衛(wèi)生化學(xué)：紫外-可見(jiàn)分光光度法

第四章紫外-可見(jiàn)分光光度法

（ultraviolet-visiblespectrophotometry,UV-Vis）一、電磁輻射和電磁波譜1．電磁輻射（電磁波，光）：以巨大速度通過(guò)空間、不需要任何物質(zhì)作為傳播媒介的一種能量。

2．電磁輻射的性質(zhì)：具有波、粒二象性波動(dòng)性（λ或ν描述）：粒子性（E描述）第一節(jié)概述

高能輻射區(qū)γ射線能量最高，來(lái)源于核能級(jí)躍遷X射線來(lái)自?xún)?nèi)層電子能級(jí)的躍遷光學(xué)光譜區(qū)紫外光來(lái)自原子和分子外層電子能級(jí)的躍遷可見(jiàn)光紅外光來(lái)自分子振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的躍遷波譜區(qū)微波來(lái)自分子轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)及電子自旋能級(jí)躍遷無(wú)線電波來(lái)自原子核自旋能級(jí)的躍遷續(xù)前3．電磁波譜：電磁輻射按波長(zhǎng)順序排列，稱(chēng)~。γ射線→

X射線→紫外光→可見(jiàn)光→紅外光→微波→無(wú)線電波波長(zhǎng)長(zhǎng)光譜分析法：利用物質(zhì)與輻射能作用時(shí)所吸收或發(fā)射輻射的特征和強(qiáng)度而建立起來(lái)的定性、定量及結(jié)構(gòu)分析方法。分類(lèi)：按光譜產(chǎn)生機(jī)制分

吸收光譜法發(fā)射光譜法按物質(zhì)粒子類(lèi)型分

原子光譜法分子光譜法

按輻射波長(zhǎng)分

γ射線光譜法X射線光譜法紫外-可見(jiàn)光譜法紅外光譜法二、光譜分析法紫外-可見(jiàn)分光光度法(ultraviolet-visible

spectrophoto-

metry,UV-Vis)：根據(jù)物質(zhì)分子對(duì)紫外或可見(jiàn)光區(qū)電磁輻射的吸收特征和吸收程度而建立起來(lái)的定性、定量分析方法。紫外-可見(jiàn)分光光度法的測(cè)定波長(zhǎng)200nm~760nm

可見(jiàn)分光光度法：在可見(jiàn)光區(qū)（波長(zhǎng)400～760nm）測(cè)定

紫外分光光度法：在紫外光區(qū)（波長(zhǎng)200～400nm）測(cè)定特點(diǎn)：靈敏度和準(zhǔn)確度高，儀器簡(jiǎn)單，操作方便，快速可靠，易于掌握。一、紫外-可見(jiàn)吸收光譜的形成紫外-可見(jiàn)吸收光譜的產(chǎn)生

由于分子吸收紫外-可見(jiàn)光區(qū)的電磁輻射，分子中價(jià)電子（或外層電子）的能級(jí)躍遷而產(chǎn)生。分子能級(jí):能級(jí)：電子只能在特定、分立的軌道上運(yùn)動(dòng)，各個(gè)軌道上的電子具有分立的能量，這些能量值即為能級(jí)。物質(zhì)分子內(nèi)部三種運(yùn)動(dòng)形式：

1.電子相對(duì)于原子核的運(yùn)動(dòng)→電子能級(jí)

2.原子核在其平衡位置附近的相對(duì)振動(dòng)→振動(dòng)能級(jí)

3.分子本身繞其重心的轉(zhuǎn)動(dòng)→轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)第二節(jié)

紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理

每個(gè)電子能級(jí)含有若干個(gè)振動(dòng)能級(jí)每個(gè)振動(dòng)能級(jí)含有若干個(gè)轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)這些能級(jí)是不連續(xù)的

