沙棘提取物對(duì)h

沙棘提取物對(duì)h

腫瘤是世界上最難治愈的三種主要疾病之一。在中國近10年中，腫瘤疾病已超過心腦血管疾病和糖尿病，排名第一。每年世界上新增病例在600百萬人以上,中國約占1/3,近200萬人。抗癌藥物的篩選主要有兩條途徑:一是人工化學(xué)合成,如烷化劑、抗代謝藥物、抗生素藥物、金屬絡(luò)合物等。二是從天然植物中篩選有效成分,如長春花堿、足葉乙苷、喜樹堿、紫杉醇等。作為化療人工合成和天然藥物,目前已在臨床上應(yīng)用的約有近200種,常用的約50多種,它們大多都是單體成分的化合物,而且,幾乎全部又都具有嚴(yán)重的細(xì)胞毒副作用,使患者服后自身產(chǎn)生諸多的不良反應(yīng),如對(duì)骨髓、胃腸道、泌尿、心臟、皮膚、神經(jīng)、頭發(fā)、過敏、免疫系統(tǒng)嚴(yán)重破壞等,可見化療單體藥物的研發(fā)和應(yīng)用已走向了難以克服的困境。中醫(yī)藥對(duì)癌癥的治療,雖然緩慢,缺乏明確的針對(duì)性,但毒副作用少而小。而且是多成分的“君臣佐史”配伍,達(dá)到了辯證與辨病結(jié)合,治標(biāo)與治本結(jié)合,局部與整體結(jié)合,扶正與驅(qū)邪結(jié)合,調(diào)節(jié)與治療結(jié)合,提高了患者的生存質(zhì)量,延長了生存壽命,受得了社會(huì)的極大重視。今后癌癥的治療,中西醫(yī)學(xué)的結(jié)合,將是一個(gè)有前景的、有實(shí)效的治療模式和方向。沙棘屬于藥食同源植物,具有廣泛的保健藥效作用;主要體現(xiàn)在沙棘具有協(xié)調(diào)肝、胃、脾、腎和心臟功能的平衡,祛痰利肺,活血化瘀、消炎生肌,抑菌殺菌,抗氧化,抗衰老,增加免疫力,修復(fù)細(xì)胞膜及功能,正調(diào)節(jié)補(bǔ)償代謝不平衡的綜合作用等。在抗癌抑瘤方面,作為食療,有可能對(duì)抗腫瘤具有一定的療效;沙棘黃酮對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29,對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株Bcap-37,對(duì)乳腺癌的化療,沙棘提取物對(duì)L7712白血病、S180肉瘤,都顯示了抗抑癌的功效。此外,常有消息報(bào)道,沙棘果、沙棘油對(duì)個(gè)別癌癥患者有明顯的療效,并大大延長了患者的生命,但是,這些病例又都缺乏正規(guī)實(shí)驗(yàn)和檢測(cè)數(shù)據(jù),難以得到學(xué)術(shù)界的普遍認(rèn)可。因此,本文利用衛(wèi)生級(jí)昆明小鼠動(dòng)物移植性腫瘤株系,作為體內(nèi)證實(shí)沙棘不同器官提取物對(duì)癌瘤的抑殺重要手段,進(jìn)行初步研究,澄清人們對(duì)沙棘抗癌的疑惑,并為沙棘抗癌綜合有效成分的研究與開發(fā)提供一些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論參考。1材料和方法1.1生藥原液的提取新鮮的沙棘葉、沙棘果、沙棘莖、沙棘根都取自山西省榆社縣野生中國沙棘。將它們粉碎40目后,用80%的乙醇回流提取3次,每次2h,合并提取液,在50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器真空濃縮至漿狀物,再水沉后,配成含1g/mL的生藥原液。沙棘油是超臨界CO2萃取的商品油。1.2氏腹水瘤eac瘤株由山西省中醫(yī)研究院動(dòng)物飼養(yǎng)室購買的昆明種衛(wèi)生級(jí)小白鼠,由河北省醫(yī)學(xué)院動(dòng)物研究室購買小鼠肝癌細(xì)胞株系H22,小鼠艾氏腹水瘤EAC瘤株,供做接瘤用。