【腫瘤標(biāo)志物不同檢驗方式的臨床研究進展綜述報告5000字（論文）】

腫瘤標(biāo)志物不同檢驗方式的臨床研究進展綜述報告目錄TOC\o"1-3"\h\u230301前言 6135672腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用 6308092.1腫瘤早期檢驗方式 6223582.2腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用史 630533檢測前樣品收集及樣本預(yù)處理 7213613.1前樣本收集 776703.2樣品預(yù)處理 787114腫瘤標(biāo)志物的主要檢測方法比較 716804.1酶聯(lián)免疫吸附檢測法 7230464.2免疫比濁法 858234.3化學(xué)發(fā)光免疫檢測 9231125小結(jié) 105287參考文獻 111前言腫瘤是臨床常見的疾病，指由于多種致病因素影響，機體細(xì)胞出現(xiàn)異常繁殖進而產(chǎn)生的局部腫塊，通常臨床將腫瘤分成良性與惡性兩種，良性腫瘤對于人類的危害較低，遠處轉(zhuǎn)移可能性低，且通過外科治療可以對病灶進行完全消除；可是惡性腫瘤具有發(fā)生突然、進展快速且容易轉(zhuǎn)移的特點，使得多數(shù)患者處于重度被消耗狀態(tài)，且當(dāng)前并無特效治愈方式，即使在早期通過切除也會在后期有一定復(fù)發(fā)幾率，因而如何準(zhǔn)確對惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展進行判斷成為當(dāng)前臨床關(guān)注的熱點。血清腫瘤標(biāo)志物屬于一類較為普及的鑒別診斷指標(biāo)，僅通過抽取血液即可對患者腫瘤生成和進展情況進行判斷，對于幫助臨床醫(yī)師了解腫瘤的發(fā)生及發(fā)展機制也有重要意義[1]。腫瘤標(biāo)志物水平的檢測標(biāo)準(zhǔn)受到不同檢驗方式的影響，故而不同檢測方式所檢驗出的腫瘤標(biāo)志物水平對于患者病情變化的判斷標(biāo)準(zhǔn)有所差異，而敏感度、特異度更高的檢測方式更有利于臨床醫(yī)師對患者病情進行判斷，酶聯(lián)免疫吸附檢測法（ELISA）、免疫比濁法（ITA）和化學(xué)發(fā)光免疫檢測法（CLIA）均在當(dāng)前臨床中被廣泛應(yīng)用[2]。本文通過對不同檢測方式的檢測特征及優(yōu)缺點進行闡述，來對腫瘤標(biāo)志物檢測方式的臨床選擇提供參考依據(jù)，使得臨床醫(yī)師可以根據(jù)各類檢測方式的特性，選擇合適的腫瘤標(biāo)志物檢測方式進行檢測，增加對患者病情的認(rèn)識。2腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用2.1腫瘤早期檢驗方式早期腫瘤一般無特異性癥狀表現(xiàn)，故而一般在經(jīng)歷醫(yī)學(xué)檢查時才可以檢測出來，包括CT檢查、彩超檢查等，不同類型腫瘤其檢測方式存在明顯差別，然而一般以獲取的病理組織切片的病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，但由于病理組織通常在手術(shù)中才能獲取，不具備一定的時效性，穿刺活檢也成為當(dāng)前提前診斷腫瘤性質(zhì)的重要手段，然而病理檢測需要對組織進行免疫組化檢驗，步驟較為繁瑣，且時間較長，為有創(chuàng)檢查，故而臨床對于腫瘤標(biāo)志物的檢測寄予了厚望[3]。2.2腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用史自本-周氏蛋白被發(fā)現(xiàn)依賴，腫瘤標(biāo)志物在臨床的應(yīng)用已經(jīng)近170年歷史，越來越多類型的癌癥將其進行運用，臨床對其應(yīng)用也逐漸應(yīng)用到篩查、診斷、預(yù)后及療效監(jiān)測當(dāng)中，使得其在腫瘤患者的診療中發(fā)揮重要效用。一般來說，腫瘤標(biāo)志物的合成與腫瘤細(xì)胞的形成、增殖產(chǎn)生密切關(guān)聯(lián)，且通過人體細(xì)胞、組織、血液或體液等成分進行表達，當(dāng)前臨床檢測方式包括生物化學(xué)、免疫學(xué)或分子生物學(xué)等技術(shù)，檢測包括定性或定量兩種[4]。作為一類非侵害性腫瘤診斷工具，發(fā)展前景較高，目前我國已經(jīng)命名的腫瘤標(biāo)志物達到100多種，但有關(guān)其具體檢測方式的應(yīng)用研究結(jié)果較少，而且靈敏度、特異度表現(xiàn)存在明顯不一致，故而需要進行臨床總結(jié)，對其進行描述，以確定其應(yīng)用價值。