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文檔簡介

最全的各種細(xì)胞計(jì)數(shù)方法總結(jié),趕緊收藏隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展,曾經(jīng)每個(gè)檢驗(yàn)人必須掌握的各類細(xì)胞手工計(jì)數(shù)方法都被各種儀器所替代了,現(xiàn)在醫(yī)院檢驗(yàn)科年輕點(diǎn)的同志可能都不知道紅細(xì)胞、白細(xì)胞等手工計(jì)數(shù)的方法了??赡苣贻p人不服氣了說,現(xiàn)在都有儀器來做哪還需要掌握這個(gè)?No,No,No,小編告訴大家,其實(shí)掌握這些其實(shí)非常實(shí)用的,先進(jìn)的儀器固然能為我們及時(shí)快速的提供檢驗(yàn)結(jié)果,但是當(dāng)儀器對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)分類出現(xiàn)異常時(shí),手工顯微鏡檢查就顯的尤為重要。大家可以通過每年檢驗(yàn)職稱考試都會(huì)出現(xiàn)這種類型的題目就會(huì)發(fā)現(xiàn)?,F(xiàn)在小編給大家總結(jié)下各類細(xì)胞的手工計(jì)數(shù)原理及方法,供大家參考。一、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)原理:用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù),充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池,計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞,經(jīng)換算求出每升血液中紅細(xì)胞數(shù)量。2.操作:1)取中號(hào)試管1支,加紅細(xì)胞稱釋液2.0ml2) 用清潔干燥微量吸管取末梢血10山擦去管外余血后加至紅細(xì)胞稀釋液底部,再輕吸上層清洗吸管2-3次立即混勻。3) 混勻后,用干凈微量吸管將紅細(xì)胞懸液充人計(jì)數(shù)池,不得有空泡或外溢,充池后靜置2-3min后計(jì)數(shù)4)高倍鏡下依次計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)四角和正中共5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞。對(duì)壓線細(xì)胞按“數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右”的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)。3.計(jì)算:紅細(xì)胞數(shù)/L=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)x5x10x200x106=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)x10io=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)^100x1012公式中:x55個(gè)中方格換算成1個(gè)大方格;x10 1個(gè)大方格容積為0.1|jI,換算成1.0|jI;x200血液的實(shí)際稀釋倍數(shù)應(yīng)為201倍,按200是便于計(jì)算;x106由lpl換算成1L。二、白細(xì)胞計(jì)數(shù)原理:用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù),充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池,計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)的白細(xì)胞,經(jīng)換算求出每升血液中紅細(xì)胞數(shù)量。方法)取小試管l支,加白細(xì)胞稀釋液0.38ml。)用微量吸管準(zhǔn)確吸取血樣20pl,擦去管外多余血液,將吸管插入小試管中稀釋液的底部,輕輕將血放出,并吸取上清液清洗吸管兩次,混勻。3) 待紅細(xì)胞完全被破壞,再次混勻后,用微量吸管吸取混勻液10pl充池,靜置2-3分鐘,待白細(xì)胞下沉。4) 用低倍鏡計(jì)數(shù)四角大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù),對(duì)壓線細(xì)胞按“數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右”的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)。