紅色線表示電子能級(jí)；

黃色線表示振動(dòng)能級(jí)，V表示，V=0、1、2、3、4；黑色線表示轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)，用J表示，J=0、1、2、3、42.能級(jí)躍遷：基態(tài)（S0）：電子在最低能級(jí)時(shí)能量最低的狀態(tài)。激發(fā)態(tài)（S1、S2、…)：電子吸收能量而脫離基態(tài)軌道到更高一級(jí)能量軌道的狀態(tài)。能級(jí)躍遷：電子受激發(fā)，從低能級(jí)轉(zhuǎn)移到高能級(jí)的過(guò)程電子發(fā)生能級(jí)躍遷需要吸收一定的能量（能級(jí)差）分子只能吸收等于兩個(gè)躍遷能級(jí)之差（ΔE）的能量才能發(fā)生兩個(gè)能級(jí)之間的躍遷。E1：激發(fā)態(tài)的能量E0：基態(tài)能量續(xù)前

分子內(nèi)運(yùn)動(dòng)涉及三種躍遷能級(jí)，所需能量大小順序

紫外-可見(jiàn)光譜是由電子能級(jí)躍遷產(chǎn)生分子在發(fā)生電子能級(jí)躍遷的同時(shí)伴隨振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷。所以紫外-可見(jiàn)光譜實(shí)質(zhì)上包含了電子能級(jí)、振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷。分子的吸收光譜是由成千上萬(wàn)條彼此靠得很緊的譜線組成，看起來(lái)是一條連續(xù)的吸收帶。紫外-可見(jiàn)吸收光譜（吸收光譜、吸收曲線）

測(cè)定某一溶液對(duì)紫外-可見(jiàn)光區(qū)不同波長(zhǎng)（λ）單色光的吸光度（A），以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制的圖形。

吸收峰光譜特征參數(shù)

吸收峰→λmax（1）吸收谷→λmin（2）肩峰→λsh（3）末端吸收（4）續(xù)前

注：一種物質(zhì)的吸收光譜圖中可以有多個(gè)吸收峰和吸收谷二、紫外-可見(jiàn)吸收光譜與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系

物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)不同，基態(tài)與激發(fā)態(tài)能級(jí)差不同，發(fā)生躍遷時(shí)吸收電磁輻射波長(zhǎng)不同，從而產(chǎn)生不同紫外-可見(jiàn)吸收光譜

紫外-可見(jiàn)吸收光譜是由電子能級(jí)躍遷產(chǎn)生

電子躍遷類(lèi)型與分子結(jié)構(gòu)存在基團(tuán)有密切聯(lián)系根據(jù)分子結(jié)構(gòu)→推測(cè)可能產(chǎn)生的電子躍遷類(lèi)型；根據(jù)吸收譜帶波長(zhǎng)和電子躍遷類(lèi)型→推測(cè)分子中可能存在的基團(tuán)（分子結(jié)構(gòu)鑒定）價(jià)電子σ電子→飽和單鍵（C-H、C-C）π電子→不飽和雙鍵（C=C、C=O）

n電子→孤對(duì)電子（-O-C-，-N-C-,-X-C-）成鍵軌道與反鍵軌道：能量較低的分子軌道叫成鍵軌道。能量高于成鍵軌道，叫做反鍵軌道。

σ電子→σ，σ*；π電子→π，π*；n電子→n

各電子能級(jí)高低次序是：σ<π<n<π*<σ*

續(xù)前

COHnpsH

有機(jī)化合物電子躍遷類(lèi)型：按能量大?。害摇?>

n→σ*>

π→π*>

n→π*續(xù)前

1.σ→σ*躍遷：E很高，λmax<150nm（遠(yuǎn)紫外區(qū)）飽和烴（甲烷，乙烷）2.n→σ*躍遷：E較大，λmax<200nm（真空紫外區(qū)）含雜原子飽和基團(tuán)（-OH，-NH2，-X）3.π→π*躍遷：不飽和基團(tuán)（—C＝C—）孤立，E較小，λmax~200

nm

體系共軛，E更小，λmax長(zhǎng)移（紫外區(qū)）4.n→π*躍遷：E最小，λmax200~400nm（近紫外區(qū)）含雜原子不飽和基團(tuán)（—C≡N，C＝O）續(xù)前注：紫外光譜電子躍遷類(lèi)型：n—π*躍遷

