氯沙坦抗動脈粥樣硬化作用及其機(jī)制的研究

氯沙坦抗動脈粥樣硬化作用及其機(jī)制的研究

近年來，一些科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了腎精-血管緊張素系統(tǒng)（ras），這參與了動脈硬化（as）的病理過程。然而，ras的主要成分是血管緊張素（a），它促進(jìn)了單核細(xì)胞產(chǎn)生單核細(xì)胞趨勢的形成。這提出了參與高等教育疾病的新觀點(diǎn)。近年來,國外學(xué)者用血管緊張素Ⅱ受體Ⅰ型(angiotensinⅡonetypereceptor,AT1R)拮抗劑氯沙坦治療AS的試驗(yàn)研究已引起廣泛的關(guān)注。氯沙坦具有抗AS的作用,但國內(nèi)外的報道結(jié)果差異較大。為進(jìn)一步探討氯沙坦對AS的療效,我們用氯沙坦對兔的AS模型進(jìn)行治療與觀察,報告如下。試驗(yàn)處理與檢測實(shí)驗(yàn)動物新西蘭雄性大白兔24只,體重1.5kg左右,由上海仁濟(jì)醫(yī)院動物房喂養(yǎng)。兔動脈粥樣硬化模型的建立24只新西蘭大白兔購自上海陳行動物實(shí)驗(yàn)場,對兔行動脈內(nèi)膜損傷術(shù)。方法為:2%戊巴比妥鈉2ml/kg,經(jīng)耳緣靜脈麻醉,常規(guī)消毒,分離右股動脈,結(jié)扎其遠(yuǎn)端,阻斷近心端血流,切開動脈前壁,向近心端插入4F-Fogarty球囊導(dǎo)管,在導(dǎo)管的后方連接盛有0.4ml生理鹽水的1ml注射器,將球囊插入左心室,然后回撤到離主動脈瓣0.5cm處,擴(kuò)張球囊,拉回導(dǎo)管至股動脈處,回抽注射器,重復(fù)三次,取出導(dǎo)管,結(jié)扎動脈,縫合皮膚。24只兔隨機(jī)分為高脂飲食組(Ⅰ)、高脂飲食加氯沙坦(25mg·kg-1·d-1)組(Ⅱ)及正常對照組(Ⅲ)。高脂飲食為除基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)外,每天加膽固醇1g,豬油10g,高脂飼料喂養(yǎng)4個月。血管形態(tài)學(xué)檢查采用德國遠(yuǎn)東蔡司公司KS400圖像分析系統(tǒng)分別測定兔動脈內(nèi)膜、中膜的厚度與面積及各種比值。巨噬細(xì)胞免疫組化兔主動脈石蠟切片經(jīng)脫蠟和水化后,用1%的胰蛋白酶在37℃下消化20min,PBS洗3次,每次5min,然后用3%的過氧化物酶浸泡20min,PBS洗3次,加一抗,4℃過夜,PBS洗3次,加酶標(biāo)二抗,37℃作用30min,PBS洗3次,加DAB顯色3～5min,觀察結(jié)果。然后用蘇木素套染,常規(guī)脫水,甘油明膠封片。一抗為小鼠抗兔單核巨噬細(xì)胞抗體(RAM11),購自DAKO公司;二抗為酶聯(lián)羊抗小鼠抗體。DAB顯色試劑由博士德公司提供。每組選擇5例,采用德國遠(yuǎn)東蔡司公司KS400圖像分析系統(tǒng),對巨噬細(xì)胞陽性面積進(jìn)行半定量分析(巨噬細(xì)胞陽性面積表達(dá)率為巨噬細(xì)胞陽性面積/內(nèi)膜面積)。血脂測定采用酶學(xué)方法,單位以mmol/L表示。血管主動脈組織AII的測定采用放免法。將主動脈組織用冰冷浴的0.9%NS沖洗,稱重,剪碎,移入2ml0.1mol的醋酸中,95℃水浴10min,冷卻后制成勻漿,4℃離心12000轉(zhuǎn),20min,上清液冷凍干燥后待測。試劑盒購自北京北方生物技術(shù)研究所。AII的含量以pg/g組織表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方差分析,t檢驗(yàn)。對血管內(nèi)皮及中膜面積的影響各組血脂水平的變化血漿甘油三酯(trigly_cerides,TG)和膽固醇(cholesterol,Ch)喂養(yǎng)前三組之間兩兩比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);經(jīng)4個月喂養(yǎng),高脂組、氯沙坦組的TG及Ch均明顯高于開始時的水平(P<0.05,P<0.001),而對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(附表)。氯沙坦對血管病理形態(tài)學(xué)的影響對照組的血管內(nèi)膜光滑,光鏡下可見內(nèi)皮細(xì)胞呈條索狀分布,未見AS改變。