沙棘提取物對h

沙棘提取物對h

腫瘤是世界上最難治愈的三種主要疾病之一。在中國近10年中，腫瘤疾病已超過心腦血管疾病和糖尿病，排名第一。每年世界上新增病例在600百萬人以上,中國約占1/3,近200萬人?？拱┧幬锏暮Y選主要有兩條途徑:一是人工化學(xué)合成,如烷化劑、抗代謝藥物、抗生素藥物、金屬絡(luò)合物等。二是從天然植物中篩選有效成分,如長春花堿、足葉乙苷、喜樹堿、紫杉醇等。作為化療人工合成和天然藥物,目前已在臨床上應(yīng)用的約有近200種,常用的約50多種,它們大多都是單體成分的化合物,而且,幾乎全部又都具有嚴(yán)重的細(xì)胞毒副作用,使患者服后自身產(chǎn)生諸多的不良反應(yīng),如對骨髓、胃腸道、泌尿、心臟、皮膚、神經(jīng)、頭發(fā)、過敏、免疫系統(tǒng)嚴(yán)重破壞等,可見化療單體藥物的研發(fā)和應(yīng)用已走向了難以克服的困境。中醫(yī)藥對癌癥的治療,雖然緩慢,缺乏明確的針對性,但毒副作用少而小。而且是多成分的“君臣佐史”配伍,達(dá)到了辯證與辨病結(jié)合,治標(biāo)與治本結(jié)合,局部與整體結(jié)合,扶正與驅(qū)邪結(jié)合,調(diào)節(jié)與治療結(jié)合,提高了患者的生存質(zhì)量,延長了生存壽命,受得了社會的極大重視。今后癌癥的治療,中西醫(yī)學(xué)的結(jié)合,將是一個有前景的、有實效的治療模式和方向。沙棘屬于藥食同源植物,具有廣泛的保健藥效作用;主要體現(xiàn)在沙棘具有協(xié)調(diào)肝、胃、脾、腎和心臟功能的平衡,祛痰利肺,活血化瘀、消炎生肌,抑菌殺菌,抗氧化,抗衰老,增加免疫力,修復(fù)細(xì)胞膜及功能,正調(diào)節(jié)補(bǔ)償代謝不平衡的綜合作用等。在抗癌抑瘤方面,作為食療,有可能對抗腫瘤具有一定的療效;沙棘黃酮對人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29,對人乳腺癌細(xì)胞株Bcap-37,對乳腺癌的化療,沙棘提取物對L7712白血病、S180肉瘤,都顯示了抗抑癌的功效。此外,常有消息報道,沙棘果、沙棘油對個別癌癥患者有明顯的療效,并大大延長了患者的生命,但是,這些病例又都缺乏正規(guī)實驗和檢測數(shù)據(jù),難以得到學(xué)術(shù)界的普遍認(rèn)可。因此,本文利用衛(wèi)生級昆明小鼠動物移植性腫瘤株系,作為體內(nèi)證實沙棘不同器官提取物對癌瘤的抑殺重要手段,進(jìn)行初步研究,澄清人們對沙棘抗癌的疑惑,并為沙棘抗癌綜合有效成分的研究與開發(fā)提供一些實驗數(shù)據(jù)和理論參考。1材料和方法1.1生藥原液的提取新鮮的沙棘葉、沙棘果、沙棘莖、沙棘根都取自山西省榆社縣野生中國沙棘。將它們粉碎40目后,用80%的乙醇回流提取3次,每次2h,合并提取液,在50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器真空濃縮至漿狀物,再水沉后,配成含1g/mL的生藥原液。沙棘油是超臨界CO2萃取的商品油。1.2氏腹水瘤eac瘤株由山西省中醫(yī)研究院動物飼養(yǎng)室購買的昆明種衛(wèi)生級小白鼠,由河北省醫(yī)學(xué)院動物研究室購買小鼠肝癌細(xì)胞株系H22,小鼠艾氏腹水瘤EAC瘤株,供做接瘤用。