避光-18℃及以下條件保存，有效期6個月。5.3.2吡蟲啉標準工作溶液（0.5mg/L）：準確移取吡蟲啉標準儲備液（5.3.1）1.0mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，配制成濃度為0.5mg/L的吡蟲啉標準工作溶液，臨用現(xiàn)配。5.4材料吡蟲啉膠體金快速檢測試劑盒：一般包含吡蟲啉檢測卡（或試紙條）及配套試劑。5.5除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，所有實驗用水為GB/T6682中規(guī)定的二級水。6儀器和設備6.1電子天平：感量分別為0.01g和0.01mg。6.2移液器：量程為200μL、1000μL、56.3渦旋振蕩器。7分析步驟7.1試樣制備7.1.1按NY/T2102-2011茶葉抽樣技術(shù)規(guī)范進行茶青樣品抽樣，將樣品剪碎/切碎成小于1cm見方碎片，備用。7.1.2稱取1.0g剪碎/切碎的待測樣品于15mL離心管中；7.1.3加入8mL吡蟲啉提取試劑，渦旋振蕩或手動上下振蕩1min，靜置1min，上清液即為樣品提取液；7.1.4吸取100μL樣品提取液于1.5mL離心管中，再加入900μL吡蟲啉提取試劑，混勻即得樣品待測液。7.2試樣測試7.2.1從包裝袋中取出檢測卡（或試紙條），恢復至室溫，啟封后應在1h內(nèi)使用；7.2.2取樣品待測液100μL（約4滴）垂直滴于檢測卡中，見圖1；7.2.3在加樣后開始計時，5~8min讀取結(jié)果，其他時間讀取無效。圖1加樣示意圖8結(jié)果判定采用目視法，通過對比檢測區(qū)（T線）和質(zhì)控區(qū)（C線）色帶有無和顏色深淺按照圖2和如下原則進行結(jié)果判定：3T/FQIA014-20238.1陰性（-）：C線顯色，T線顯色比C線深或兩者接近，表示樣品中待檢物質(zhì)濃度低于檢測限。8.2陽性（+）：C線顯色，T線顯色比C線淺或不顯色，表示樣品中待檢物質(zhì)濃度大于等于檢測限。8.3無效：C線不顯色，表明不正確的操作過程或檢測卡已失效。在此情況下應再次檢查操作步驟，并用新的檢測卡或試紙條重新測試。9檢測指標9.1檢測限茶青中吡蟲啉殘留的檢測限為0.5mg/kg。9.2靈敏度靈敏度≥98%。9.3特異性特異性≥95%。9.4假陰性率假陰性率≤2%。9.5假陽性率假陽性率≤5%。注：性能指標計算方法見附錄A。4T/FQIA014-2023附錄A（規(guī)范性）定性方法性能指標計算表定性方法各個性能指標計算方法見表A.1。表A.1定性方法性能指標計算表N11N12N21N22N2.=N21+N22N.2=N12+N22顯著性差異（x2）x2=（|N12-N