3檢測前樣品收集及樣本預(yù)處理3.1前樣本收集盡管腫瘤標(biāo)志物已經(jīng)成為當(dāng)前臨床實驗室常規(guī)檢查項目，但做好該標(biāo)志物的質(zhì)量保護可提高檢測準(zhǔn)確性，而恰當(dāng)?shù)臉悠肥占绞胶皖A(yù)處理方法對于增強腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)有重要意義。樣品收集主要通過收集患者空腹靜脈血標(biāo)本為主要方法，也有部分患者需要提取組織或細(xì)胞樣本進行分析，抽取靜脈血樣本時需保證在無菌環(huán)境下進行，尤其是抽血器械，需要在消毒后對患者食用，在抽取血液樣本后置于離心機低速運轉(zhuǎn)，以3000r/min速度進行離心，設(shè)定10min后采用移液器取上層血清檢測，若當(dāng)時條件不允許或需要長時間保存血樣本時，必須將血樣放于低溫狀態(tài)下進行保存，低溫可低至-80℃。檢測-80℃冰箱中的血樣本時，應(yīng)將其在室溫中復(fù)溫、復(fù)融、充分混合，切勿將樣本反復(fù)凍融[5]。3.2樣品預(yù)處理不同檢測方式樣品預(yù)處理方式有所差異，當(dāng)前臨床應(yīng)用較為廣泛的檢測方式包括ELISA、ITA及CLIA，但大致上步驟包括洗滌、稀釋、加溫、加入反應(yīng)物，并進行定性和定量分析等[6]。4腫瘤標(biāo)志物的主要檢測方法比較4.1酶聯(lián)免疫吸附檢測法ELISA根據(jù)抗原與抗體的特異性結(jié)合現(xiàn)象，可以利用酶與基質(zhì)之間的催化作用和對待測物的定量測定，來同時測定抗原和抗體。測定時，將待測樣品和相應(yīng)的抗原或抗體組合在固體載體上生成免疫復(fù)合物，將非結(jié)合抗原或抗體從免疫復(fù)合物中分離，然后抗原或抗體與載體上的復(fù)合物連接，催化基體與辣根過氧化物酶反應(yīng)，改變反應(yīng)液的顏色，并根據(jù)這種顏色差異實現(xiàn)對定量的判定[7]。該方法在臨床應(yīng)用最為廣泛，其優(yōu)點主要體現(xiàn)在靈敏度高、特異性強、對人體無害三點上。由于作用后的最終結(jié)果在一定程度上受到酶催化影響，進而被放大，甚至不用機器就可對顏色變化進行辨別，且能對皮克級物質(zhì)的顏色改變進行放大表現(xiàn)。此種檢測方式對抗原抗體結(jié)合位點較為看重，否則難以發(fā)生反應(yīng)。ELISA根據(jù)其反應(yīng)原理還可以分為直接法、間接法和雙抗體夾心法四類；直接方法是抗原涂在固體載體上，初級抗體和基質(zhì)通過辣根過氧化物酶連接，并在微孔板讀取器上進行測量，該方法操作方便，無交叉反應(yīng)；間接法在次級抗體上標(biāo)記辣根過氧化物酶，酶標(biāo)抗體與初級抗體結(jié)合，與酶標(biāo)板上的抗原結(jié)合。該方法適用于不適合標(biāo)記的抗體，可以保持初級抗體的最強免疫，缺點是容易發(fā)生交叉反應(yīng)；競爭法可用于檢測含有結(jié)合位點小于2的未純化抗原或低分子抗原的抗體。原則上，由酶標(biāo)記板固定的抗原或抗體與試驗物質(zhì)以及一定量的酶標(biāo)記抗體或抗原相結(jié)合，形成競爭關(guān)系。王海生等[8]采用ELISA對惡性腫瘤患者體內(nèi)癌胚抗原血清成分進行檢測，發(fā)現(xiàn)ELISA高中低值混合血清內(nèi)批內(nèi)或批間精密度均小于15%，其高中低回收率分別可達到93.8%、97.4%、94.6%，能滿足大批體檢標(biāo)本的檢測。試驗物質(zhì)的濃度越高，酶標(biāo)抗原或抗體越少，用儀器測定的吸光度值越低；雙重抗體夾心法適用于含有多個連接部位的聚合物蛋白質(zhì)的測定。由于受檢抗原與包膜抗體結(jié)合，與受檢抗原結(jié)合的酶標(biāo)抗體被孵育，通過過氧化氫的作用生成顏色，其特異性也很明顯[9]。ELISA可用于抗原和抗體兩者的檢測，由于檢測速度快，其實踐性強，其應(yīng)用領(lǐng)域逐漸擴大。任風(fēng)梅[10]采用微陣列酶聯(lián)免疫法對222例腫瘤患者體內(nèi)甲胎蛋白、癌胚抗原、糖類抗原199、糖類抗原125、前列腺特異性抗原、糖類抗原等6類血清腫瘤標(biāo)志物進行檢測，并采用受試者工作曲線對其檢測價值進行評估，發(fā)現(xiàn)其與電化學(xué)發(fā)光法有較佳的一致性，臨床應(yīng)用價值良好。