將新購的小白鼠飼養(yǎng)2～3d,選取生活、生長正常,體重較一致的活躍雄性小鼠,10只為一藥物處理組,重復(fù)3次,包括陰、陽性對照,編號稱重,在其前肢左翼下接種0.2mL/只的腹水瘤株,再每只小鼠每日灌胃2次實驗藥物,每次0.4mL/只,培養(yǎng)10d后處死,解剖取瘤、脾臟、胸腺稱重,并觀察臟器變化,然后統(tǒng)計實驗結(jié)果。2結(jié)果與分析2.1對血清質(zhì)構(gòu)指標(biāo)的影響研究結(jié)果可見,高、中、低3個劑量組的沙棘葉提取物對小鼠肝癌H22瘤株都有明顯的抑瘤效果,而且統(tǒng)計顯示都為極顯著(p>0.01),高劑量組更為突出(表1)。和陰性(SN)、陽性(環(huán)磷酰胺)對照相比,抑瘤高的主要原因是它們都提高了脾指數(shù)和胸腺指數(shù),尤其是高劑量組效果更為明顯,比陰性對照脾指數(shù)提高了1.1倍,胸腺指數(shù)提高了1.3倍。比陽性對照(環(huán)磷酰胺)脾指數(shù)提高了2.4倍,胸腺指數(shù)提高了2.1倍。這表明沙棘葉提取物有顯著提高患病小鼠免疫功能的作用,因而顯示了對腫瘤的抑殺效果。2.2對血清抑瘤率的影響結(jié)果可見,高、中、低3個劑量組的沙棘果提取物對小鼠肝癌H22瘤株都有明顯的抑瘤效果,而且統(tǒng)計顯示都為極顯著(p>0.01),高劑量組更為突出,抑瘤率為46.69%(表2)。和陰性(SN)、陽性(環(huán)磷酰胺)對照相比,抑瘤高的主要原因是它們都提高了脾指數(shù)和胸腺指數(shù),尤其是高劑量組脾指數(shù)效果更為明顯,比陰性對照組提高了79.6%,比陽性對照組提高了1.8倍。胸腺指數(shù)高劑量組比陰性對照提高了1.1倍,比陽性對照組提高了1.8倍。2.3對血清抑瘤率的影響研究結(jié)果看到,高、中、低3個劑量組的沙棘莖提取物對小鼠肝癌H22瘤株都有不同程度的抑瘤效果,高、中、低量組統(tǒng)計顯示均為極顯著(p>0.01)(表3)。高劑量組抑瘤率為37.8%。和陰性(SN)對照相比,抑瘤高的主要原因是高劑量組脾指數(shù)比對照高出41.94%,但胸腺指數(shù)反而降低了58.14%?？梢?沙棘莖提取物抑瘤效果,低于沙棘葉、果提取物的主要原因是未能提高荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)。2.4中劑量顯效試驗測定結(jié)果表明,沙棘根提取物對小鼠肝癌H22瘤株的抑殺效率,只有中劑量顯效最高,高劑量次之,低劑量最差。中劑量表現(xiàn)較好的主要原因是脾指數(shù)雖然降低了24.06%,但胸腺指數(shù)提高了12.82%(表4)?？梢姼叩男叵僦笖?shù)對抑瘤的效果比脾指數(shù)更為重要。2.5沙棘籽油低劑量對小鼠免疫指標(biāo)的影響表5的數(shù)據(jù)表明,高、中、低3個劑量組的沙棘籽油對小鼠EAC瘤株都有不同程度的較高抑瘤效果,高劑量組、中劑量組和低量組,統(tǒng)計都顯示為極顯著(p>0.01)。高劑量組和中劑量組的抑瘤率分別為36.89%和31.56%。和陰性對照相比,3個劑量組都提高了脾重24.35%～61.14%,脾指數(shù)20%～55%;胸腺重25.29%～60.92%,胸腺指數(shù)22.22%～55.55%。但和葉、果、莖不同的是,低劑量組脾重、脾指數(shù)、胸腺重、胸腺指數(shù)都高于高、中劑量組處理。表明,沙棘籽油低劑量組更有利于提高小鼠免疫活力,但抑瘤效果偏低?？偟膩砜?沙棘籽油也是提高了荷瘤小鼠的自身免疫抵抗力。