將新購的小白鼠飼養(yǎng)2～3d,選取生活、生長正常,體重較一致的活躍雄性小鼠,10只為一藥物處理組,重復(fù)3次,包括陰、陽性對(duì)照,編號(hào)稱重,在其前肢左翼下接種0.2mL/只的腹水瘤株,再每只小鼠每日灌胃2次實(shí)驗(yàn)藥物,每次0.4mL/只,培養(yǎng)10d后處死,解剖取瘤、脾臟、胸腺稱重,并觀察臟器變化,然后統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2結(jié)果與分析2.1對(duì)血清質(zhì)構(gòu)指標(biāo)的影響研究結(jié)果可見,高、中、低3個(gè)劑量組的沙棘葉提取物對(duì)小鼠肝癌H22瘤株都有明顯的抑瘤效果,而且統(tǒng)計(jì)顯示都為極顯著(p>0.01),高劑量組更為突出(表1)。和陰性(SN)、陽性(環(huán)磷酰胺)對(duì)照相比,抑瘤高的主要原因是它們都提高了脾指數(shù)和胸腺指數(shù),尤其是高劑量組效果更為明顯,比陰性對(duì)照脾指數(shù)提高了1.1倍,胸腺指數(shù)提高了1.3倍。比陽性對(duì)照(環(huán)磷酰胺)脾指數(shù)提高了2.4倍,胸腺指數(shù)提高了2.1倍。這表明沙棘葉提取物有顯著提高患病小鼠免疫功能的作用,因而顯示了對(duì)腫瘤的抑殺效果。2.2對(duì)血清抑瘤率的影響結(jié)果可見,高、中、低3個(gè)劑量組的沙棘果提取物對(duì)小鼠肝癌H22瘤株都有明顯的抑瘤效果,而且統(tǒng)計(jì)顯示都為極顯著(p>0.01),高劑量組更為突出,抑瘤率為46.69%(表2)。和陰性(SN)、陽性(環(huán)磷酰胺)對(duì)照相比,抑瘤高的主要原因是它們都提高了脾指數(shù)和胸腺指數(shù),尤其是高劑量組脾指數(shù)效果更為明顯,比陰性對(duì)照組提高了79.6%,比陽性對(duì)照組提高了1.8倍。胸腺指數(shù)高劑量組比陰性對(duì)照提高了1.1倍,比陽性對(duì)照組提高了1.8倍。2.3對(duì)血清抑瘤率的影響研究結(jié)果看到,高、中、低3個(gè)劑量組的沙棘莖提取物對(duì)小鼠肝癌H22瘤株都有不同程度的抑瘤效果,高、中、低量組統(tǒng)計(jì)顯示均為極顯著(p>0.01)(表3)。高劑量組抑瘤率為37.8%。和陰性(SN)對(duì)照相比,抑瘤高的主要原因是高劑量組脾指數(shù)比對(duì)照高出41.94%,但胸腺指數(shù)反而降低了58.14%。可見,沙棘莖提取物抑瘤效果,低于沙棘葉、果提取物的主要原因是未能提高荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)。2.4中劑量顯效試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果表明,沙棘根提取物對(duì)小鼠肝癌H22瘤株的抑殺效率,只有中劑量顯效最高,高劑量次之,低劑量最差。中劑量表現(xiàn)較好的主要原因是脾指數(shù)雖然降低了24.06%,但胸腺指數(shù)提高了12.82%(表4)?？梢姼叩男叵僦笖?shù)對(duì)抑瘤的效果比脾指數(shù)更為重要。2.5沙棘籽油低劑量對(duì)小鼠免疫指標(biāo)的影響表5的數(shù)據(jù)表明,高、中、低3個(gè)劑量組的沙棘籽油對(duì)小鼠EAC瘤株都有不同程度的較高抑瘤效果,高劑量組、中劑量組和低量組,統(tǒng)計(jì)都顯示為極顯著(p>0.01)。高劑量組和中劑量組的抑瘤率分別為36.89%和31.56%。和陰性對(duì)照相比,3個(gè)劑量組都提高了脾重24.35%～61.14%,脾指數(shù)20%～55%;胸腺重25.29%～60.92%,胸腺指數(shù)22.22%～55.55%。但和葉、果、莖不同的是,低劑量組脾重、脾指數(shù)、胸腺重、胸腺指數(shù)都高于高、中劑量組處理。表明,沙棘籽油低劑量組更有利于提高小鼠免疫活力,但抑瘤效果偏低。總的來看,沙棘籽油也是提高了荷瘤小鼠的自身免疫抵抗力。