冠心病基因治療

冠心病基因治療主要內(nèi)容1目的基因的選取2導(dǎo)入載體的選擇3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題2導(dǎo)入載體的選擇3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題1目的基因的選取通過(guò)增加內(nèi)源的抗氧化儲(chǔ)備達(dá)到減少氧化應(yīng)激對(duì)缺血心肌損傷的目的抗氧化應(yīng)激抗炎癥反應(yīng)導(dǎo)入炎癥抑制基因可以在炎癥發(fā)生前對(duì)心肌梗死生抑制作用糾正脂代謝異常家族性高膽固醇血癥是一種由LDL受體功能或表達(dá)異常引起的常染色體性遺傳病,導(dǎo)入正?；蚩捎行б种浦x異?？箖?nèi)皮增殖血管的重塑、平滑肌細(xì)胞增殖遷移和細(xì)胞外基質(zhì)的積聚而導(dǎo)致內(nèi)膜的增生，是影響遠(yuǎn)期療效的重要原因植入抗內(nèi)皮增殖基因可有效防止在狹窄。1目的基因的選取2導(dǎo)入載體的選擇3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題研究發(fā)現(xiàn),外源性給予某些多膚類(lèi)生長(zhǎng)因子能促進(jìn)動(dòng)物缺血組織的新生血管形成和側(cè)支循環(huán)建立,改善組織缺血。其中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是目前公認(rèn)的最具特異性和強(qiáng)大的生長(zhǎng)因子。1目的基因的選取2導(dǎo)入載體的選擇3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題一類(lèi)特異作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的糖蛋白,具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增值,以及誘導(dǎo)血管生成的作用VEGF促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用具有相對(duì)特異性,對(duì)血管壁的平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞沒(méi)有影響,因此可以避免在發(fā)揮促血管生成作用時(shí)引起血管內(nèi)膜異常增生等副作用。VEGF為分泌性蛋白,有信號(hào)肽序列,合成后分泌到細(xì)胞外,以旁分泌或自分泌方式作用于靶細(xì)胞的VEGF受體血管生成素（Angiopoietin)

主要為Ang-1成纖維生長(zhǎng)因子（bFGF）基因另外兩種生長(zhǎng)因子VEGF

VS

Ang-1

雖然VEGF165和Ang1都是促血管生成因子，但兩者的功能并不相同。VEGF特異性促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)，是新生血管形成的始動(dòng)因素，但能促進(jìn)血管通透性而Ang-1有助于新生血管的成熟和穩(wěn)定，可防止由VEGF引起的血管滲漏和組織水腫

bFGF基因是非特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)因子，它主要在新生血管外膜延伸和生長(zhǎng)中發(fā)揮作用因此血管梗塞性病的基因治療，最好應(yīng)該聯(lián)合用藥！VEGF&

bFGF雖然可能更快地促進(jìn)新生血管的生成，但是由于bFGF促進(jìn)VSMC和成纖維細(xì)胞的增殖和遷移，促進(jìn)血管內(nèi)膜的增生，引起血管的重塑和再狹窄的發(fā)生。VEGF和Ang-1基因聯(lián)合可能效果更好！92導(dǎo)入載體的選擇1目的基因的選取3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題(l)能在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行獨(dú)立和穩(wěn)定的自我復(fù)制(2)易于從宿主細(xì)胞中分離并進(jìn)行純化(3)在其序列中具有適當(dāng)?shù)南拗菩詢(xún)?nèi)切酶位點(diǎn),在這些位點(diǎn)上插入外源基因不影響載體自身復(fù)制10

腺病毒載體逆轉(zhuǎn)錄病毒載體

裸質(zhì)粒載體2導(dǎo)入載體的選擇1目的基因的選取3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題腺病毒原理

主要優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)和改進(jìn)方向1目的基因的選取3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題腺病毒是一種無(wú)包膜的DNA雙鏈病毒，該載體多是在2型或5型腺病毒的基礎(chǔ)上構(gòu)建而來(lái)。

腺病毒載體腺病毒原理主要優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)和改進(jìn)方向1目的基因的選取3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題

腺病毒載體基因容量大,外源基因表達(dá)水平高病毒滴度高，轉(zhuǎn)移效率高可感染分裂和未分裂細(xì)胞不整合至細(xì)胞染色體,對(duì)人類(lèi)相對(duì)比較安全2課題總結(jié)3實(shí)驗(yàn)方案4實(shí)驗(yàn)進(jìn)度

缺點(diǎn)

改進(jìn)方向缺乏持久的表達(dá),易激活免疫系統(tǒng),重復(fù)使用轉(zhuǎn)導(dǎo)效率明顯降低

腺相關(guān)病毒載體(adenoviral一associatedvirus,AAV)AAV是一種單鏈DNA微小病毒，也是一種缺陷病毒。它也可以感染分裂期和非分裂期的細(xì)胞，無(wú)致病性，安全性高，基因表達(dá)穩(wěn)定。

腺病毒載體逆轉(zhuǎn)錄病毒載體原理

主要優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)和改進(jìn)方向1目的基因的選取3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題逆轉(zhuǎn)錄病毒是一種經(jīng)修飾的RNA缺陷病毒，其復(fù)制所需要的基因被除去而代之為治療性基因和選擇性標(biāo)記物逆轉(zhuǎn)錄病毒載體腺病毒原理主要優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)和改進(jìn)方向1目的基因的選取3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題載體構(gòu)建簡(jiǎn)單,宿主范圍廣病毒轉(zhuǎn)染效率高，表達(dá)持久逆轉(zhuǎn)錄病毒載體2課題總結(jié)3實(shí)驗(yàn)方案4實(shí)驗(yàn)進(jìn)度

改進(jìn)方向

缺點(diǎn)逆轉(zhuǎn)錄病毒難以純化和濃縮,病毒制備滴度低只能轉(zhuǎn)染增殖期的靶細(xì)胞易被血液中成分中和且不穩(wěn)定,有插人性基因突變的危險(xiǎn)中國(guó)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室夏家輝院士在細(xì)胞遺傳學(xué)研究的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)人的雙隨體小染色體具有遺傳穩(wěn)定、無(wú)免疫原性、攜帶外源基因容量足夠大等特點(diǎn),并利用該小染色體研制出人D、G組染色體短臂導(dǎo)向的基因治療新載體一人源基因載體裸質(zhì)粒載體

主要優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)和改進(jìn)方向1目的基因的選取3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題將含有外源基因的純化閉環(huán)質(zhì)粒DNA直接轉(zhuǎn)導(dