云南獐牙菜化學(xué)成分的研究

云南獐牙菜化學(xué)成分的研究

云南木犀花是龍膽科植物，產(chǎn)于云南。該屬植物有170多種,我國約有70多種,其中約20種可作為藥用,主要用于治療肝膽疾病和炎癥性疾病。云南獐牙菜全草入藥,有清肝利膽、清熱除濕的功效,主治急性黃疸型肝炎、膽囊炎等。其化學(xué)成分研究曾有報道,主要為酮類和內(nèi)酯類成分。筆者對其全草的化學(xué)成分進行了研究,通過各種柱色譜分離得到了9個化合物,根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)分析分別鑒定為齊墩果酸(oleanolicacid,Ⅰ)、β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅱ)、豆甾醇(stigmasterol,Ⅲ)、雛菊葉龍膽酮(bellidifolin,Ⅳ)、去甲基雛菊葉龍膽酮(demethylbellidifolin,Ⅴ)、龍膽黃素(gentisin,Ⅵ)、當藥醇苷(swertianolin,Ⅶ)、2′-間羥基苯甲酰獐牙菜苷(deacetylcentapicrin,Ⅷ)、維太菊苷(vittadinoside,Ⅸ)?；衔铫瘛鶠槭状螐脑撝参镏械玫?。1高效液相色譜法測定化合物熔點用WRX-1S型顯微熱分析儀測定,溫度未校正;核磁共振波譜用BrukerAVANCE400型核磁共振儀測定;質(zhì)譜用HP1100LC/MSD型液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用分析儀測定;分析型HPLC采用美國戴安公司UltiMate3000型高效液相色譜儀;制備型HPLC采用大連依立特公司EC2000型高效液相色譜儀。薄層色譜硅膠、柱色譜硅膠均購自青島海洋化工廠;SephadexLH-20色譜填料購自GE公司;色譜甲醇為天津康科德公司生產(chǎn);其他試劑均為分析純。云南獐牙菜(SwertiayunnanensisBurk.)于2007年購自四川成都,由大連工業(yè)大學(xué)朱靖博教授鑒定。2色譜純化和測定化合物云南獐牙菜全草20kg以甲醇熱回流提取,得粗提物浸膏1.5kg。浸膏以4kg硅膠(71～154μm)拌勻,依次用環(huán)己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇(體積比1∶1)、甲醇洗脫,分別得到環(huán)己烷洗脫部分(Fr.1,180g)、二氯甲烷洗脫部分(Fr.2,320g)、乙酸乙酯洗脫部分(Fr.3,400g)、乙酸乙酯-甲醇(體積比1∶1)洗脫部分(Fr.4,350g)、甲醇洗脫部分(Fr.5,200g)。Fr.1與Fr.2合并,經(jīng)硅膠制備柱色譜分離,以環(huán)己烷-乙酸乙酯(體積比9∶1→1∶9)梯度洗脫。環(huán)己烷-乙酸乙酯體積比8∶2洗脫部分析出白色固體,經(jīng)過反復(fù)重結(jié)晶得到化合物Ⅰ(5.50g);環(huán)己烷-乙酸乙酯體積比7∶3洗脫部分經(jīng)硅膠柱色譜,以二氯甲烷-甲醇(體積比9∶1→1∶1)進行梯度洗脫,二氯甲烷-甲醇體積比5∶1洗脫部分析出白色固體,經(jīng)乙酸乙酯重結(jié)晶,得到化合物Ⅱ(0.32g);二氯甲烷-甲醇體積比8∶2洗脫部分經(jīng)SephadexLH-20柱色譜純化(甲醇洗脫)得到化合物Ⅲ(0.10g);環(huán)己烷-乙酸乙酯體積比7∶3洗脫部分析出黃色粉末,經(jīng)甲醇反復(fù)清洗,SephadexLH-20柱色譜純化(甲醇洗脫)得到化合物Ⅳ(0.55g);環(huán)己烷-乙酸乙酯體積比6∶4洗脫部分析出黃色粉末,經(jīng)SephadexLH-20柱色譜純化(甲醇洗脫)得到化合物Ⅴ(0.20g);以二氯甲烷-甲醇(體積比5∶1→0)進行梯度洗脫,二氯甲烷-甲醇體積比3∶1洗脫部分得到化合物Ⅵ(0.08g)。Fr.3部分(400g)經(jīng)硅膠制備液相色譜分離,二氯甲烷-甲醇梯度洗脫,二氯甲烷-甲醇體積比5∶1洗脫部分析出淡黃色針狀結(jié)晶Ⅷ(1.5g);二氯甲烷-甲醇體積比8∶2洗脫部分經(jīng)SephadexLH-20(甲醇洗脫)柱色譜純化得到化合物Ⅶ(0.05g)。Fr.4部分(350g)經(jīng)硅膠柱色譜分離,以二氯甲烷-甲醇(體積比9∶1→1∶9)梯度洗脫,二氯甲烷-甲醇體積比9∶1洗脫部分經(jīng)硅膠柱色譜分離,再經(jīng)二氯甲烷-甲醇(體積比10∶1)洗脫得到化合物Ⅸ(0.05g)。3齊墩羧酸、標準品、豆哌醇化合物Ⅰ:白色片狀晶體(甲醇),mp306～310℃。負離子ESI-MSm/z:455[M-H]-。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:2.72(1H,dd,J=9.6,4.0Hz,Hβ-18),5.20(1H,s,H-12),3.02(1H,m,Hα-3),1.04、0.93、0.91、0.88、0.86、0.71、0.68(each3H,s,7×CH3)。