為每個(gè)大方格(即為每個(gè)大方格(即0.1|j|)內(nèi)白細(xì)胞平均數(shù)1個(gè)大方格容積為0.1pl,換算為1.0pl血液稀釋倍數(shù)由1pl換算成1L—URII 計(jì)算:白細(xì)胞數(shù)/L二N/4x10x20x106二N/20x10g公式中:N4個(gè)大方格中白細(xì)胞的總數(shù)三4x10x201064.一些貧血患者血液中有核紅細(xì)胞增多,會(huì)計(jì)數(shù)在白細(xì)胞總數(shù)內(nèi),應(yīng)校正。校正公式:白細(xì)胞校正數(shù)/L=Mx(100/100+N)M位未校正前白細(xì)胞數(shù),N未在白細(xì)胞分類時(shí),計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞的同時(shí)計(jì)數(shù)到的有核紅細(xì)胞數(shù)三、血小板計(jì)數(shù)原理:將血液用適當(dāng)?shù)南♂屢鹤饕欢肯♂尯?,混勻注入?jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù),再算出每升血液中血小板數(shù)。方法:

1)小試管內(nèi)加血小板稀釋液0.4ml。取動(dòng)物靜脈血20mm3,迅速擠于稀釋液內(nèi),立即充分搖勻。)放置4-10min,待溶液呈透明紅色,說明紅細(xì)胞已經(jīng)充分溶解,充分搖勻,取1小滴加入計(jì)數(shù)池。)放置10-15min,待血小板完全下沉后,先將中央大方格移至低倍鏡視野內(nèi),再轉(zhuǎn)以高倍鏡,數(shù)5個(gè)中方格內(nèi)的血小板數(shù)。4)血小板大小形態(tài)不一致,但均呈折光的發(fā)亮淡藍(lán)色小點(diǎn),大小約紅細(xì)胞的1/7-1/2,呈不規(guī)則圓形或長圓形。在計(jì)數(shù)時(shí)必須來回扭動(dòng)顯微鏡微調(diào),不要遺漏計(jì)數(shù)。;0.005mml/20min3計(jì)算:5個(gè)中方格血小板總和x1/50mm3(5個(gè)中方格的體積)x1/20(稀釋倍數(shù))=1/1000mm3。故5個(gè)中方格的總和x1000=lmm3血液的血小板數(shù)。PLT/L=5個(gè)中方格內(nèi)PLT(N)x109/L二Nx5x10x20x106/L公式中:N5個(gè)中方格中血小板的總數(shù);x55個(gè)中方格換算成1個(gè)大方格;x101個(gè)大方格容積為0.1pl,換算為1.0plx20血液稀釋倍數(shù)106由1川換算成1L

四、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)1.原理:網(wǎng)織紅細(xì)胞是未完全成熟的紅細(xì)胞,包體較一般紅細(xì)胞稍大,胞漿中尚有嗜堿性殘存物質(zhì),可被煌焦油藍(lán)等染成藍(lán)色顆粒狀和線狀及網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物。網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)量可用百分率或每立方毫米血液中的絕對(duì)值數(shù)方法1)血膜片制備:2)染色:取試管一支,用毛細(xì)管或槍頭于試管中加入染液2~5滴,然后再加入新鮮血液1滴輕搖混合,染色10~15min。3)制片:取載物片一片,用毛細(xì)管或槍頭吸取血液染色液1小滴于載物片上,并用推片約45度角推制成舌型血膜片,自然干燥備用。4)觀察:用顯微鏡觀察,取血膜片滴入香柏油1滴,將血膜片置于顯微鏡載物臺(tái),用油鏡觀察網(wǎng)織紅細(xì)胞Ret%=月內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)冥口族9xA內(nèi)紅細(xì)胞數(shù) ’Ret=RBCXRet%3計(jì)數(shù)取計(jì)數(shù)器在油鏡下檢查計(jì)數(shù)紅細(xì)胞,即計(jì)數(shù)紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)量,檢查計(jì)數(shù)100個(gè)紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)量,并得出千分率再除以10即為百分率。計(jì)算公式:網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率=10/1000個(gè)紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)量五、嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)原理紅細(xì)胞中的嗜堿性物質(zhì)用瑞氏或美藍(lán)染液顯示出紅細(xì)胞中的藍(lán)色點(diǎn)彩、然后計(jì)數(shù)點(diǎn)彩紅細(xì)胞占紅細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)。方法1)用通常的方法制成薄血膜,干燥后用甲醇固定,2)用堿性美益藍(lán)染40s水洗,晾干。