而高脂組的動脈內(nèi)膜增厚、凸凹不平,光鏡下觀察可見到大量泡沫細(xì)胞,呈空泡狀,內(nèi)皮細(xì)胞大部分已脫落,少數(shù)殘存內(nèi)皮細(xì)胞分布不規(guī)則;中膜明顯增厚,內(nèi)彈力板斷裂。氯沙坦組動脈內(nèi)膜亦有不規(guī)則的增厚,并能看到分布不均勻的脂紋,但AS程度較高脂組減輕,光鏡下發(fā)現(xiàn)內(nèi)膜增厚,有泡沫細(xì)胞存在。氯沙坦對血管內(nèi)膜及中膜面積等參數(shù)的影響氯沙坦組的內(nèi)膜厚度(0.29±0.08mm)及內(nèi)膜面積(1.97±0.55mm2)明顯小于高脂組的內(nèi)膜厚度(0.54±0.11mm)及內(nèi)、膜面積(4.34±1.14mm2)(P<0.01);內(nèi)、中膜面積之比(51.99±18.41)及內(nèi)、中膜厚度之比(0.68±0.22)亦小于高脂組內(nèi)、中膜面積之比(107.32±26.52)及內(nèi)、中膜厚度之比(1.31±0.27)(P<0.01)。氯沙坦對巨噬細(xì)胞表達(dá)的影響對照組血管壁幾乎看不到巨噬細(xì)胞;而氯沙坦組的巨噬細(xì)胞陽性面積(16.54%±4.39%)低于高脂組(22.08%±1.83%)(P<0.05)。主動脈組織AII的含量高脂組動脈壁AII的含量(63.57±7.67pg/g)明顯高于氯沙坦組(42.82±10.44pg/g)及對照組的含量(34.10±2.59pg/g)(P<0.05)?？筧s的作用RAS、高脂血癥等許多因素均與AS的發(fā)病有關(guān),但AS發(fā)病的詳細(xì)機(jī)制仍不十分清楚。目前治療尚無十分有效的藥物。因AS的發(fā)病具有慢性、隱匿性及逐漸進(jìn)行性加重等特點(diǎn),而且在AS形成脂點(diǎn)脂紋的早期,臨床上一般無任何癥狀,往往易被忽略;待到纖維斑塊形成或復(fù)合病變形成后,病人因血管狹窄導(dǎo)致冠脈供血不足出現(xiàn)癥狀時,血管的硬化已十分明顯,病變已很難逆轉(zhuǎn)。故積極探索有效的藥物并早期治療,以逆轉(zhuǎn)或阻帶AS的病理過程有十分重要的意義。國外學(xué)者在高脂飼養(yǎng)的猴、倉鼠、兔、豬及高血壓易感鼠的AS模型中應(yīng)用ACEI,如開搏通等能明顯降低AS的程度。但對AT1R阻滯劑的研究較少,且有些學(xué)者的結(jié)果存在較大差異。本研究結(jié)果顯示,經(jīng)氯沙坦治療后TG及Ch并無明顯差異,而其內(nèi)膜直徑及內(nèi)膜面積明顯低于高脂組,內(nèi)膜與中膜面積之比亦低于高脂組,表明氯沙坦有明顯的抗AS作用。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)氯沙坦(25mg·kg-1·d-1)能減輕兔AS的程度;有學(xué)者用低劑量氯沙坦(10mg·kg-1·d-1)并未見效。我們認(rèn)為氯沙坦在AS的治療中起重要作用,氯沙坦的劑量不同可能是造成結(jié)果差異的主要原因之一,低劑量可能對AS的治療是無效的。AS的病因異常復(fù)雜,高脂血癥是一個重要因素,但不是唯一因素。近年RAS與AS發(fā)病關(guān)系的研究倍受國外關(guān)注。RAS不僅存在于循環(huán)系統(tǒng)中,組織中亦有AII的存在。目前認(rèn)為動脈組織中的AII對AS的形成更有意義。AS血管的內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及巨噬細(xì)胞均合成AII,AII可促進(jìn)單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附,抑制單核細(xì)胞的移動,還可促進(jìn)單核細(xì)胞產(chǎn)生MCP-1,進(jìn)而使單核細(xì)胞移行于內(nèi)膜下,吞噬脂質(zhì),形成泡沫細(xì)胞,促進(jìn)AS的發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn),高脂組的主動脈組織AII明顯高于氯沙坦組及對照組,而氯沙坦治療后AII明顯減少,與國外的報道基本一致。說明氯沙坦可減少組織AII的形成而起到抗AS的作用。氯沙坦減少AII的原因可能與泡沫細(xì)胞進(jìn)入