4.2免疫比濁法ITA是按照一定比例稀釋抗原和過量抗體，使生成的可溶性免疫復(fù)合物能夠由于聚二乙醇的催化而生成微粒。免疫透射比濁法指蛋白及抗體反應(yīng)使溶液渾濁，光通過抗原抗體復(fù)合體后，就可以吸收。在一定濃度范圍內(nèi)，光吸收越大，免疫結(jié)合體的含量越高。紫外線分光光度計用于檢測光學(xué)濃度值，對測定的試樣進行定量測定。夏勇等[11]對不同試劑鉤狀效應(yīng)識別參數(shù)，發(fā)現(xiàn)該種方法可通過建立相關(guān)識別參數(shù)，使得其對血清的檢測結(jié)果更為準(zhǔn)確、可靠。。免疫散射比濁法基于以下事實：某波長的可見光被免疫共軛折射而改變方向，折射光的強度與共軛的含量成正比，該方法敏感度和標(biāo)準(zhǔn)偏差較ITA更高，且獲得結(jié)果速度更快，但檢測需要特定儀器，可能會耗費更多成本。徐繼等[12]采用免疫散射比濁法對肝癌患者外周血免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M蛋白含量進行檢測，從而使得單純使用動脈栓塞化療及加用參芪扶正注射液的患者免疫球蛋白水平呈現(xiàn)明顯差異，更好的對參芪扶正液的治療效果給予了參考。免疫乳膠比濁法比前兩種檢測方法的檢出限高，假陽性概率低。該方法將抗體涂在粒徑適中的乳膠微球表面形成復(fù)合體，與被測物結(jié)合產(chǎn)生凝聚現(xiàn)象。在可見光范圍內(nèi)，光透過膠乳粒子被儀器檢測出，檢測出的光的強度越強，被測量樣品的含量越高。劉靈燕等[13]采用快速乳膠散射ITA對尿視黃醇結(jié)合蛋白進行檢測，并對其精密度、線性范圍、準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度進行評價，認(rèn)為該種檢測方法具有靈敏度高、精密度高、準(zhǔn)確度高，抗干擾性強，故而臨床采用免疫乳膠比濁法檢測具有良好的應(yīng)用價值。4.3化學(xué)發(fā)光免疫檢測CLIA主要由抗原抗體檢測系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)構(gòu)成，免疫反應(yīng)特異性強，化學(xué)發(fā)光靈敏度高。通過與發(fā)光試劑標(biāo)記的抗原和抗體組合的免疫反應(yīng)產(chǎn)生免疫現(xiàn)象，加入化學(xué)基質(zhì)，在聚乙烯醇的催化反應(yīng)下發(fā)生電子轉(zhuǎn)移，氧化成刺激的中間體。這種狀態(tài)是不可持續(xù)的，很快就會恢復(fù)到以前狀態(tài)，多余的能量以可見光的形式釋放到外部[14]。此時，可以用化學(xué)發(fā)光檢測器檢測一定程度的光信號強度，可以定性且定量地確定測量對象的試料。張學(xué)棟等[15]將CLIA應(yīng)用于腫瘤標(biāo)志物甲胎蛋白的檢測，發(fā)現(xiàn)肝癌患者體內(nèi)甲胎蛋白含量明顯高于健康志愿者血清水平，認(rèn)為化學(xué)免疫分析法和時間分辨熒光免疫分析法均可取得較高的血清檢測準(zhǔn)確性，幫助臨床醫(yī)師盡早對肝癌患者病情進行判斷，從而實現(xiàn)早期治療，但臨床一般需根據(jù)實際情況對患者血清表達相關(guān)水平進行檢測。該種方法主要包括化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)、化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)、電化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)三類，各類方法標(biāo)志物有所不同。其中化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)反應(yīng)機理為氧化還原反應(yīng)，不會對人體產(chǎn)生明顯損害或是造成污染；化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)結(jié)合的底物與前者有所區(qū)別，在與結(jié)合抗原抗體分離后可發(fā)生能量躍遷，從而發(fā)生相應(yīng)強度的光，從而進行定量；電化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)兼具前兩者的高特異性和點化學(xué)發(fā)光高敏感性，電化學(xué)發(fā)光試劑主要用于抗體和抗原的標(biāo)記，磁珠作為將檢測對象及其相應(yīng)的抗體固定在磁微球上的固體載體[16]。