13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:38.5(C-1)、27.4(C-2)、77.3(C-3)、38.8(C-4)、55.2(C-5)、18.5(C-6)、32.9(C-7)、39.3(C-8)、47.5(C-9)、37.1(C-10)、23.1(C-11)、122.0(C-12)、144.3(C-13)、41.8(C-14)、27.7(C-15)、23.4(C-16)、46.1(C-17)、41.3(C-18)、45.9(C-19)、30.9(C-20)、33.8(C-21)、32.5(C-22)、28.7(C-23)、15.6(C-24)、16.5(C-25)、17.3(C-26)、26.1(C-27)、179.0(C-28)、33.3(C-29)、23.8(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的齊墩果酸一致,鑒定化合物Ⅰ為齊墩果酸。化合物Ⅱ:白色針狀結(jié)晶(乙酸乙酯),mp136.0～137.0℃。負離子ESI-MSm/z:413[M-H]-。與β-谷甾醇對照品進行TLC對照,其Rf值和濃硫酸-醋酐顯色反應(yīng)均一致,故確定化合物Ⅱ為β-谷甾醇。化合物Ⅲ:白色無定形粉末(乙酸乙酯),mp155～159℃。負離子ESI-MSm/z:411[M-H]-。與濃硫酸-香草醛反應(yīng)顯棕紅色。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:3.53(1H,m,H-3),5.35(1H,brd,J=4.8Hz,H-6),5.02(1H,dd,J=15.2,8.8Hz,H-22),5.14(1H,dd,J=15.2,8.4Hz,H-23),1.01、0.98、0.89、0.82、0.81、0.64(18H,6×CH3)。13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:37.3(C-1)、31.9(C-2)、71.8(C-3)、42.3(C-4)、140.8(C-5)、121.7(C-6)、31.9(C-7)、31.7(C-8)、50.2(C-9)、36.5(C-10)、21.2(C-11)、39.7(C-12)、42.2(C-13)、56.9(C-14)、24.3(C-15)、28.9(C-16)、56.8(C-17)、12.1(C-18)、19.4(C-19)、40.5(C-20)、21.1(C-21)、138.3(C-22)、129.3(C-23)、51.2(C-24)、31.7(C-25)、21.2(C-26)、19.4(C-27)、25.4(C-28)、11.9(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的豆甾醇一致,鑒定化合物Ⅲ為豆甾醇?；衔铫?黃色無定形粉末(乙酸乙酯),mp253～260℃。正離子ESI-MSm/z:275[M+H]+。與三氯化鐵反應(yīng)顯紫黑色。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.92(1H,s,1-OH),11.08(1H,s,8-OH),9.70(1H,s,5-OH),6.41、6.62(each1H,d,J=2.0Hz,H-2,4),7.25、6.64(each1H,d,J=8.8Hz,H-6,7),3.91(3H,s,3-OCH3)。13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:162.4(C-1)、97.8(C-2)、167.6(C-3)、93.5(C-4)、157.9(C-4a)、143.8(C-4b)、137.8(C-5)、124.3(C-6)、110.0(C-7)、152.3(C-8)、108.0(C-8a)、102.6(C-8b)、184.6(C-9)、56.7(3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的雛菊葉龍膽酮一致,鑒定化合物Ⅳ為雛菊葉龍膽酮?；衔铫?黃色無定形粉末(乙酸乙酯),mp260～264℃。負離子ESI-MSm/z:259[M-H]-。與三氯化鐵反應(yīng)顯紫黑色。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.90(1H,s,1-OH),11.14(2H,s,3,8-OH),9.63(1H,s,5-OH),7.23、6.62(each1H,d,J=8.8Hz,H-6,7),6.22、6.41(each1H,s,H-2,4)。13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:162.2(C-1)、98.4(C-2)、166.4(C-3)、94.2(C-4)、157.4(C-4a)、143.2(C-4b)、137.1(C-5)、123.6(C-6)、109.3(C-7)、151.7(C-8)、107.2(C-8a)、101.1(C-8b)、183.6(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的去甲基雛菊葉龍膽酮一致,鑒定化合物Ⅴ為去甲基雛菊葉龍膽酮?