溶菌酶的制備實(shí)驗(yàn)

溶菌酶的制備〔3-4〕8學(xué)時(shí)精選ppt溶菌酶的性質(zhì)溶菌酶〔lysozyme〕又稱胞壁質(zhì)酶〔muramidase〕或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶〔N-acetylmuramideglycanohydrlase〕，是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。溶菌酶是一種堿性球蛋白，分子中堿性氨基酸、酰胺殘基和芳香族氨，酸的比例較高，酶的活動(dòng)中心是天冬氨酸和谷氨酸?；瘜W(xué)性質(zhì)：白色或微白色凍干粉，溶于水，不溶于乙醚和丙酮，pI為11.0-11.35，最適pH值6.5。穩(wěn)定性：酸性介質(zhì)中可穩(wěn)定存在，堿性介質(zhì)中易失活；96℃，pH值為3條件下，15min后活力保持87%。抑制劑有碘、咪唑和吲哚衍生物、外表活性劑(十二烷基硫酸鈉、醇類和碳鏈不少于12的脂肪酸)。1%水溶液在281.5nm處的吸光系數(shù)為26.4。精選ppt生產(chǎn)方法生產(chǎn)方法：以蛋清為原料，在pH6.5條件下，用弱酸性陽離子交換樹脂732〔724〕吸附后，再用硫酸銨洗脫，經(jīng)透析后冷凍枯燥得產(chǎn)品。從雞蛋清中提取別離的溶菌酶是由18種129個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的單一肽鏈。精選ppt溶菌酶的作用機(jī)理溶菌酶是一種專門作用于微生物細(xì)胞壁的水解酶，它主要作用于肽多糖分子中N-乙酰胞壁酸與N-乙酰氨基葡萄糖之間的β-1，4鍵，使細(xì)胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，從而破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂內(nèi)容物逸出而使細(xì)菌溶解，失去對細(xì)胞的保護(hù)作用，最終使細(xì)菌溶解死亡。溶菌酶還可與帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接結(jié)合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。通過水解細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖來溶菌，酶反響：菌懸浮液═溶菌并澄清。精選ppt溶菌酶的用途用途：用于生化研究，臨床上用于急慢性咽喉炎、扁平苔癬、扁平疣等疾病的治療。直接破壞革蘭氏陽性菌的細(xì)胞壁，而到達(dá)殺菌的作用，這主要是因?yàn)楦锾m氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要是由胞壁質(zhì)和磷酸質(zhì)組成，其中胞壁質(zhì)是由雜多糖和多肽組成的糖蛋白，這種多糖正是由N-乙酰胞壁酸與N-乙酰氨基葡萄糖之間的β-1，4鍵聯(lián)結(jié)的。對某些革蘭氏陰性菌，如埃希氏大腸桿菌，傷寒沙門氏菌，也會受到溶菌酶的破壞。溶菌酶是母乳中能保護(hù)嬰兒免遭病毒感染的一種有效成分，它能通過消化道而保持其活性狀態(tài)，溶菌酶還可以使嬰兒腸道中大腸桿菌減少，促進(jìn)雙歧桿菌的增加，還可以促進(jìn)蛋白質(zhì)的消化吸收精選ppt溶菌酶的特點(diǎn)〔優(yōu)點(diǎn)〕〔1〕溶菌酶是很穩(wěn)定的蛋白質(zhì)，有較強(qiáng)的抗熱性。