π—π*躍遷飽和化合物無(wú)紫外吸收三、光的吸收定律Lambert-Beer定律：定量分析的依據(jù)描述物質(zhì)對(duì)單色光吸收強(qiáng)弱與液層厚度和待測(cè)物濃度的關(guān)系假設(shè)一束平行單色光通過(guò)一個(gè)吸光物體

I0=Ia+It+Ir

當(dāng)用參比溶液調(diào)0后，

I0=Ia+It透光度（T）

吸光度（A）

在一定條件下，物質(zhì)的吸光度與溶液濃度和溶液層厚度的乘積成正比。I0ItIaIr續(xù)前討論：1．Lamber-Beer定律的適用條件（前提）入射光為單色光溶液是稀溶液2．該定律適用于固體、液體和氣體樣品3．吸收定律能夠用于彼此不相互作用的多組分溶液。

在同一波長(zhǎng)下，各組分吸光度具有加和性K比例常數(shù)，其物理意義為在一定波長(zhǎng)、溫度條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位厚度時(shí)的吸光度。根據(jù)濃度單位的不同，K有兩種表示方法：摩爾吸光系數(shù)（ε）：當(dāng)溶液濃度c以mol/L、液層厚度b以cm為單位時(shí)，K用ε表示。

A=εbc注：ε與b和c無(wú)關(guān)，與吸光物質(zhì)的性質(zhì)、入射光波長(zhǎng)、溶劑等有關(guān)。吸光系數(shù)（a）：當(dāng)溶液濃度c以g/L、液層厚度b以cm為單位時(shí)，K用a表示。

A=abc某一物質(zhì)的ε和a是通過(guò)測(cè)定適當(dāng)?shù)蜐舛热芤旱奈舛群笥?jì)算得到。不同物質(zhì)對(duì)同一波長(zhǎng)的單色光ε不同（物質(zhì)的特征參數(shù)，定性依據(jù)）同種物質(zhì)在不同溶劑中對(duì)同一波長(zhǎng)單色光的ε不同，應(yīng)注明溶劑同一物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光ε不同，應(yīng)注明波長(zhǎng)ε↑，物質(zhì)對(duì)光吸收能力↑,定量靈敏度↑→定量依據(jù)依據(jù)Beer定律，A與C關(guān)系應(yīng)為經(jīng)過(guò)原點(diǎn)的直線實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，溶液濃度只有在適當(dāng)?shù)偷姆秶鷷r(shí)，A與c才呈良好的線性關(guān)系。當(dāng)溶液濃度較高時(shí)，會(huì)發(fā)生向下或向上彎曲，即偏離Beer定律。偏離Beer定律的主要因素表現(xiàn)為以下兩個(gè)方面：（一）光學(xué)因素（二）化學(xué)因素偏離Beer定律的因素常見(jiàn)1．非單色光的影響-------負(fù)偏離

Beer定律應(yīng)用的重要前提——入射光為單色光

單色光是通過(guò)單色器色散光源發(fā)射的連續(xù)光譜獲得為了保證透過(guò)光對(duì)檢測(cè)器的響應(yīng)，必須保證單色器一定的狹縫寬度這就使分離出來(lái)的光具一定的譜帶寬度，而并非真正的單色光吸光物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光具有不同的吸收能力，結(jié)果偏離Beer定律。分析時(shí)選擇λmax作為測(cè)定波長(zhǎng)，A變化小λmax處測(cè)定的A最大，其他波長(zhǎng)處測(cè)定的A都偏小，產(chǎn)生負(fù)偏離。光學(xué)因素續(xù)前2．雜散光的影響------負(fù)偏離雜散光是指從單色器分出的光不在入射光譜帶寬度

范圍內(nèi)，與所選波長(zhǎng)相距較遠(yuǎn)。雜散光來(lái)源：儀器本身缺陷；光學(xué)元件污染造成。樣品溶液一般不吸收雜散光而造成負(fù)偏差。3．反射光和散色光的影響------正偏離