；衔铫?黃色無定形粉末(乙酸乙酯),mp264～268℃。負離子ESI-MSm/z:257[M-H]-。與三氯化鐵反應(yīng)顯藍黑色。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.86(1H,s,1-OH)、10.01(1H,s,7-OH)、7.47(1H,d,J=9.2Hz,H-5)、7.41(1H,d,J=3.2Hz,H-8)、7.30(1H,dd,J=8.8,3.2Hz,H-6)、6.56(1H,d,J=2.0Hz,H-4)、6.35(1H,d,J=2.0Hz,H-2)、3.88(3H,s,OCH3)。13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:162.9(C-1)、97.2(C-2)、166.8(C-3)、92.8(C-4)、157.8(C-4a)、149.5(C-4b)、119.4(C-5)、125.1(C-6)、154.5(C-7)、108.4(C-8)、120.8(C-8a)、103.2(C-8b)、180.5(C-9)、56.5(3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的龍膽黃素一致,鑒定化合物Ⅵ為龍膽黃素?；衔铫?黃色無定形粉末(甲醇),mp243～244℃。正離子ESI-MSm/z:437[M+H]+。與三氯化鐵反應(yīng)顯藍黑色,Molish反應(yīng)陽性。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:6.37、6.58(each1H,d,J=2.0Hz,H-2,4),7.27、7.12(each1H,d,J=9.2Hz,H-6,7),3.89(3H,s,3-OCH3),4.81(1H,d,J=7.6Hz,H-1′),3.20～3.80(m,H-2′～H-6′)。13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:163.2(C-1)、97.7(C-2)、166.7(C-3)、92.7(C-4)、156.9(C-4a)、145.5(C-4b)、141.5(C-5)、121.6(C-6)、112.8(C-7)、148.9(C-8)、112.4(C-8a)、103.6(C-8b)、181.5(C-9)、56.6(3-OCH3)、103.6(C-1′)、74.0(C-2′)、76.6(C-3′)、70.2(C-4′)、77.9(C-5′)、61.3(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的當藥醇苷一致,鑒定化合物Ⅶ為當藥醇苷?；衔铫?淡黃色針狀結(jié)晶(乙酸乙酯),mp180.0～181.0℃。負離子ESI-MSm/z:477.2[M-H]-。Molish反應(yīng)陽性。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:4.86(1H,d,J=8.0Hz,H-1),7.20(1H,s,H-3),2.52(1H,m,H-5),1.36(1H,qd,J=12.8,3.6Hz,H-6a),1.62(1H,dt,J=13.6,2.4Hz,H-6b),3.68(1H,m,H-7a),4.19(1H,dt,J=5.6,1.6Hz,H-7b),5.33(1H,m,H-8),2.62(1H,brt,J=8.4Hz,H-9),5.31(1H,dd,J=6.0,2.4Hz,H-10a),5.38(1H,dd,J=5.6,1.6Hz,H-10b),5.47(1H,d,J=5.6Hz,H-1′),4.74(1H,m,H-2′),3.51(1H,m,H-3′),3.21(1H,m,H-4′),3.35(1H,m,H-5′),3.48、3.74(each1H,m,H-6′),7.31(1H,s,H-2″),7.29(1H,d,J=7.6Hz,H-4″),7.23(1H,dd,J=6.4,2.8Hz,H-5″),6.97(1H,dd,J=8.8,2.0Hz,H-6″),9.75(1H,s,3″-OH)。13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:95.5(C-1)、151.2(C-3)、105.0(C-4)、27.6(C-5)、24.5(C-6)、67.8(C-7)、132.2(C-8)、41.4(C-9)、121.0(C-10)、163.7(C-11)、95.5(C-1′)、74.4(C-2′)、73.9(C-3′)、70.7(C-4′)、78.0(C-5′)、61.3(C-6′)、131.2(C-1″)、115.9(C-2″)、157.8(C-3″)、120.0(C-4″)、130.0(C-5″)、120.7(C-6″)、165.6(C-7″)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的2′-間羥基苯甲酰獐牙菜苷一致,鑒定化合物Ⅷ為2′-間羥基苯甲酰獐牙菜苷?；衔铫?白色片狀結(jié)晶(甲醇),mp303～305℃。濃硫酸-