一測多評法在中藥多成分同步質(zhì)量控制中的應(yīng)用

一測多評法在中藥多成分同步質(zhì)量控制中的應(yīng)用

中藥多成分、多作用的特點是，單一成分難以證明中藥的品質(zhì)。多成分同步質(zhì)量控制模式是建立并迅速普及的。另一方面，高參考水平和多指標(biāo)質(zhì)量控制的實際應(yīng)用受到限制。那么,能否找到一種方法既能實現(xiàn)多成分的質(zhì)量控制,又能克服對照品緊缺和檢測成本高的困難呢?本著“發(fā)揮科研為標(biāo)準(zhǔn)服務(wù),標(biāo)準(zhǔn)為生產(chǎn)實際服務(wù)”的指導(dǎo)思想,考慮到中藥有效成分多為類群、類群間存在某些內(nèi)在關(guān)系的特性,發(fā)揮科研工作者擁有大量單體成分(對照品)的優(yōu)勢,探索同類成分間的相關(guān)關(guān)系,在嚴(yán)格的方法學(xué)和交叉驗證的基礎(chǔ)上,使未來的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在只測定某個代表性成分(易得、廉價、有效),同時可計算出其它待測有效成分的含量,使其計算值與實測值符合定量方法學(xué)的要求。我們把這種質(zhì)量控制方法稱為“一測多評”法(quantitativeanalysisofmulti-componentsbysinglemarker,QAMS)。該方法得到了《中國藥典》2010年版一部的收錄,為進(jìn)一步規(guī)范QAMS的方法學(xué)考察、方法學(xué)驗證等內(nèi)容,制定本技術(shù)指南。1范圍本方法適用于對照品難得或制備成本高或不穩(wěn)定的情況下同類多成分同時測定。2相對校正因子及待測成分濃度的計算在一定的線性范圍,成分的量(質(zhì)量或濃度)與檢測器響應(yīng)成正比。在多指標(biāo)(s,a,b,…,i,…)質(zhì)量評價時,以藥材(或成藥)中某一典型有效成分作內(nèi)參物(s),建立內(nèi)參物與其它待測成分(a,b,…,i,…)間的相對校正因子(RCF,fsa,fsb,fsc,…),按下式計算:式中As為內(nèi)參物對照品s峰面積,Cs為內(nèi)參物對照品s濃度,Ai為某待測成分對照品i峰面積;Ci為某待測成分對照品i濃度。在方法學(xué)建立時,主要是求出內(nèi)參物與各待測成分間的RCF,并把它作為一個常數(shù)用于含量測定中[藥典附錄VID3(3)]。在測定含量時,內(nèi)參物(s)的濃度可按常規(guī)方法進(jìn)行測定(Cs)(藥典附錄ⅥD);應(yīng)用RCF(fsa,fsb,fsc,…),結(jié)合內(nèi)參物(s)實測值Cs,計算待測成分(a,b,…,i,…)的濃度,見公式2。式中Ai為供試品中待測成分i的峰面積,Ci為供試品中待測成分i的濃度,As為供試品中內(nèi)參物s的峰面積,Cs為供試品中內(nèi)參物s的濃度,fsi為內(nèi)參物s對待測成分i的校正因子。3重要內(nèi)容和技術(shù)要求3.1測試指標(biāo)的選擇3.1.1對照品的確定原則上應(yīng)選擇藥材中藥理作用比較明確的有效成分或與藥材臨床功效具有相關(guān)性的指標(biāo)性成分;作內(nèi)參物的對照品(s)應(yīng)是相對易得者;其他檢測指標(biāo)(a,b,…,i,…)應(yīng)是不易得到或制備難度大或成本高或不穩(wěn)定者。3.1.2質(zhì)控指標(biāo)驗證在3.1中選擇的待測成分,有時可能只是文獻(xiàn)數(shù)據(jù),能否作為QAMS質(zhì)控指標(biāo),需進(jìn)行實際驗證。因此,在確定了多成分同時測定的色譜條件后,應(yīng)對收集的樣品進(jìn)行初步分析,重點關(guān)注分析條件和各擬測成分峰面積范圍等信息。3.1.3測量對象的成分含量3.2樣品的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范選擇有代表性藥材作為研究樣本,樣本數(shù)應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)的相關(guān)要求,原則上擬建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的藥材樣品不低于40批。藥材應(yīng)包括主產(chǎn)地、道地產(chǎn)區(qū)、GAP基地的藥材和飲片樣本。