玉龍美腮丹對(duì)家蠶壽命的影響

玉龍美腮丹對(duì)家蠶壽命的影響

七寶美贊丹是著名的抗老將領(lǐng)。原方為明·李時(shí)珍《本草綱目》引自明·萬(wàn)密齋《積善堂方》,功用為:“補(bǔ)腎元,烏須發(fā),延年益壽。治血?dú)獠蛔?贏峋周痹,腎虛無(wú)子,消渴,淋瀝,遺精,崩帶,癰瘡,痔腫”等。為探討本方的衰老生物學(xué)干預(yù)作用,多年來(lái),我們以動(dòng)物和人胚肺二倍體細(xì)胞等為研究對(duì)象,先后從生物壽命、衰老生化與生理,以及神經(jīng)生物學(xué)(另文報(bào)道)等多方面對(duì)本方進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)觀察。本研究主要為該方對(duì)生物壽命、衰老生化、抗應(yīng)激能力以及微量元素等方面的實(shí)驗(yàn)干預(yù)作用,現(xiàn)報(bào)道如下:1實(shí)驗(yàn)材料1.1專家門(mén)診量、布濾液、水從量、過(guò)濾①七寶美髯丹,藥物與用藥比例為:何首烏3、茯苓、牛膝、當(dāng)歸、枸杞子、菟絲子、補(bǔ)骨脂各1,藥材由湖北中醫(yī)學(xué)院專家門(mén)診部提供。水煎3次,紗布過(guò)濾,濃縮為100%濃度。②維生素E(VE),油劑,由湖北中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科提供,加蒸餾水以超聲震蕩儀制為1%濃度混懸液。其中用以細(xì)胞培養(yǎng)的藥物處理:七寶美髯丹藥液進(jìn)一步以乙醇提取法制備,含生藥濃度為10%,與VE混懸液均各以安瓿封裝,流動(dòng)蒸氣滅菌,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和儀器家蠶,黃鶴種,由湖北省農(nóng)科院蠶種場(chǎng)提供。Vistar大白鼠,♂,18月齡、4月齡,體重分別為500g±15g、200g±10g;昆明種小白鼠,♂、♀,體重20±2g,均由武漢同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。MRC-5人胚肺二倍體細(xì)胞,引進(jìn)于美國(guó),由中國(guó)典型物培養(yǎng)中心提供。1.3試劑和儀器桑葉,由湖北省農(nóng)科院蠶種場(chǎng)提供,每日采摘新鮮桑葉。1640細(xì)胞培養(yǎng)液,1640粉(美國(guó)產(chǎn)),無(wú)菌三蒸水配制,加小牛血清(湖北老年病研究提供)為細(xì)胞培養(yǎng)液濃度的10%,青、鏈霉素各10萬(wàn)u/1000ml。SOD(超氧化物歧化酶)標(biāo)準(zhǔn)品,由湖北省老年病研究所提供。MDA(丙二醛),瑞典產(chǎn)。TC、TG、LDL-c、HDL-c試劑盒,由上海長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供。胰島素放免試劑盒,北京北方免疫試劑研究所提供。SHEL-LAB二氧化碳培養(yǎng)箱,美國(guó)產(chǎn)。FT-632生物-化學(xué)光度計(jì),北京核儀器廠產(chǎn)。930熒光計(jì),江西醫(yī)療器械廠產(chǎn)。CPS-A超聲粉碎儀,上海超聲波儀器廠產(chǎn)。GDHP-81電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠產(chǎn)。H600電子顯微鏡,日本產(chǎn)。WFX-1F原子吸收分光光度計(jì),北京第二光學(xué)儀器廠產(chǎn)。氣態(tài)化原子裝置,同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)制。自動(dòng)生化分析儀,美國(guó)Bncore公司產(chǎn)。FH-2008γ-免疫計(jì)數(shù)器,國(guó)營(yíng)二六二廠產(chǎn)。Y型水迷路水槽,湖北中醫(yī)學(xué)院綜合實(shí)驗(yàn)室提供。2方法和結(jié)果2.1大鼠細(xì)胞生存檢測(cè)①預(yù)實(shí)驗(yàn):取第25代細(xì)胞,作七寶美髯丹細(xì)胞培養(yǎng)用藥適宜濃度實(shí)驗(yàn),分別設(shè)培養(yǎng)液藥物濃度為100、200、400、800、1600ppm共5個(gè)組,續(xù)傳10代左右,結(jié)果以400ppm藥物濃度的細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖最好。