2.6沙棘對(duì)葉、果、莖、油的聯(lián)合作用從圖1的研究結(jié)果來看,供試小鼠的體重實(shí)驗(yàn)后都比實(shí)驗(yàn)前有所提高,只是莖、根的增重差異,表現(xiàn)的不整齊,表明初期荷瘤小鼠對(duì)體重影響不明顯。從圖2抑瘤效果來看,6個(gè)器官部位的15個(gè)不同處理劑量組中,有10個(gè)劑量組的抑瘤率,都超過30%,占到了處理總數(shù)的66.6%,他們是:葉、果提取物的高、中、低劑量組,莖的高劑量組,根的中劑量組,油的高、中劑量組,其中抑瘤率最高的是葉和果的高劑量組。圖2資料還表明,莖的中、低劑量組,根的高、低劑量組和油的低劑量組,雖然抑瘤率都沒有超過30%,但抑瘤率都在13.31～23.96%,表明沙棘各器官提取物對(duì)小鼠實(shí)體瘤的抑殺作用都有非常明顯的效果。葉、果、莖的3個(gè)處理劑量組的脾指數(shù)規(guī)律是一致的,都突出表現(xiàn)出劑量效應(yīng),高劑量組抑瘤率大于中劑量組,中劑量組大于低劑量組。葉的脾指數(shù)最高,又高于果和莖。油的脾指數(shù)又突出表現(xiàn)出逆劑量效應(yīng),低劑量組的脾指數(shù)最高。根的3個(gè)劑量組脾指數(shù)都比對(duì)照低,因此,根的抑瘤率也低于葉、果、莖、油(圖3)。可見,脾指數(shù)高低的絕對(duì)值是判斷抗癌效果的一個(gè)主重要指標(biāo)。沙棘不同器官提取物對(duì)小鼠實(shí)體瘤的胸腺指數(shù)的影響更為突出,葉和果的3個(gè)劑量組胸腺指數(shù)的規(guī)律是一致的,都突出表現(xiàn)出高劑量組的胸腺指數(shù)最高,但3個(gè)劑量組之間絕對(duì)值相差不大,葉又高于果。莖的3個(gè)劑量組胸腺指數(shù)都低于對(duì)照,低劑量組胸腺指數(shù)最高。根的3個(gè)劑量組胸腺指數(shù)表現(xiàn)的不規(guī)律,除中劑量組高于對(duì)照外,其他兩個(gè)劑量組胸腺指數(shù)都低于對(duì)照。油的3個(gè)劑量組胸腺指數(shù)的規(guī)律,卻表現(xiàn)出低劑量組最高,呈逆劑量效應(yīng)。從胸腺指數(shù)的絕對(duì)值來看,凡是胸腺指數(shù)高的劑量組,其抗癌率也高,因此,胸腺指數(shù)比脾指數(shù)與抑癌的關(guān)系更為密切(圖4)。3沙棘促進(jìn)小鼠體免疫的作用機(jī)制用沙棘5種器官的提取物,對(duì)患H22和EAC實(shí)體瘤的小鼠,進(jìn)行灌胃實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,它們都具有顯著的抑瘤效果。5種器官提取物的15個(gè)高、中、低不同處理劑量組中,有10個(gè)劑量組的抑瘤率都超過了30%,占到處理總數(shù)的66.6%。他們是葉,果提取物的高、中、低劑量組,莖的高劑量組,根的中劑量組,油的高、中劑量組。其中葉的高劑量組其抑瘤率為58%,果的高劑量組抑瘤率為46.69%,而且都具有明顯的劑量效應(yīng)。在15個(gè)處理中,根的低劑量組抑瘤率最低為13.31%?？梢?沙棘不同器官的提取物,對(duì)患H22和EAC實(shí)體瘤的小鼠都有極為顯著的抑瘤效果,總體來看,抑瘤率高低表現(xiàn)為:葉>果>油>莖>根。從實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死小鼠解剖內(nèi)臟檢查來看,內(nèi)臟沒有任何異常表現(xiàn),相反,肝、脾、胃的顏色比對(duì)照更為鮮艷和飽滿,表明,沙棘5種器官的提取物不僅沒有顯示出毒性,而且有利于促進(jìn)臟器的功能和活力。從患H22和EAC實(shí)體瘤的小鼠脾重、脾指數(shù)來看,除莖的低劑量組,根的3個(gè)劑量組都略低于對(duì)照外,其余所有的處理都高于對(duì)照,這和他們高的抑瘤率是成正比的。