3.3必要時體制實驗中所用的自制對照品需經(jīng)嚴(yán)格的純度檢查,純度應(yīng)大于98%,必要時注明含量,供校正用。配制內(nèi)參物對照品溶液:分別取各待測成分對照品(s,a,b,…,i,…)一定量,精密稱定,采用適宜的溶劑,制成含適宜濃度的混合溶液,用于RCF的計算。3.4hplc分析條件的確定參照(藥典附錄ⅥD)的要求,完成色譜條件的優(yōu)化。3.5方法研究3.5.1同時測定不同的組件參照藥典附錄ⅩⅧA的要求完成準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、定量限、檢測限、線性、范圍、耐用性等各項內(nèi)容的考察,應(yīng)符合要求。3.5.2rcf影響因素的確定QAMS法的重點在于測定各待測成分(s,a,b,…,i,…)間的RCF,并對其耐用性進(jìn)行系統(tǒng)考察。利用對照品溶液和確定的分析條件,建立內(nèi)參物(s)與待測成分(a,b,…,i,…)之間的RCF(fsa,fsb,fsi,…)。待測成分RCF耐用性系指在測定條件有小的變動時,RCF對影響的承受程度。為使所建立的各待測成分的RCF能用于常規(guī)檢驗,應(yīng)對待測成分RCF耐用性進(jìn)行全面的考察,如果測試條件要求苛刻,則應(yīng)加以限定。考察內(nèi)容包括:RCF在各種條件(流動相的組成比例、pH值、柱溫、流速及檢測波長等的微小改變時和使用不同儀器、不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱、不同實驗室、不同操作人員等)的耐用性。對于RCF值影響大的因素應(yīng)具體分析后加以限定,以確保方法有效。要求:HPLC色譜儀、常用色譜柱、實驗室、操作人均應(yīng)≥3。若某因素使RCF產(chǎn)生較大偏離時(如小于或大于RCF平均值的5%),應(yīng)增加考察數(shù)量,經(jīng)考察仍大于5%,應(yīng)對該因素進(jìn)行規(guī)定,并列入該品種的標(biāo)準(zhǔn)正文中。經(jīng)系統(tǒng)考察后,綜合考慮影響RCF的各種影響因素,在RSD小于5%的情況下,取3.5.2項下的平均值作為RCF值;大于5%時,應(yīng)對RCF影響大的因素進(jìn)行限定。3.6已選中3.6.1藥材中s,a,b,哌含量測定按照3.5.1項下建立的多成分同時測定方法,以各待測成分(s,a,b,…,i,…)為指標(biāo),以常規(guī)的方法(如外標(biāo)一點法或兩點法)測定它們在藥材中的含量。數(shù)據(jù)要求:測定樣品應(yīng)≥30批,以盡可能反映各成分的實際分布情況。3.6.2s含量的計算對3.6.1項下各樣品實測數(shù)據(jù),以成分s為參照物,利用3.5.2項下的RCF值,按照公式2計算,求出其他待測成分(a,b,…,i,…)的含量。3.6.3數(shù)據(jù)比較對實測值和計算值進(jìn)行分析比較(如相對偏差、t檢驗、準(zhǔn)確度等),以驗證QAMS法的合理性和可行性。3.6.4aams法的可行性、可重復(fù)性驗證用所建立的QAMS法進(jìn)行未測樣品的實際測算,得到待測成分的含量;然后再以多成分同時測定方法進(jìn)行反證,進(jìn)一步驗證QAMS法的可行性和可重復(fù)性。數(shù)據(jù)要求:驗證樣品應(yīng)≥10批。3.7納入標(biāo)準(zhǔn)和排除條件為了方便標(biāo)準(zhǔn)的使用,應(yīng)對合乎3.5.2項下的RCF在納入標(biāo)準(zhǔn)時做出規(guī)定:以樣品含量的計算值與實測值間相對偏差小于5%為考量尺度,盡可能少地保留RCF的有效數(shù)字。3.8保留時間差的確定色譜峰的準(zhǔn)確定位是保證QAMS法應(yīng)用的前提,一般可以采用保留時間差或相對保留值等參數(shù)結(jié)合色譜圖整體特征,以及每個峰的紫外吸收特征來定位其余待測成分(a,b,…,i,…)色譜峰。相對保留值指各待測成分與內(nèi)參物s間保留時間的比值,計算公式:ras=tRa/tRs;保留時間差指各待測成分與內(nèi)參物s間保留時間的差值,計算公式:ΔtRas=tRa-tRs。在3.5.2項下,應(yīng)分別考察相對保留值或保留時間差2種參數(shù)在不同品牌儀器和不同規(guī)格色譜柱中的重現(xiàn)性,選取RSD值小的一種參數(shù)作為峰定位依據(jù)。RSD<5%時,符合要求;