反射光和散色光均是入射光譜帶寬度內(nèi)的光直接對(duì)T

產(chǎn)生影響。

散射和反射使T↓，A↑，吸收光譜變形。注：一般可用空白對(duì)比校正消除。4．非平行光的影響------正偏離

使光程↑，厚度（b）↑，A↑，吸收光譜變形。Beer定律適用的另一個(gè)前提：稀溶液濃度過(guò)高會(huì)使C與A關(guān)系偏離定律化學(xué)因素溶液濃度過(guò)高,吸光物質(zhì)質(zhì)點(diǎn)間距離縮小,相鄰質(zhì)點(diǎn)的電荷分布彼此影響,改變物質(zhì)對(duì)光的吸收能力,偏離Beer定律溶液均勻性差（膠體、乳濁液、混懸液）,入射光除被吸收外，會(huì)產(chǎn)生折射、散射或反射，It減弱，A增加，產(chǎn)生正偏離溶液中吸光物質(zhì)解離、締合、配位，濃度改變，偏離Beer定律

CrＯ42-＋2H＋

=Cr2Ｏ72-＋H2Ｏ第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)主要特點(diǎn)：五個(gè)單元組成光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示系統(tǒng)一、分光光度計(jì)的主要部件

1.光源：在所需光譜區(qū)發(fā)射連續(xù)光譜，并應(yīng)具有足夠的光強(qiáng)度和良好的穩(wěn)定性。鎢燈或鹵鎢燈——可見(jiàn)光源350~2500nm（最適波長(zhǎng)360nm-1000nm）氫燈或氘燈——紫外光源150~400nm2.單色器：分光裝置，將來(lái)自光源的連續(xù)光譜按波長(zhǎng)順序色散，并選擇出所需的單色光。由入口狹縫、出口狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件組成色散元件是單色器最重要部分，將復(fù)合光色散成單色光。棱鏡：玻璃或石英。玻璃棱鏡用于可見(jiàn)光區(qū)；石英棱鏡用于紫外或可見(jiàn)光區(qū)。利用不同波長(zhǎng)光的折射率的不同使復(fù)合光色散為單色光。波長(zhǎng)↑，折射率↓；反之，折射率↑，將各波長(zhǎng)光分開(kāi)。色散后所得光譜，波長(zhǎng)分布不均勻。光柵：常用平面反射光柵，在高度拋光表面上刻畫(huà)出許多等距、平行的鋸齒形線槽，用鋁作反射面。利用光的衍射原理將復(fù)合光色散為單色光。色散后所得光波長(zhǎng)等距。入射狹縫用于限制雜散光進(jìn)入單色器，準(zhǔn)直鏡將入射光束變?yōu)槠叫泄馐筮M(jìn)入色散元件。后者將復(fù)合光分解成單色光，然后通過(guò)物鏡將出自色散元件的平行光聚焦于出口狹縫。出射狹縫用于限制通帶寬度。續(xù)前3．吸收池：裝溶液。玻璃——能吸收UV光，僅適用于可見(jiàn)光區(qū)石英——不能吸收紫外光，適用于紫外和可見(jiàn)光區(qū)要求：匹配性（對(duì)光的吸收和反射應(yīng)一致）匹配性檢查：將吸收池裝入同樣的溶液，在同一波長(zhǎng)下測(cè)定透光度，透光度之差應(yīng)小于0.5%。5．顯示系統(tǒng)：將檢測(cè)器輸出的信號(hào)經(jīng)處理轉(zhuǎn)換成透光度和吸光度顯示光電管：光照射到光敏陰極，陰極發(fā)射電子，在電場(chǎng)作用下射向陽(yáng)極產(chǎn)生電流。光電倍增管：光照射到陰極時(shí)，陰極發(fā)射光電子。光電子在電場(chǎng)加速下，轟擊到倍增電極，發(fā)射出更多的光電子。倍增的電子集中到陽(yáng)極產(chǎn)生強(qiáng)電流。4．檢測(cè)器：將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)的裝置分光光度計(jì)的類(lèi)型：

1．單光束分光光度計(jì)：特點(diǎn)：對(duì)光源要求高吸收池配對(duì)2．雙光束分光光度計(jì)：

特點(diǎn)：對(duì)光源要求不高，光強(qiáng)度瞬間波動(dòng)不影響吸光度值吸收池配對(duì)續(xù)前3．雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)特點(diǎn)：利用吸光度差值定量消除因吸收池不匹配和參比與樣品基體差異等造成的誤差。第四節(jié)分析條件的選擇

UV-vis測(cè)定能吸收紫外或可見(jiàn)光的物質(zhì)，對(duì)于許多在紫外光區(qū)沒(méi)有吸收或吸收較弱的組分，不能直接進(jìn)行測(cè)定，而常常通過(guò)顯色反應(yīng)把待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物后，再利用UV-vis測(cè)定。顯色反應(yīng)：將被測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)稱(chēng)為顯色反應(yīng)。常見(jiàn)：配位、偶合、氧化還原反應(yīng)。顯色劑：與無(wú)色物質(zhì)反應(yīng)生成有色物質(zhì)的試劑。一、顯色反應(yīng)的基本要求

(1)待測(cè)組分和所生成的有色物質(zhì)之間必須有穩(wěn)定的化學(xué)計(jì)量關(guān)系；

(2)反應(yīng)產(chǎn)物必須組成恒定、有足夠的穩(wěn)定性，摩爾吸光系數(shù)大（﹥104），以保證測(cè)量結(jié)果有良好的重現(xiàn)性；

(3)如顯色劑本身有色,則反應(yīng)產(chǎn)物的顏色與顯色劑的顏色必須有明顯的差別,產(chǎn)物與顯色劑的最大吸收波長(zhǎng)的差別要在60nm以上，才能分辨產(chǎn)物與顯色劑的吸收。

(4)顯色反應(yīng)必須有較好的選擇性、干擾少或干擾易消除。

顯色反應(yīng)的條件很重要，只有創(chuàng)造合適的條件，才能提高反應(yīng)的靈敏性、選擇性和穩(wěn)定性。顯色反應(yīng)主要選擇顯色劑用量、溶液酸度、顯色溫度、顯色時(shí)間、干擾離子消除方法。

（1）顯色劑的用量

為保證反應(yīng)進(jìn)行完全，需加入過(guò)量的顯色劑。但過(guò)量太多：會(huì)使生成物組成改變、導(dǎo)致顏色改變，不利于測(cè)定。例如：SCN-測(cè)定Mo5+

有些共存物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)，干擾測(cè)定。顯色劑本身有顏色，過(guò)量太多，使空白值增大。二、顯色反應(yīng)條件的選擇合適的顯色劑用量通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。如圖，用量在a-bmL之間，A大且穩(wěn)定。（2）溶液的酸度的選擇酸度對(duì)顯色劑顏色的影響：不同酸度下，顯色劑顏色不同。選合適酸度消除顯色劑顏色干擾。酸度對(duì)顯色反應(yīng)的影響：弱酸顯色劑顯色劑離解平衡：

（1）

顯色反應(yīng)：

（2）

[H+]濃度增大，平衡向HR方向移動(dòng)，導(dǎo)致[R-]降低，促進(jìn)MR解離，影響顯色反應(yīng)。[H+]太小，某些情況下會(huì)引起配合物組成改變，導(dǎo)致配合物顏色改變。例如：

pH=1.8～2.5：紫紅色

pH=4～8：

橙色

pH=8～11.5：黃色酸度對(duì)金屬離子存在狀態(tài)的影響：當(dāng)溶液pH較高時(shí)，許多高價(jià)金屬離子（Fe3+、Al3+、Bi3+等）可發(fā)生水解產(chǎn)生氫氧化物沉淀，從而使金屬離子濃度降低，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。例如：pH>12：沉淀適宜的pH通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。固定待測(cè)組分和顯色劑濃度，在不同pH下進(jìn)行顯色反應(yīng)，分別測(cè)定A，繪制A-pH曲線，A較大時(shí)對(duì)應(yīng)的pH值。（3）顯色溫度的選擇一般顯色反應(yīng)須在室溫下進(jìn)行，但有些氧化還原或縮合反應(yīng)需要加熱，合適的溫度需要試驗(yàn)確定。不同溫度下顯色后測(cè)定A，繪制A-T曲線，選擇A較大時(shí)對(duì)應(yīng)的溫度。（4）顯色時(shí)間的選擇

