揚(yáng)子鱷野外種群資源調(diào)查技術(shù)規(guī)程

揚(yáng)子鱷野外種群資源調(diào)查技術(shù)規(guī)程范圍本規(guī)程規(guī)定了揚(yáng)子鱷野外種群數(shù)量調(diào)查的相關(guān)技術(shù)，包括調(diào)查目的、調(diào)查對象、調(diào)查范圍、調(diào)查時間、調(diào)查內(nèi)容等。野外放歸種群及棲息地監(jiān)測可參照使用。本標(biāo)準(zhǔn)適用于野生動物相關(guān)自然保護(hù)地管理機(jī)構(gòu)，其他機(jī)構(gòu)可參照執(zhí)行。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。HJ710.5生物多樣性觀測技術(shù)導(dǎo)則爬行動物GB/T37364.1陸生野生動物及其棲息地調(diào)查技術(shù)規(guī)程第1部分:導(dǎo)則術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。揚(yáng)子鱷Alligatorsinensis（Chinesealligator）揚(yáng)子鱷屬爬行綱（Reptilia）、鱷目（Crocodylia）、鼉科（Alligatoridae）、鼉屬（Alligator），野外種群主要分布于南部的蕪湖市和宣城市。棲息地Habitat野外揚(yáng)子鱷棲息地現(xiàn)主要分為三種類型：第一類棲息地：殘留濕地，一般沿著主河道，地勢低洼、寬闊、肥沃的山谷。第二類棲息地：中間地帶，支流山谷間的池塘，但其以上的山腰多為耕地。第三類棲息地：支流山谷間的池塘，其下多為稻田，上部是樹林（松樹為主）。。調(diào)查區(qū)域Surveyarea指具有一定的水文聯(lián)系和生態(tài)功能的揚(yáng)子鱷分布區(qū)域。調(diào)查地點(diǎn)Surveylocation指在各調(diào)查區(qū)域內(nèi)確定的調(diào)查單元，該單元應(yīng)具有相對明確的邊界和固定的范圍，并使調(diào)查結(jié)果具有相對獨(dú)立性。夜間燈光照射計數(shù)法Nightlightspotcountingmethod鱷類特有的一種野外數(shù)量調(diào)查方法，指在每個調(diào)查地點(diǎn)的觀測分區(qū)內(nèi)，日落以后，利用夜間揚(yáng)子鱷眼睛在強(qiáng)光照射下反射出橙紅光的特點(diǎn)，對發(fā)現(xiàn)的實(shí)體進(jìn)行逐一計數(shù)和統(tǒng)計，從而獲得調(diào)查地點(diǎn)范圍內(nèi)揚(yáng)子鱷數(shù)量的方法。間接調(diào)查法Indirectsurveymethod共包括3種調(diào)查方法：（1）基于環(huán)境DNA技術(shù)的野外揚(yáng)子鱷蹤跡調(diào)查法；（2）揚(yáng)子鱷幼鱷鳴聲回放法；（3）問卷走訪法對調(diào)查區(qū)域內(nèi)的揚(yáng)子鱷數(shù)量進(jìn)行調(diào)查的方法。種群數(shù)量populations一個種群中的物種個體數(shù)量?？倓t調(diào)查目的查清保護(hù)區(qū)及周邊地區(qū)的揚(yáng)子鱷野外種群數(shù)量、分布地點(diǎn)及棲息地現(xiàn)狀，掌握揚(yáng)子鱷野外種群的動態(tài)變化情況，建立揚(yáng)子鱷野外資源的連續(xù)性監(jiān)測檔案，為揚(yáng)子鱷野外種群保護(hù)的進(jìn)一步規(guī)范化、科學(xué)化管理提供決策依據(jù)。