2.6沙棘對葉、果、莖、油的聯(lián)合作用從圖1的研究結(jié)果來看,供試小鼠的體重實驗后都比實驗前有所提高,只是莖、根的增重差異,表現(xiàn)的不整齊,表明初期荷瘤小鼠對體重影響不明顯。從圖2抑瘤效果來看,6個器官部位的15個不同處理劑量組中,有10個劑量組的抑瘤率,都超過30%,占到了處理總數(shù)的66.6%,他們是:葉、果提取物的高、中、低劑量組,莖的高劑量組,根的中劑量組,油的高、中劑量組,其中抑瘤率最高的是葉和果的高劑量組。圖2資料還表明,莖的中、低劑量組,根的高、低劑量組和油的低劑量組,雖然抑瘤率都沒有超過30%,但抑瘤率都在13.31～23.96%,表明沙棘各器官提取物對小鼠實體瘤的抑殺作用都有非常明顯的效果。葉、果、莖的3個處理劑量組的脾指數(shù)規(guī)律是一致的,都突出表現(xiàn)出劑量效應(yīng),高劑量組抑瘤率大于中劑量組,中劑量組大于低劑量組。葉的脾指數(shù)最高,又高于果和莖。油的脾指數(shù)又突出表現(xiàn)出逆劑量效應(yīng),低劑量組的脾指數(shù)最高。根的3個劑量組脾指數(shù)都比對照低,因此,根的抑瘤率也低于葉、果、莖、油(圖3)。可見,脾指數(shù)高低的絕對值是判斷抗癌效果的一個主重要指標(biāo)。沙棘不同器官提取物對小鼠實體瘤的胸腺指數(shù)的影響更為突出,葉和果的3個劑量組胸腺指數(shù)的規(guī)律是一致的,都突出表現(xiàn)出高劑量組的胸腺指數(shù)最高,但3個劑量組之間絕對值相差不大,葉又高于果。莖的3個劑量組胸腺指數(shù)都低于對照,低劑量組胸腺指數(shù)最高。根的3個劑量組胸腺指數(shù)表現(xiàn)的不規(guī)律,除中劑量組高于對照外,其他兩個劑量組胸腺指數(shù)都低于對照。油的3個劑量組胸腺指數(shù)的規(guī)律,卻表現(xiàn)出低劑量組最高,呈逆劑量效應(yīng)。從胸腺指數(shù)的絕對值來看,凡是胸腺指數(shù)高的劑量組,其抗癌率也高,因此,胸腺指數(shù)比脾指數(shù)與抑癌的關(guān)系更為密切(圖4)。3沙棘促進(jìn)小鼠體免疫的作用機(jī)制用沙棘5種器官的提取物,對患H22和EAC實體瘤的小鼠,進(jìn)行灌胃實驗結(jié)果表明,它們都具有顯著的抑瘤效果。5種器官提取物的15個高、中、低不同處理劑量組中,有10個劑量組的抑瘤率都超過了30%,占到處理總數(shù)的66.6%。他們是葉,果提取物的高、中、低劑量組,莖的高劑量組,根的中劑量組,油的高、中劑量組。其中葉的高劑量組其抑瘤率為58%,果的高劑量組抑瘤率為46.69%,而且都具有明顯的劑量效應(yīng)。在15個處理中,根的低劑量組抑瘤率最低為13.31%。可見,沙棘不同器官的提取物,對患H22和EAC實體瘤的小鼠都有極為顯著的抑瘤效果,總體來看,抑瘤率高低表現(xiàn)為:葉>果>油>莖>根。從實驗結(jié)束后處死小鼠解剖內(nèi)臟檢查來看,內(nèi)臟沒有任何異常表現(xiàn),相反,肝、脾、胃的顏色比對照更為鮮艷和飽滿,表明,沙棘5種器官的提取物不僅沒有顯示出毒性,而且有利于促進(jìn)臟器的功能和活力。從患H22和EAC實體瘤的小鼠脾重、脾指數(shù)來看,除莖的低劑量組,根的3個劑量組都略低于對照外,其余所有的處理都高于對照,這和他們高的抑瘤率是成正比的。葉、果、油提取物表現(xiàn)的更為突出。表明脾重和脾指數(shù)的提高,是小鼠抗實體瘤的重要原因之一。從患H22和EAC實體瘤的小鼠胸腺重、胸腺指數(shù)來看,除莖的3個處理,根的高、低劑量處理組都低于對照外,其余所有的處理都高于對照,尤其是葉和果提取物的所有劑量處理組的胸腺指數(shù)絕對值都大大高于對照一倍以上。