蛋清溶菌酶是C型，是的最耐熱的酶；〔2〕溶菌酶不會因?yàn)橛袡C(jī)溶劑的處理而失活，當(dāng)轉(zhuǎn)移到水溶液中時(shí)，溶菌酶的活力可全部恢復(fù)；〔3〕溶菌酶可被冷凍或枯燥處理，且活力穩(wěn)定；〔4〕溶菌酶適宜pH5.3~6.4，可用于低酸性食品防腐；〔5〕溶菌酶生產(chǎn)本錢較低；〔6〕溶菌酶的抗菌譜較廣，不僅局限于G+菌，對局部G-菌也有抑制效果；〔7〕溶菌酶作為防腐劑平安性高。溶菌酶是一種天然蛋白質(zhì)，1992年FAO/WTO的食品添加劑協(xié)會已經(jīng)認(rèn)定溶菌酶在食品中應(yīng)用是平安的。精選ppt實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諒牡扒逯袆e離提取溶菌酶的工藝和方法；了解溶菌酶的物理化學(xué)性質(zhì)；精選ppt主要儀器設(shè)備和藥品〔1〕耗材：pH試紙、500mL燒杯、100mL燒杯、玻璃棒、60-80目篩子、200mL量筒、濾紙、布氏漏斗、抽濾瓶、透析袋、pH試紙堿性、pH試紙酸性、50mL離心管〔2〕試劑：雞蛋5個(gè)、724樹脂50g、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉固體、硫酸銨、濃鹽酸、固體氯化鈉、丙酮、磷酸二氫鉀〔3〕儀器設(shè)備：電動(dòng)攪拌器、冰箱、真空泵、真空枯燥箱精選ppt〔4〕溶液配制：1〕0.15mol/L〔pH6.5〕磷酸緩沖液：取磷酸二氫鉀6.8g,加0.1mol/L氫氧化鈉溶液152mL，用水至1定容到1L，即得；每組150mL。2〕0.1mol/L氫氧化鈉溶液：4g氫氧化鈉固體放入燒杯中,用800mL左右蒸餾水溶解，冷卻后用蒸餾水定容至1L，即得；每組160mL。3〕10%硫酸銨溶液：稱取無水硫酸氨100g，用800mL水溶解，用蒸餾水定容至1L，即得；每組200mL。5〕1mol/L氫氧化鈉溶液：40g氫氧化鈉固體放入燒杯中,用800mL左右蒸餾水溶解，冷卻后用蒸餾水定容至1L，即得。6〕3mol/L鹽酸溶液：量取100mL濃鹽酸參加300mL水中，混合均勻即得。精選ppt實(shí)驗(yàn)方法原料處理吸附去雜蛋白洗脫沉淀枯燥鹽析透析精選ppt方法步驟1〕制備蛋清：將4～5個(gè)新鮮的雞蛋兩端各敲一個(gè)小洞，使蛋清流出〔雞蛋清pH值不得小于8〕，輕輕攪拌5分鐘，使雞蛋清的稠度均勻，用銅篩過濾除去臍帶塊等其他雜質(zhì)，量體積約為100mL。2〕吸附：溫度降至5℃左右，邊攪拌邊參加處理好的724樹脂50g〔濕重〕，使樹脂全部懸浮于蛋清中。保持0-5攝氏度，攪拌吸附5h，將蛋清在0-5℃靜置過夜。3〕去除雜蛋白：把上層清液漸漸倒出，下層樹脂用清水洗去吸附的蛋白質(zhì)，反復(fù)4次，將樹脂抽濾去水分。精選ppt4〕洗脫：取0.15mol/L〔pH6.5〕磷酸緩沖液150mL，分3次參加樹脂中，攪拌約為15min，每次攪拌后減壓抽濾去水分；用10%硫酸銨200mL，分4次洗脫溶菌酶，每次攪拌30min，過濾抽干，合并洗脫液，按總體積參加32%〔質(zhì)量體積比〕固體硫酸銨使含量到達(dá)40%，有白色沉淀產(chǎn)生。冷卻放置過夜，棄上清，沉淀離心別離〔或抽濾〕，得粗制品。5〕透析：將粗制品溶解于50ml蒸餾水，裝入透析袋，0-5℃透析24-36h。精選ppt6〕鹽析：向澄清透析液中慢慢滴加1mol/L氫氧化鈉，同時(shí)不斷攪拌，pH上升到8.5-9時(shí)，如有白色沉淀，立即離心除去。在攪拌中參加3mol/L鹽酸，使溶液pH到達(dá)3.5，按體積緩緩參加5%固體氯化鈉，即有白色沉淀析出。在0-5℃放置48h，離心或過濾得溶菌酶沉淀。7〕枯燥：沉淀參加10倍量(冷至0℃)的無水丙酮，不斷攪拌，冷處靜置數(shù)小時(shí)，用漏斗濾去丙酮，將沉淀置于真空枯燥箱〔室溫〕