調(diào)查對象野外環(huán)境下的揚(yáng)子鱷及其棲息地。調(diào)查范圍安徽揚(yáng)子鱷國家級自然保護(hù)區(qū)及周邊所有可能存在揚(yáng)子鱷野外分布的區(qū)域。調(diào)查時間分為兩次調(diào)查。第一次調(diào)查時間宜為5月21日~6月10日，期間野生揚(yáng)子鱷都已結(jié)束冬眠，活動行為較強(qiáng)，處于求偶、交配階段，幾乎晝夜都在洞穴外活動，便于觀察計數(shù)和活動痕跡探查。第二次調(diào)查時間宜為8月25日~9月15日；期間處于揚(yáng)子鱷行為活躍期，可見揚(yáng)子鱷捕食、筑洞和護(hù)蛋巢等行為，便于觀察計數(shù)和活動痕跡探查，并且能發(fā)現(xiàn)野生揚(yáng)子鱷產(chǎn)卵情況。每次調(diào)查分為白天調(diào)查和夜晚調(diào)查，夜晚調(diào)查又分為兩個時間段：第一次調(diào)查：第一時間段20點(diǎn)開始，第二時間段22點(diǎn)開始。第二次調(diào)查：第一時間段22點(diǎn)開始，第二時間段24點(diǎn)開始。調(diào)查內(nèi)容揚(yáng)子鱷野生種群資源調(diào)查內(nèi)容包括：揚(yáng)子鱷分布現(xiàn)狀；揚(yáng)子鱷棲息地現(xiàn)狀；揚(yáng)子鱷種群數(shù)量及變動趨勢；揚(yáng)子鱷及其棲息地受威脅因素；揚(yáng)子鱷及其棲息地保護(hù)現(xiàn)狀；揚(yáng)子鱷分布區(qū)的社會經(jīng)濟(jì)情況；揚(yáng)子鱷與周邊居民的沖突情況。調(diào)查方案調(diào)查區(qū)域確定根據(jù)早期的揚(yáng)子鱷野外調(diào)查數(shù)據(jù)及近期巡護(hù)記錄等，確定揚(yáng)子鱷野外種群資源監(jiān)測的調(diào)查區(qū)域。調(diào)查地點(diǎn)確定在劃定的調(diào)查區(qū)域內(nèi)，根據(jù)揚(yáng)子鱷的分布情況，確定揚(yáng)子鱷野生種群資源調(diào)查的調(diào)查地點(diǎn)及各調(diào)查地點(diǎn)的調(diào)查范圍。調(diào)查方法預(yù)調(diào)查利用問卷走訪和環(huán)境DNA技術(shù)，對一些揚(yáng)子鱷野外的潛在分布區(qū)進(jìn)行預(yù)先調(diào)查，以便于更精確地在調(diào)查區(qū)域內(nèi)設(shè)定調(diào)查地點(diǎn)。5.3.1.1問卷走訪通過問卷調(diào)查和走訪，初步確認(rèn)新增加的揚(yáng)子鱷潛在分布地點(diǎn)，同時搜集有關(guān)揚(yáng)子鱷分布的信息，包括個體數(shù)量、生存狀態(tài)、活動區(qū)域、見證人等，并了解掌握社區(qū)群眾對揚(yáng)子鱷保護(hù)的態(tài)度。5.3.1.2基于環(huán)境DNA技術(shù)的野外揚(yáng)子鱷蹤跡調(diào)查（1）水體樣品采集：使用2L規(guī)格的有機(jī)玻璃水體采樣器，在每個有鱷活動的塘口分三個位點(diǎn)隨機(jī)收集水體，采取中層水樣。將3個位點(diǎn)混合形成一個3L的水樣，混合后的水樣保存于2個無菌的1.5L無菌采集瓶中待過濾。每個塘口重復(fù)3次采樣。分別對采集的水樣進(jìn)行標(biāo)記（地點(diǎn)、時間）。所有采集瓶及過濾器均使用10%次氯酸鈉進(jìn)行無菌處理，采集過程中全部戴一次性手套操作。以相同體積的無菌雙蒸水水樣作為陰性對照。野外采集的水樣冷凍保存1～2d，建議冷藏運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。