②正式實(shí)驗(yàn):取第25代細(xì)胞,分為3組及用藥濃度:七寶美髯丹組(400ppm)、VE(100ppm)組、空白對(duì)照組,每組6瓶細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)方法:常規(guī)1∶2傳代法。二氧化碳培養(yǎng)濃度5%。直至細(xì)胞傳代自然衰亡結(jié)束,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理細(xì)胞生存的傳代次數(shù)。以老齡大白鼠隨機(jī)分為3組:七寶美髯丹組、VE組、空白對(duì)照組,另取青齡大白鼠為青年空白對(duì)照組,共4組,每組10只大鼠。給藥:劑量按大鼠與人體表面積計(jì)算等效給藥,老、青空白組給予生理鹽水,灌胃容量為10ml/kg,1次/天,連續(xù)3個(gè)月。檢測(cè):①脂褐素:取大腦組織,硫酸奎寧熒光法測(cè)定含量。②淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)換率:無(wú)菌斷尾取血,以PHA為刺激原,細(xì)胞培養(yǎng),T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)。其余5個(gè)實(shí)驗(yàn)均頸動(dòng)脈插管取血,③全血SOD:化學(xué)發(fā)光法測(cè)定。④血清LPO:熒光MDA法測(cè)定。⑤微量元素:血清硒(Se)以氣態(tài)發(fā)生法測(cè)定,鋅(Zn)、銅(Cu)為火焰法測(cè)定,錳(Mn)、鎘(Cd)為石墨爐法測(cè)定。⑥血脂:血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-c)、高密度脂蛋白(HDL-c)均為酶法測(cè)定。⑦血漿胰島素:放免法測(cè)定。各取小白鼠30只,隨機(jī)分為3組:七寶美髯丹組、VE組、空白對(duì)照組,每組10只。給藥:劑量按小鼠與人體表面積計(jì)算等效量給藥,空白組給生理鹽水。灌胃容量為20ml/kg。連續(xù)10d。檢測(cè):①記憶力(♂):Y型水迷路法測(cè)定。②抗疲勞(♀):鼠尾負(fù)重10%游泳法測(cè)定。③耐缺氧(♀):250ml玻璃瓶密閉法測(cè)定。2.5統(tǒng)計(jì)方法3腎組織中抗衰老藥物的應(yīng)用我國(guó)運(yùn)用中藥抗老延年歷史悠久,自二千多年前《內(nèi)經(jīng)》提出腎氣盛衰決定著人的“生、長(zhǎng)、壯、老、已”理論以來(lái),歷代至今,大多均以腎虛致衰老立論,并且傳統(tǒng)的抗老延年方,其中以補(bǔ)腎為主的方約達(dá)總延緩衰老方的80%,七寶美髯丹即是其中著名抗老延年名方之一。生物衰老(Senescence)是一個(gè)組織與機(jī)能全面退化的進(jìn)程,由于很多非衰老性原因也可以導(dǎo)致某些組織與生理生化的改變,因此,國(guó)際公認(rèn)在抗衰老藥物作用研究中,必須進(jìn)行以生物壽命實(shí)驗(yàn)為主,并進(jìn)行衰老組織形態(tài)、生理、生化等多方面的綜合實(shí)驗(yàn),才能比較可靠地評(píng)價(jià)藥物的抗衰老作用。在抗衰老西藥方面,迄今雖提出公認(rèn)有效的VE(在抗自由基氧化等方面具有突出作用)等藥物,但也認(rèn)為其作用十分有限。3.1不同種類家蠶壽命的比較能否延長(zhǎng)生物的整體壽命,是國(guó)際衡量抗衰老藥物作用的首要實(shí)驗(yàn)方法。為此,我們進(jìn)行了動(dòng)物家蠶壽命和人胚肺二倍體細(xì)胞傳代的2項(xiàng)實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明,七寶美髯丹與VE均有非常顯著性延長(zhǎng)家蠶壽命和細(xì)胞繁殖傳代的存活壽命的作用,但七寶美髯丹在延長(zhǎng)整體生物家蠶的平均壽命、最高壽命、次高壽命和半數(shù)死亡壽命方面,能夠非常顯著性優(yōu)于VE;而VE在單純延長(zhǎng)細(xì)胞傳代方面,則非常顯著性優(yōu)于七寶美髯丹。但結(jié)合其他多方面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,表明七寶美髯丹比VE具有更為良好的抗生物整體衰老的作用。3.2血sod、ve含量主要包括SOD和LPO實(shí)驗(yàn),本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,七寶美髯丹和VE均能顯著性降低血漿LPO含量;但七寶美髯丹還能顯著性升高血SOD水平,而VE對(duì)此則沒(méi)有顯著性作用。提示VE雖具有清除自由基而抗強(qiáng)氧化的作用,但可能并沒(méi)有升高體內(nèi)抗氧化酶水平的作用,實(shí)驗(yàn)符合并支持了VE為一種強(qiáng)抗氧化劑的認(rèn)識(shí)。