①不同顯色反應(yīng)速度不同，完成反應(yīng)所需要的時(shí)間也不同。

②有色產(chǎn)物在空氣中的穩(wěn)定性不同，吸收度A隨放置時(shí)間發(fā)生變化適宜的顯色反應(yīng)需通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。從顯色反應(yīng)開(kāi)始，每隔一段時(shí)間測(cè)定一次A，繪制做A-t變化曲線，選擇A最大時(shí)對(duì)應(yīng)的時(shí)間為顯色反應(yīng)時(shí)間。（5）干擾離子消除方法的選擇共存離子若本身有顏色或能與顯色劑生成有色化合物對(duì)測(cè)定產(chǎn)生干擾檢驗(yàn)干擾離子的方法：向待測(cè)組分標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入一定量可能存在的干擾離子，同時(shí)測(cè)定含與不含干擾離子的標(biāo)準(zhǔn)溶液的A，計(jì)算分析結(jié)果的相對(duì)誤差。找出相對(duì)誤差為5%時(shí)所加入的干擾離子的量，這個(gè)量越小表明此離子越容易引起干擾。消除干擾離子的方法：*加入配位掩蔽劑：掩蔽劑與干擾離子生成無(wú)色配合物以消除干擾。例：丁二酮肟測(cè)定Ni時(shí)，F(xiàn)e干擾，檸檬酸做掩蔽劑*加入氧化劑或還原劑：氧化劑或還原劑與干擾離子反應(yīng)，改變干擾離子價(jià)態(tài)以消除干擾。例：鉻天青S測(cè)定Al時(shí)，F(xiàn)e3+干擾，加Vc使Fe3+還原為Fe2+消除干擾。*選擇適宜的顯色條件：控制溶液酸度，使干擾離子不與顯色劑反應(yīng)而消除干擾。例：磺基水楊酸測(cè)定Fe3+時(shí)，Cu2+干擾測(cè)定。若控制pH為2.5左右，Cu2+則不與試劑顯色，從而消除Cu2+的干擾。*分離干擾離子：采用沉淀、離子交換、萃取等法分離干擾離子。續(xù)前三、吸光度測(cè)量的條件選擇測(cè)量條件的選擇主要包括：測(cè)量波長(zhǎng)、吸光度讀數(shù)范圍、參比溶液1）測(cè)量波長(zhǎng)的選擇：繪制待測(cè)組分吸收光譜。選擇λmax下測(cè)定，靈敏度最高。干擾組分在λmax處有吸收，根據(jù)“吸收大，干擾小”的原則選擇測(cè)定波長(zhǎng)。2）吸光度讀數(shù)范圍的選擇：可見(jiàn)分光光度計(jì)有一定的測(cè)量誤差。測(cè)量誤差主要是指透光度（T）測(cè)量誤差ΔT。儀器的性能不同，誤差的大小也不同。性能越好，誤差越小。測(cè)量誤差的大小由儀器決定，儀器一定，ΔT一定。大多數(shù)分光光度計(jì)的ΔT在為了得到較高的準(zhǔn)確度一般選則A=0.2~0.8或T=15～65%范圍內(nèi)測(cè)定?？赏ㄟ^(guò)控制溶液濃度使A在0.2~0.8范圍內(nèi)。根據(jù)光的吸收定律，ΔT引起的濃度相對(duì)誤差ΔC/C的計(jì)算公式：教科書(shū)P58表4-2列出了當(dāng)ΔT=時(shí)，不同T(或A)的相對(duì)濃度誤差值。當(dāng)T%在15~65%或A在0.2~0.8范圍內(nèi)，濃度相對(duì)誤差較小。續(xù)前3）參比溶液(空白溶液)的選擇測(cè)定時(shí)，調(diào)節(jié)參比溶液的T為100%，A為0。采用空白對(duì)比消除因溶劑和容器的吸收、光的散射和界面反射等因素對(duì)透光度的干擾。參比溶液有下面幾種