因此,它們顯著的抑瘤效果與胸腺指數(shù)的提高,是小鼠抗實體瘤的另一個重要原因之一。對小鼠實體瘤的抑瘤效果相比,胸腺指數(shù)指數(shù)的提高更優(yōu)于脾指數(shù)。沙棘不同器官提取物,所以具有很高的抑瘤效率,是與它們都含有重多抗氧化、提高免疫活性、修復(fù)損傷細(xì)胞、促進(jìn)瘤細(xì)胞凋亡的成分有關(guān)。沙棘含有多糖,多糖能有效抑制H22肝癌小鼠腫瘤生長,增加胸腺指數(shù)、脾指數(shù),有效地阻止腫瘤機(jī)體免疫器官的萎縮,增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能,通過多種途徑的整合調(diào)節(jié)作用,顯示出了較強(qiáng)抗腫瘤活性。沙棘含有黃酮類和萜類化合物,黃酮類和萜類組分的配伍,具有明顯的協(xié)同抑瘤活性,對Lewis小鼠腫瘤生長具有抑制作用,且提高了荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)。沙棘含有花青素,花青素是水溶性黃酮,花青素對抑制結(jié)腸癌有效,因為他抑制了細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)了癌細(xì)胞的凋亡。沙棘葉含有茶多酚,茶多酚可抑制Lewis肺癌生長,其抗癌作用機(jī)制與抗氧化作用有關(guān)。沙棘含有Vc,Vc可以預(yù)防腫瘤,因為,Vc作為電子供體在細(xì)胞外液中產(chǎn)生過氧化氫殺傷腫瘤細(xì)胞、干擾腫瘤細(xì)胞周期、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、減輕放、化療的傷害。沙棘含有VE,VE已證實其可誘導(dǎo)乳腺癌、前列腺癌、舌癌及腎癌等惡性腫瘤細(xì)胞凋亡,而對正常細(xì)胞組織沒有毒性。沙棘含有胡蘿卜素,類胡蘿卜素可預(yù)防、治療乳腺癌和減少炎癥。沙棘油靜脈乳注射,有明顯降荷S180肉瘤小鼠的瘤重,并且可使骨髓有核細(xì)胞數(shù)、外周血白細(xì)胞數(shù)、吞噬系數(shù)、脾指數(shù)明顯升高,對化療藥物環(huán)磷酰胺有增效減毒作用,顯示了沙棘油能明顯提高非特異性免疫功能。沙棘果油對小鼠有明顯的抗炎作用,促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬功能,增加脾重和脾指數(shù),促進(jìn)體內(nèi)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能,促進(jìn)了體液免疫和細(xì)胞免疫功能。用沙棘籽油給小鼠灌胃,可提高小鼠脾重量和脾指數(shù),巨噬細(xì)胞吞噬,溶血空斑,溶血素形成,E-玫瑰花結(jié)形成和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率?？梢?沙棘籽油對小鼠的非特異性免疫功能,體液免疫和細(xì)胞免疫均有明顯的促進(jìn)作用。沙棘油除含有VE、胡蘿卜素、黃酮外,不飽和脂肪酸是其主要成分。不飽和脂肪酸的抗代謝物,常常用于治療惡性腫瘤。對淋巴瘤擴(kuò)散,裸小鼠白血病,黑素瘤,肺腺癌,乳腺癌,骨肉瘤,均可以誘導(dǎo)部分或全部腫瘤退縮。不飽和脂肪酸與甘氨酸和氨基腺嘌呤組成的七碳氨基糖,在體內(nèi)具有抗腫瘤活性,對結(jié)腸