（2）樣品處理及PCR擴(kuò)增：先使用無紡布的過濾布200目對水樣進(jìn)行預(yù)先過濾，去除水體樣品中的過多泥沙及水草雜質(zhì)，以利于后續(xù)水體過濾。初步過濾后的水體利用隔膜真空泵及0.45ul孔徑濾膜進(jìn)行水體過濾，-20℃冷凍保存。待所有水體過濾完畢后，利用環(huán)境DNA抽提試劑盒進(jìn)行總DNA抽提。利用本課題組前期的揚(yáng)子鱷物種特異性鑒定研究成果，使用普通PCR或定量PCR對水體總DNA進(jìn)行擴(kuò)增，根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果判定采樣點(diǎn)水域近期有無揚(yáng)子鱷活動。實(shí)地調(diào)查5.3.2.1鳴聲回放法利用便攜式MP3外放裝置播放事先錄制好的幼鱷求助鳴叫聲頻文件，引誘親鱷出現(xiàn)，增大遇見率。每個塘口應(yīng)選擇至少2個不同的點(diǎn)位進(jìn)行重復(fù)操作。對于水域面積較大的分布點(diǎn)（如水庫、河流），調(diào)查人員應(yīng)乘充氣橡皮艇至水面中心點(diǎn)附近，盡可能地觀察全域。（1）播放聲音來源：使用便攜式專業(yè)錄音機(jī)（SoundDevices，Model702，SoundDevices，WI，USA；frequencyrange：10Hz~128kHz）和超聲話筒（G.R.A.S.40BE,G.R.A.S.Sound&VibrationA/S,Holte,Denmark,frequencyrange:5Hz～100kHz）Hz，進(jìn)行錄音，錄取幼鱷叫聲20聲以上；使用同樣的方法錄取自然環(huán)境下自然音15秒。（2）剪輯：將錄取的整體聲音片段導(dǎo)入CoolEdi_2.1軟件，截取每一聲的有效叫聲片段，篩選典型的幼鱷鳴叫聲兩聲。使用CoolEdi_2.1軟件，以15秒自然音為間隔音，將兩聲典型的幼鱷鳴叫聲依次排序，每聲播放十次，組合成5分鐘以上的長聲音片段。（3）播放：將聲音導(dǎo)入Sony-NWZ-B183FMP3，連接AltecLansing-OrbitIM227播放器，進(jìn)行播放。（4）記錄：使用Canon-BP-808攝像機(jī)，記錄播放期間的水面情況，進(jìn)行統(tǒng)計分析。5.3.2.2白天痕跡調(diào)查痕跡調(diào)查主要指白天統(tǒng)計揚(yáng)子鱷在野外分布或活動的痕跡（可與訪問調(diào)查結(jié)合起來），通過在分布點(diǎn)的溝、塘、水庫等水體岸邊尋找其洞穴及巢址，并根據(jù)糞便、足跡、尾跡等印跡調(diào)查來進(jìn)一步確定是否有鱷活動，并為夜間勘察制定好行進(jìn)線路，同時對其周邊生境（植被及水體情況、人為干擾等）進(jìn)行調(diào)查。5.3.2.3夜間燈光照射計數(shù)法利用夜間揚(yáng)子鱷眼睛在燈光照射下反射出橙紅光的特點(diǎn)來計數(shù)；調(diào)查時間一般是在天黑后至凌晨，期間調(diào)查人員沿著水體周邊陸地緩慢行走，邊走邊打開手電筒依次掃射全域水面，特別注意被植被掩蓋的水邊，記錄觀察到的揚(yáng)子鱷數(shù)量；然后關(guān)閉手電筒，靜候5分鐘，重復(fù)觀察至少3次，記錄觀察到的鱷數(shù)量，并估測鱷體大小。野外調(diào)查分布調(diào)查在調(diào)查區(qū)域的任一地點(diǎn)發(fā)現(xiàn)有揚(yáng)子鱷野外個體時，即認(rèn)為該調(diào)查地點(diǎn)是揚(yáng)子鱷的分布點(diǎn)。