而七寶美髯丹除了可通過(guò)升高體內(nèi)抗氧化酶水平,間接以發(fā)揮抗強(qiáng)氧化作用而降低LPO,是否還具有類似VE的直接清除自由基作用,則有待進(jìn)一步研究。3.3對(duì)腦脂褐素的影響動(dòng)物在初生時(shí),雖然一些細(xì)胞內(nèi)即已有一定的脂褐素,但數(shù)量很少且體積小,但隨著年齡增長(zhǎng)直至老年,尤其在大腦、腦干、脊髓、心臟、肝臟等細(xì)胞內(nèi)脂褐素累積量多,體積大,因而又稱之為老年色素,起著擾亂細(xì)胞空間、影響細(xì)胞功能甚至導(dǎo)致細(xì)胞萎縮和死亡等的危害作用。實(shí)驗(yàn)表明七寶美髯丹具有顯著性減少大腦脂褐素含量的作用;VE雖對(duì)大腦脂褐素含量有一定減少,但統(tǒng)計(jì)無(wú)顯著性意義。此與我們?cè)趯?duì)老年大鼠大腦前額皮質(zhì)、老年小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的組織形態(tài)觀察中(另文報(bào)道),對(duì)大腦脂褐素形態(tài)影響的結(jié)果基本一致。3.4美評(píng)論員ve對(duì)美評(píng)論員糖作用的影響對(duì)于PHA刺激的T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)換率,七寶美髯丹具有非常顯著性升高的作用,VE對(duì)其具有顯著性升高作用,表明二藥均有增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能的作用,而以七寶美髯丹作用更強(qiáng)。3.5應(yīng)激能力的降低包括記憶力(Memory)、抗疲勞與耐缺氧實(shí)驗(yàn),老年具有應(yīng)激能力的明顯降低。實(shí)驗(yàn)表明,七寶美髯丹具有非常顯著的增強(qiáng)抗疲勞能力,顯著性增強(qiáng)記憶力和耐缺氧能力的作用,而VE對(duì)此3方面均無(wú)顯著性作用。3.6不同壽命美石丹對(duì)血清mn、cd、cu和cd比值的影響現(xiàn)有不少研究發(fā)現(xiàn),Se是體內(nèi)另一種抗氧化酶GSH-Px(谷胱甘肽氧化酶)的必需組成成分;而Zn與Cu均是人體必需微量元素之一;并有調(diào)查表明長(zhǎng)壽地區(qū)的頭發(fā)中的Mn含量顯著高于非長(zhǎng)壽地區(qū)者;Cd則是人體有害元素之一;一些長(zhǎng)壽地區(qū)的Zn/Cd比值高于非長(zhǎng)壽地區(qū)等。七寶美髯丹有顯著性升高Se、降低Cd和升高Zn/Cd比值的作用,對(duì)Mn、Cu和Zn的絕對(duì)含量則無(wú)顯著性影響;而VE對(duì)各微量元素均無(wú)顯著性影響,其有關(guān)作用機(jī)理尚不清楚,或許與中藥本身含有多種微量元素,及其成分和作用機(jī)理復(fù)雜等原因有關(guān)。3.7對(duì)血脂作用的影響老年大多有TG、TC、LDL-c升高,而HDL-c降低的高脂血癥(Hyperlipemia),是導(dǎo)致許多心腦血管疾病的重要原因之一,并在一定程度上與衰老相關(guān)。實(shí)驗(yàn)表明,七寶美髯丹對(duì)TC、TG無(wú)改善作用,但具有顯著性降低LDL-c、升高HDL-c以及升高HDL-c/LDL-c比值的作用,說(shuō)明該方具有較好抗血脂作用。VE也有一定升高HDL-c的作用,但對(duì)其它3項(xiàng)均無(wú)顯著改善作用。老年糖尿病也是老年高發(fā)性疾病之一,實(shí)驗(yàn)表明七寶美髯丹與VE,均能使老年動(dòng)物過(guò)高的胰島素(Insulin)水平下降,并接近青年對(duì)照組水平,但其機(jī)理尚不清楚。3.8抗生物體老作用數(shù)年來(lái),我們對(duì)傳統(tǒng)中醫(yī)藥延緩衰老進(jìn)行了大量理論與實(shí)驗(yàn)研究,通過(guò)本實(shí)驗(yàn),我們可進(jìn)一步認(rèn)為,衰老生物具有廣泛的生化與生理退行性改變,而七寶美髯丹對(duì)衰老生物具有廣泛改善生化及生理功能方面的作用,并可能是其具有較好的抗生物整體衰老作用的生物藥理學(xué)基礎(chǔ)。相對(duì)VE也具有一定的抗衰老作用,但或許由于其主要為抗氧化劑,突出體現(xiàn)為抗氧化作用強(qiáng),但對(duì)衰老生物的廣泛生化與生理退行改變以及對(duì)生物整體衰老的改善作用有限,而不及七寶美髯丹。從而也表明,傳統(tǒng)以補(bǔ)腎抗老延年,仍不失為行之有效的重要方法之一。但七寶美髯丹雖為有效延緩衰老方之一,由于其藥物組成較多,有效成分以及作用機(jī)理