食品蛋白質(zhì)測(cè)定中凱氏定氮法凱氮測(cè)定回收率試驗(yàn)

使用凱氏定氮儀定氮可行性實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．引言在現(xiàn)國標(biāo)中，測(cè)定食品、飼料等的粗蛋白時(shí)，在樣品消化后蒸餾時(shí)，一般采用成套玻璃蒸餾裝置進(jìn)行蒸餾。本實(shí)驗(yàn)室在測(cè)定食品、飼料等的粗蛋白時(shí)，在樣品處理方式上，與國標(biāo)的規(guī)定完全一致，但蒸餾時(shí)，本實(shí)驗(yàn)室自1990年來一直采用半自動(dòng)定氮儀蒸餾。通過實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)采用定氮儀進(jìn)行蒸餾可將待測(cè)液中的氮蒸餾完全。2．儀器設(shè)備本實(shí)驗(yàn)所用的玻璃儀器，均經(jīng)檢定合格。2.1半自動(dòng)凱氏定氮儀：KDN-2C，編號(hào)200109123，上海嘉定纖檢儀表廠。2.2移液管，共六支；容量瓶：1000mL；酸式滴定管：50mL；名稱規(guī)格（mL）編號(hào)檢定結(jié)論檢定單位移液管21679合格湖北省計(jì)量院移液管51683合格湖北省計(jì)量院移液管101686合格湖北省計(jì)量院移液管151690合格湖北省計(jì)量院移液管201693合格湖北省計(jì)量院移液管251694合格湖北省計(jì)量院容量瓶10001705合格湖北省計(jì)量院酸式滴定管501725U95=0.021mL湖北省計(jì)量院3．試劑本實(shí)驗(yàn)所用試劑，除指示劑外，未特別注明的均為分析純，所用的水，除冷凝水外均指高純水。3.1硫酸銨溶液[中國醫(yī)藥（集團(tuán)）上海化學(xué)試劑公司提供，高純?cè)噭：含氮（N）1mg/mL；3.2硼酸溶液：2%；3.3氫氧化鈉溶液：40%；3.4甲基紅溶液：稱取0.1g甲基紅，加100mL95%的乙醇溶解；3.5溴甲酚綠溶液：稱取0.1g次甲基藍(lán)，加100mL95%的乙醇溶解；3.6甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑：將一份甲基紅溶液與五份溴甲酚綠溶液臨用時(shí)混合使用。3.7硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：0.05298mol/L。4．試驗(yàn)方法4.1取10mL硼酸溶液（3.2）與250mL三角瓶中，加入1滴混合指示劑（3.6），作為接收液。將盛有接收液的三角瓶放在定氮儀的接收臺(tái)上，將定氮儀蒸餾出口導(dǎo)管伸至接收液液面以下。4.2用移液管分別吸取0、2、5、10、15、20mL硫酸銨溶液（3.1）至蒸餾管中，加入10氫氧化鈉溶液（3.3）。立即蒸餾。4.3當(dāng)三角瓶?jī)?nèi)溶液達(dá)到150mL左右時(shí)，降低定氮儀的接收臺(tái)，使定氮儀蒸餾出口導(dǎo)管脫離接收液液面。用蒸餾水沖洗蒸餾出口導(dǎo)管，再蒸餾1min后，停止蒸餾。4.4用硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，記下滴定體積。5．結(jié)果統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)編號(hào)吸取樣品體積（mL）滴定消耗體積（mL）樣液中氮含量的理論值，mg樣液中氮含量的實(shí)測(cè)值，mg回收率%實(shí)測(cè)值極差/理論值100.150///20.150//30.150//422.8522.0041100.20.75%52.8522.0041100.262.8321.989299.46756.9055.0102100.20.74%86.8554.973199.4696.8854.995399.91106.9055.0102100.2111013.60109.983399.830.74%1213.60109.983399.831313.62109.998199.981413.701010.057100.6151520.351514.99399.950.05%1620.50（舍）1515.105100.71720.351514.99399.951820.361515.001100.0192027.102020.004100.00.07%2027.20（舍）2020.078100.42127.122020.018100.12227.102020.004100.0注：表中數(shù)據(jù)按4d法取舍計(jì)算樣液中氮含量時(shí)以吸取樣品體積為0mL作為空白v0。a)樣液中氮含量的實(shí)測(cè)=0.05298×(v1-v0)×0.014×1000式中：0.05298——硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L；v1——測(cè)定樣品時(shí)消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL；v0——樣品體積為0mL時(shí)消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL；b)樣液中氮含量的實(shí)測(cè)值回收率%=——————————×100樣液中氮含量的理論值6．結(jié)果討論6.1從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出，用定氮儀定氮具有很好的回收率和重現(xiàn)性。回收率在99.46%～100.7%，同一組數(shù)據(jù)的極差與平均值之差的比值不大于0.75%，因此我們完全可以用定氮儀代替國標(biāo)中的全玻璃蒸餾裝置進(jìn)行定氮。6.2用定氮儀定氮的線性范圍較寬，本實(shí)驗(yàn)所做的0～20mg的氮（N）的范圍內(nèi)都能得到良好的結(jié)果。有實(shí)驗(yàn)表明，定氮儀定氮的范圍可達(dá)到更大。凱氏定氮儀檢查1．儀器設(shè)備本實(shí)驗(yàn)所用的玻璃儀器，均經(jīng)檢定合格。1.1半自動(dòng)凱氏定氮儀：KDN-2C，編號(hào)200109123，上海嘉定纖檢儀表廠。2.2移液管、容量瓶、酸式滴定管：50mL；名稱規(guī)格（mL）編號(hào)檢定結(jié)論檢定單位移液管25J0096合格自檢移液管251694合格湖北省計(jì)量院容量瓶5001707合格湖北省計(jì)量院酸式滴定管501725U95=0.021mL湖北省計(jì)量院3．試劑本實(shí)驗(yàn)所用試劑，除指示劑外，未特別注明的均為分析純，所用的水，除冷凝水外均指高純水。3.1硫酸銨：中國醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司提供，高純?cè)噭?.2硼酸溶液：3%；3.3氫氧化鈉溶液：30%；3.4甲基紅溶液：稱取0.1g甲基紅，加100mL95%的乙醇溶解；3.5溴甲酚綠溶液：稱取0.1g次甲基藍(lán)，加100mL95%的乙醇溶解；3.6甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑：將一份甲基紅溶液與五份溴甲酚綠溶液臨用時(shí)混合使用。3.7硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：0.09690mol/L。4．試驗(yàn)方法4.1稱取0.5607g硫酸銨，溶解，定容500ml。4.2取25mL硼酸溶液（3.2）于250mL三角瓶中，加入5滴混合指示劑（3.6），作為接收液。將盛有接收液的三角瓶放在定氮儀的接收臺(tái)上，將定氮儀蒸餾出口導(dǎo)管伸至接收液液面以下。4.2用移液管分別吸取25mL硫酸銨溶液（4.1）至蒸餾管中，加入30ml氫氧化鈉溶液（3.3）。立即蒸餾。4.3當(dāng)三角瓶?jī)?nèi)溶液達(dá)到150mL左右時(shí)，降低定氮儀的接收臺(tái)，使定氮儀蒸餾出口導(dǎo)管脫離接收液液面。用蒸餾水沖洗蒸餾出口導(dǎo)管，再蒸餾1min后，停止蒸餾。4.4用硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，記下滴定體積。4.5同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)一個(gè)。5．結(jié)果計(jì)算v0=0.05ml，v1=4.38ml，v2=4.39ml0.09690×（4.38-0.05）×0.01401N1%=———————————————×100=20.