與此同時，及時記錄揚(yáng)子鱷分布點(diǎn)的地理位置信息，并依據(jù)保護(hù)區(qū)制定的命名規(guī)則對分布點(diǎn)進(jìn)行規(guī)范命名。種群數(shù)量調(diào)查對每一調(diào)查地點(diǎn)的所有揚(yáng)子鱷個體進(jìn)行計數(shù)，同時記錄下小地名、數(shù)量、經(jīng)緯度和海拔高程等信息。棲息地調(diào)查記錄揚(yáng)子鱷數(shù)量的同時，還應(yīng)記錄該棲息地的相關(guān)信息，包括地貌、植被類型等棲息地因子，以及人為干擾和潛在威脅等情況。受威脅因素調(diào)查參考《第二次全國陸生野生動物資源調(diào)查技術(shù)規(guī)程》的相關(guān)要求，調(diào)查對每個調(diào)查地點(diǎn)的揚(yáng)子鱷及棲息地受干擾狀況及受威脅因素。受威脅程度和受干擾強(qiáng)度分為強(qiáng)、中、弱。保護(hù)現(xiàn)狀調(diào)查實(shí)地調(diào)查和訪問調(diào)查相結(jié)合，記錄每個調(diào)查地點(diǎn)的保護(hù)狀況。人鱷沖突調(diào)查走訪社區(qū)居民，了解記錄揚(yáng)子鱷對居民財產(chǎn)、生產(chǎn)、生活的干擾情況，以及居民對揚(yáng)子鱷保護(hù)的態(tài)度。影響資料在每一調(diào)查地點(diǎn)都應(yīng)盡可能獲得相關(guān)的揚(yáng)子鱷野外物種照片或視頻資料。照片應(yīng)在野外自然狀態(tài)下拍攝獲得，圖片清晰，鑒別特征明顯。數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計匯總調(diào)查結(jié)束后，開始統(tǒng)計調(diào)查數(shù)據(jù)，并對結(jié)果進(jìn)行分析，評估揚(yáng)子鱷野生種群數(shù)量及其棲息地變化狀況。數(shù)據(jù)統(tǒng)計匯總填寫的調(diào)查表格，檢查核實(shí)表格是否完整詳實(shí)，認(rèn)真統(tǒng)計各調(diào)查地點(diǎn)的揚(yáng)子鱷數(shù)量及分布狀況，得出實(shí)見揚(yáng)子鱷數(shù)量和揚(yáng)子鱷分布面積，給出鱷個體大小分類數(shù)量。分析評估結(jié)合歷史調(diào)查數(shù)據(jù)對本次調(diào)查進(jìn)行全面分析，按照IUCN物種生存委員會鱷類專家組提供的鱷類野外種群數(shù)量評估方法，統(tǒng)計野生揚(yáng)子鱷種群數(shù)量。同時，評估揚(yáng)子鱷及其棲息地保護(hù)狀況及受威脅因素。調(diào)查報告編撰根據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)、資料以及評估結(jié)果，編撰調(diào)查報告。調(diào)查結(jié)果調(diào)查成果包括各調(diào)查地點(diǎn)和調(diào)查區(qū)域的所有表格材料、圖面材料、文字材料、影像材料。具體為：調(diào)查地點(diǎn)（1）表格材料揚(yáng)子鱷野生種群資源數(shù)量調(diào)查記錄表；各調(diào)查地點(diǎn)揚(yáng)子鱷及棲息地保護(hù)、受干擾和受威脅因素調(diào)查評估表。（2）圖面材料各調(diào)查線路分布圖；揚(yáng)子鱷發(fā)現(xiàn)位點(diǎn)圖；各調(diào)查地點(diǎn)范圍圖；各調(diào)查地點(diǎn)分布圖。（3）文字材料各調(diào)查地點(diǎn)調(diào)查報告。（4）影像材料揚(yáng)子鱷調(diào)查照片、視頻等相關(guān)材料。