3)用低倍鏡選擇紅細(xì)胞分布均勻的部位,然后換油色計(jì)數(shù),紅細(xì)胞呈強(qiáng)藍(lán)色,點(diǎn)彩顆粒呈深藍(lán)色.3、計(jì)數(shù)方法:基本與網(wǎng)織紅細(xì)胞相同,計(jì)數(shù)50個(gè)視野中的點(diǎn)彩紅細(xì)胞同時(shí)計(jì)數(shù)其中5個(gè)視野的紅細(xì)胞總數(shù),即可算出點(diǎn)彩紅細(xì)胞的百分?jǐn)?shù),如用瑞氏染色其方法同血片染色。計(jì)算公式:點(diǎn)彩紅細(xì)胞百分率=10/1000個(gè)紅細(xì)胞中點(diǎn)彩紅細(xì)胞的數(shù)量六、腦脊液(胸腹水)有核細(xì)胞計(jì)數(shù)原理(1) 清亮或微渾的腦脊液(胸腹水)標(biāo)本,可以直接計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù),或稀釋后再直接計(jì)數(shù),將結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。(2) 可采用直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)白細(xì)胞,或稀釋后再直接計(jì)數(shù),將結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。(3) 白細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后,在高倍鏡下根據(jù)白細(xì)胞形態(tài)特征進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。也可采用Wright染色后,油鏡下分類計(jì)數(shù)。方法(1) 非血性標(biāo)本:小試管內(nèi)加入冰醋酸1~2滴,轉(zhuǎn)動(dòng)試管,使內(nèi)壁沾有冰醋酸后傾去,然后滴加混勻腦脊液3(胸腹水)~4滴,數(shù)分鐘后,混勻充人計(jì)數(shù)池,按血液白細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)。(2) 混濁或血性標(biāo)本:將混勻腦脊液(胸腹水)用1%冰醋酸溶液按血液白細(xì)胞計(jì)數(shù)法稀釋后進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算為剔除因出血而來的白細(xì)胞數(shù),用下式公式進(jìn)行校正。腦脊液(胸腹水)白細(xì)胞校正數(shù)=腦脊液(胸腹水)白細(xì)胞計(jì)數(shù)值一出血增加的白細(xì)胞數(shù)出血增加的白細(xì)胞數(shù)二外周血白細(xì)胞數(shù)X腦脊液(胸腹水)紅細(xì)胞數(shù)/外周血紅細(xì)胞數(shù)4.公式4.公式1)澄清標(biāo)本按血液白細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)換算略麻煩,直接計(jì)數(shù)5個(gè)大方格比較方便,此時(shí)腦脊液(胸腹水)白細(xì)胞數(shù)/L二Nx2x10e6/L=2Nx10e6/LN表示5個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)x2:5個(gè)大方格的容積為0.1x5=0.5ul,換算為1.0ul只需要乘以x10e6:由1.0uI換算為1L;也可以充兩個(gè)計(jì)數(shù)室,計(jì)數(shù)10個(gè)大方格2)渾濁/血性標(biāo)本腦脊液(胸腹水)白細(xì)胞數(shù)/L=Nx2x20x10e6/L=40Nx10e6/Lx2:將5個(gè)大方格的白細(xì)胞數(shù)換算為1.0ul的白細(xì)胞數(shù);x20:腦脊液(胸腹水)的稀釋倍數(shù);x10e6:由1ul換算為1L;也可以充兩個(gè)計(jì)數(shù)室,計(jì)數(shù)10個(gè)大方格。七、精子計(jì)數(shù)1.原理:將精液用適當(dāng)?shù)南♂屢鹤饕欢肯♂尯?,混勻注入?jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù),再算出每毫升精液中精子數(shù)。2.方法(按照最新版第四版《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》)1) .于小試管內(nèi)加精子稀釋液0.38ml,取液化精液20M加入稀釋液內(nèi)混勻。2) .充分搖勻后,滴入改良Neubauer計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池內(nèi),靜置1~2分鐘,待精子下沉后,以精子頭部作為基準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)數(shù)。3.計(jì)算1).如每

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