免疫結(jié)合后，抗體免疫組合物在磁珠上生成，磁場施加到反應(yīng)介質(zhì)的外側(cè)，復(fù)合體被磁性機架吸附凝聚，彈跳物質(zhì)通過洗滌被去除，磁珠結(jié)合物的發(fā)光強度被測量，未知濃度的抗原被水平測量。陳國珍等[17]對分別對40例肺癌患者及40例正常人體內(nèi)血清腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原、糖鏈抗原125、神經(jīng)元特異性烯醇化酶、細(xì)胞角蛋白19片段抗原等進行聯(lián)合檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光法對于肺癌患者病情檢測的準(zhǔn)確率和敏感性明顯更高，更有利于臨床醫(yī)師對肺癌患者病情的判斷。5小結(jié)作為如今社會上人們最為恐懼的疾病，腫瘤患病的人數(shù)正在不斷上升。由于形成惡性腫瘤的致病因素錯綜復(fù)雜，在其形成的過程中潛伏期較長，難以被患者發(fā)現(xiàn)，因此隱匿性偏高，病灶一旦產(chǎn)生侵襲性，則對人體造成較強的致病性，并且容易于擴散，預(yù)后不理想，而了解腫瘤標(biāo)志物的檢測方式對于幫助臨床醫(yī)師認(rèn)識腫瘤的發(fā)生及發(fā)展有重要價值。其樣本收集及樣品預(yù)處理都應(yīng)保持質(zhì)控，降低外界環(huán)境對樣本收集的影響。此外本研究還對ELISA、ITA、CLIA等化學(xué)檢測法各自的特點進行敘述，認(rèn)為酶聯(lián)免疫吸附檢測在當(dāng)前的應(yīng)用較為廣泛，但具體采用的方法需根據(jù)實驗設(shè)備、腫瘤標(biāo)志物類別進行選擇。參考文獻[1]王述蓮,呼建民,何光倫,等.血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合血常規(guī)指標(biāo)檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用研究[J].標(biāo)記免疫分析與臨床,2017,24(1):4-7.[2]HiramatsuA,HanaokaH,UyamaY.Characteristicsondrugsafetymeasuresinjapanstratifiedbysystemorganclassesandtherapeuticcategoriesinrelationtotheapprovaldate[J].TherapeuticInnovationandRegulatoryScience,2020,54(7):1534-1540.[3]白順民,范哲.某院靜脈藥物調(diào)配中心抗腫瘤藥物不合理用藥分析[J].中國藥物警戒,2020,17(4):51-56.[4]FariaSC,SagebielT,PatnanaM,CoxV,ViswanathanC,LallC,QayyumA,BhosalePR.Tumormarkers:mythsandfactsunfolded.AbdomRadiol(NY).2019Apr;44(4):1575-1600.[5]袁錫裕,李慶賢,羅萍,等.胃癌腫瘤標(biāo)志物在術(shù)前血清中的表達情況與根治性切除可能性的相關(guān)性研究[J].中國綜合臨床,2021,37(1):67-73.[6]GiavarinaD,LippiG.Bloodvenoussamplecollection:Recommendationsoverviewandachecklisttoimprovequality[J].ClinBiochem.2017,50(10):568-573.[7]B?rsch-SupanA,WeissLM,B?rsch-SupanM,etal.Driedbloodspotcollection,samplequality,andfieldworkconditions:Structuralvalidationsforconversionintostandardvalues[J].AmJHumBiol.2021,33(4):e23517.[8]王海生.化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法和酶聯(lián)免疫吸附分析法檢測癌胚抗原的效果[J].臨床醫(yī)學(xué)研究與實踐,2018,3(36):151-152.[9]韓素桂,黃彩云,鄭璇,等.比較用凝集素微量離心柱法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測甲胎蛋白異質(zhì)體對原發(fā)性肝癌的診斷價值[J].中國臨床藥理