hplc-蒸發(fā)光散射檢測法測定注射用頭孢曲松鈉中na

hplc-蒸發(fā)光散射檢測法測定注射用頭孢曲松鈉中na

na-定量測定通常采用原子吸收分光光度法和離子選擇性電極法進行。針對金屬離子沒有紫外吸收的特點,色譜法中以電導檢測較為常用,而以離子色譜-蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)檢測藥物中Na+亦屢見報道。本實驗采用離子交換HPLC-ELSID測定注射用頭孢曲松鈉中Na+的含量,方法簡便準確,對頭孢曲松鈉的生產(chǎn)和臨床應用有一定的借鑒意義。供試樣品及訴訟資料泵:SHIMADZULC-6A,柱溫箱:SHIMADZUCTO-6A,檢測器:法國SEDEX75型蒸發(fā)光散射檢測器,記錄儀:SHIMADZUC-R7Aeplus?；鶞事然c:使用前在110℃干燥至恒重,Na+含量為39.34%。供試樣品來源及批號:注射用頭孢曲松鈉(1)20010904,(2)20010905和(3)20010902,均由浙江永寧制藥廠提供;(4)S100040273,(5)S100120700和(6)100120703,均由上海羅氏制藥公司提供;(7)010701,(8)010702和(9)010703,均由上海先鋒藥業(yè)公司提供;(10)010401,(11)010402和(12)010403,均由上海新亞藥業(yè)公司提供。氯化鉀、氯化鋰、醋酸銨、冰醋酸均為分析純;水為重蒸水;乙腈為HPLC級。方法和結(jié)果1流動相、靈敏度色譜柱:HypersilSCX(250mm×4.0mm,5μm,大連依利特公司裝填);柱溫:30℃;流動相:乙腈-0.03mol·L-1醋酸銨溶液(用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值為4.8)(20:80),流速:1.0mL·min-1;ELSD溫度:40℃,靈敏度(gain):6,霧化氣體(空氣)壓力:0.35MPa;進樣體積:20μL。2標準曲線法制備供試品溶液溶劑:0.03mol·L-1醋酸銨溶液,用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值為4.8。取本品約0.05g,精密稱定,置20mL量瓶中,加入溶劑溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液(Na+濃度約為200μg·mL-1);精密量取20μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖。另取在110℃干燥至恒重的氯化鈉對照品適量,精密稱定,用溶劑溶解并定量稀釋制成每1mL中約含0.12,0.25,0.5,1.0和2.Omg的對照品溶液(Na+濃度分別約為50,100,200,400和800μg·mL-1)。精密量取上述溶液各20μL,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,取對照品溶液中Na+峰面積的對數(shù)對其濃度的對數(shù)進行線性回歸,按所得的線性方程計算供試品中鈉的含量。在上述色譜條件下,色譜行為類似的一價堿金屬離子Li+,Na+和K+依次出峰,分離度分別為2.4和6.6,Na+峰理論板數(shù)大于11000,見圖1。4elsd結(jié)果分析精密稱取基準氯化鈉199.0mg,置50mL量瓶中,加溶劑[0.02mol·L-1醋酸銨溶液(用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值為4.8)]溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為線性方程第1點,精密量取5mL,置10mL量瓶中,加溶劑稀釋至刻度,搖勻,作為線性方程第2點,依次類推,直至線性方程第8點。8份溶液中Na+的濃度依次為1565.7,782.9,391.4,195.7,97.9,48.9,24.5和12.2μg·mL-1。取溶液在上述色譜條件下分別進樣分析。由于ELSD的響應非線性,峰面積(A)與組分濃度(C,μg·mL-1)的關系為A=aCb。二者的對數(shù)線性相關:logA=blogC+loga,其中b值主要與霧化器體積及儀器的構造有關,應在0.9～1.8之間。以logA為縱坐標,logC為橫坐標,則Na+的回歸方程為logA=2.6042+1.1456×logC,r=0.9999。本方法的線性良好,b值與經(jīng)驗值相符。在線性溶液濃度C的一定范圍內(nèi),峰面積A與濃度C可呈良好線性,如以峰面積A對Na+濃度C回歸,得A=1149×C-37745,r=0.9995。相比較而言,線性以A和C分別取對數(shù)后再回歸為好。5試驗和定量限制Na+的檢測限按信噪比3:1計為6μg·mL-1,定量限以線性方程的最低濃度計為12μg·mL-1。6加樣回收試驗6.1進樣精密度取Na+濃度為195.7μg·mL-1的氯化鈉對照品溶液,連續(xù)進樣5次,得平均峰面積的RSD為1.6%(n=5)。6.2方法精密度取同一批供試品,照樣品測定項下方法操作,測得鈉含量的平均值為7.08%,RSD=1.8%(n=6)。7系統(tǒng)穩(wěn)定性試驗取濃度為2.5mg·mL-1的樣品溶液,在室溫放置2d內(nèi)于不同時間分別進樣,考察系統(tǒng)的穩(wěn)定性情況。盡管樣品溶液顏色逐漸變黃,色譜圖中除頭孢曲松陰離子峰略有變化,Na+峰面積基本不變。8進樣測定取樣品約0.05g,精密稱定,置20mL量瓶中,加對照品適量,加溶劑溶解并稀釋至刻度,搖勻,照樣品測定項下方法操作,測得平均回收率為100.2%(n=5)。分別取不同來源的供試品適量,精密稱定,加溶劑溶解并稀釋制成約含Na+200μg·mL-1的溶液,在上述色譜條件下進樣分析,計算出供試品中鈉的含量,批號1～12鈉含量測定結(jié)果分別為7.0%,7.2%,7.0%,7.0%,7.1%,7.0%,7.2%,7.1%,6.9%,7.2%,7.1%,7.1%。頭孢曲松陰離子在近死時間處洗脫,不干擾Na+的測定。乙腈濃度對elsd檢測柱溫的影響由于離子色譜對流動相的離子強度有一定要求,并且ELSD檢測器中只能使用揮發(fā)性物質(zhì)作為流動相組分,因此醋酸銨成為流動相成分的首選,pH值選擇為醋酸的pKa值4.8,此時緩沖鹽的緩沖能力最強。醋酸銨溶液的pH值保持不變,Na+的保留隨緩沖液離子強度的增強而減弱,但Li+,Na+和K+相互間的分離度也相應降低。降低乙腈濃度,可增加流動相的離子強度,使Li+,Na+和K+的保留均減弱,減少分析時間。當乙腈濃度在20%～30%變化時,頭孢曲松陰離子的保留受乙腈濃度影響較小,始終在近死時間處洗脫,不干擾Na+的測定。升高柱溫,盡管柱壓可明顯降低,但Li+,Na+和K+相