葉、果、油提取物表現(xiàn)的更為突出。表明脾重和脾指數(shù)的提高,是小鼠抗實(shí)體瘤的重要原因之一。從患H22和EAC實(shí)體瘤的小鼠胸腺重、胸腺指數(shù)來看,除莖的3個(gè)處理,根的高、低劑量處理組都低于對(duì)照外,其余所有的處理都高于對(duì)照,尤其是葉和果提取物的所有劑量處理組的胸腺指數(shù)絕對(duì)值都大大高于對(duì)照一倍以上。因此,它們顯著的抑瘤效果與胸腺指數(shù)的提高,是小鼠抗實(shí)體瘤的另一個(gè)重要原因之一。對(duì)小鼠實(shí)體瘤的抑瘤效果相比,胸腺指數(shù)指數(shù)的提高更優(yōu)于脾指數(shù)。沙棘不同器官提取物,所以具有很高的抑瘤效率,是與它們都含有重多抗氧化、提高免疫活性、修復(fù)損傷細(xì)胞、促進(jìn)瘤細(xì)胞凋亡的成分有關(guān)。沙棘含有多糖,多糖能有效抑制H22肝癌小鼠腫瘤生長,增加胸腺指數(shù)、脾指數(shù),有效地阻止腫瘤機(jī)體免疫器官的萎縮,增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能,通過多種途徑的整合調(diào)節(jié)作用,顯示出了較強(qiáng)抗腫瘤活性。沙棘含有黃酮類和萜類化合物,黃酮類和萜類組分的配伍,具有明顯的協(xié)同抑瘤活性,對(duì)Lewis小鼠腫瘤生長具有抑制作用,且提高了荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)。沙棘含有花青素,花青素是水溶性黃酮,花青素對(duì)抑制結(jié)腸癌有效,因?yàn)樗种屏思?xì)胞的增殖和誘導(dǎo)了癌細(xì)胞的凋亡。沙棘葉含有茶多酚,茶多酚可抑制Lewis肺癌生長,其抗癌作用機(jī)制與抗氧化作用有關(guān)。沙棘含有Vc,Vc可以預(yù)防腫瘤,因?yàn)?Vc作為電子供體在細(xì)胞外液中產(chǎn)生過氧化氫殺傷腫瘤細(xì)胞、干擾腫瘤細(xì)胞周期、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、減輕放、化療的傷害。沙棘含有VE,VE已證實(shí)其可誘導(dǎo)乳腺癌、前列腺癌、舌癌及腎癌等惡性腫瘤細(xì)胞凋亡,而對(duì)正常細(xì)胞組織沒有毒性。沙棘含有胡蘿卜素,類胡蘿卜素可預(yù)防、治療乳腺癌和減少炎癥。沙棘油靜脈乳注射,有明顯降荷S180肉瘤小鼠的瘤重,并且可使骨髓有核細(xì)胞數(shù)、外周血白細(xì)胞數(shù)、吞噬系數(shù)、脾指數(shù)明顯升高,對(duì)化療藥物環(huán)磷酰胺有增效減毒作用,顯示了沙棘油能明顯提高非特異性免疫功能。沙棘果油對(duì)小鼠有明顯的抗炎作用,促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬功能,增加脾重和脾指數(shù),促進(jìn)體內(nèi)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能,促進(jìn)了體液免疫和細(xì)胞免疫功能。用沙棘籽油給小鼠灌胃,可提高小鼠脾重量和脾指數(shù),巨噬細(xì)胞吞噬,溶血空斑,溶血素形成,E-玫瑰花結(jié)形成和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。可見,沙棘籽油對(duì)小鼠的非特異性免疫功能,體液免疫和細(xì)胞免疫均有明顯的促進(jìn)作用。沙棘油除含有VE、胡蘿卜素、黃酮外,不飽和脂肪酸是其主要成分。不飽和脂肪酸的抗代謝物,常常用于治療惡性腫瘤。對(duì)淋巴瘤擴(kuò)散,裸小鼠白血病,黑素瘤,肺腺癌,乳腺癌,骨肉瘤,均可以誘導(dǎo)部分或全部腫瘤退縮。不飽和脂肪酸與甘氨酸和氨基腺嘌呤組成的七碳氨基糖,在體內(nèi)具有抗腫瘤活性,對(duì)結(jié)腸