調(diào)查區(qū)域（1）表格材料各調(diào)查區(qū)域揚(yáng)子鱷調(diào)查統(tǒng)計表。（2）圖面材料各調(diào)查揚(yáng)子鱷分布圖；各調(diào)查區(qū)域范圍圖。（3）文字材料各調(diào)查區(qū)域調(diào)查報告。（4）影像材料揚(yáng)子鱷調(diào)查照片、視頻等相關(guān)材料。質(zhì)量控制人員構(gòu)成承擔(dān)單位和管理單位應(yīng)設(shè)置相應(yīng)的管理人員，制定質(zhì)量管理制度，加強(qiáng)質(zhì)量管理工作。野外調(diào)查人員應(yīng)有野外調(diào)查經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)人員或經(jīng)過培訓(xùn)考核的人員組成。成果要求文字材料與表格材料文字材料與表格材料應(yīng)按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)制定印刷，并應(yīng)附有調(diào)查人員名單及主要分工。圖面材料符合專題圖的制圖標(biāo)準(zhǔn)及精度要求，具有準(zhǔn)確完整的制圖投影參數(shù)。電子材料文字材料應(yīng)為doc或docx格式，表格材料為xls或xlsx格式，圖面材料為ARCGIS矢量文件；照片、錄像均為未經(jīng)任何處理的原始素材。重新調(diào)查質(zhì)量不合格的調(diào)查地點(diǎn)或調(diào)查區(qū)域應(yīng)進(jìn)行重新調(diào)查。高新技術(shù)運(yùn)用鼓勵引用新技術(shù)、新手段、新方法進(jìn)行調(diào)查；如3S技術(shù)、新型環(huán)境DNA檢測技術(shù)等的應(yīng)用。

附錄A資料性附錄表A.1野外揚(yáng)子鱷資源調(diào)查問卷訪問者：訪問地點(diǎn)：訪問時間：經(jīng)緯度：揚(yáng)子鱷種群數(shù)量的估計？；附近有沒有污染源？如重金屬礦區(qū)、冶煉廠、農(nóng)藥廠等；與揚(yáng)子鱷生活的水域相通處有無水壩水電站？；目前主要使用哪些農(nóng)藥？；村民目前主要使用什么能源？；近期有無發(fā)現(xiàn)揚(yáng)子鱷的蹤跡（如足跡、尾部拖跡、巢址、洞穴及吼叫聲等）；對保護(hù)野生揚(yáng)子鱷的態(tài)度？；你周圍的揚(yáng)子鱷是否得到了保護(hù)？從年代開始保護(hù)的。保護(hù)前后村民對揚(yáng)子鱷的態(tài)度有何變化？揚(yáng)子鱷數(shù)量仍在下降：（是否）？主要原因是什么？你對揚(yáng)子鱷的保護(hù)現(xiàn)狀滿意嗎？；談?wù)勀銓P(yáng)子鱷保護(hù)的建議。；其他：

表A.2揚(yáng)子鱷資源調(diào)初查結(jié)果記錄調(diào)查地點(diǎn)：市縣（區(qū)）村小地名：經(jīng)緯度：海拔高度：調(diào)查日期：調(diào)查人：區(qū)縣地點(diǎn)是否歷史分布天氣鱷編號發(fā)現(xiàn)時間是否成體估計體長小生境及位置備注廣德

（示例）朱村是晴123:12否60-70cm東岸上段1米水面靜浮水面朱村是晴223:16否60-70cm東岸中段沿岸靜浮后潛入水中朱村是晴323:21亞成體110cm塘西北角距北岸1.8米靜浮后游動

表A.3野生揚(yáng)子鱷棲息環(huán)境調(diào)查表調(diào)查地點(diǎn)：市縣（區(qū)）村小地名：經(jīng)緯度：海拔高度：調(diào)查日期：調(diào)查人：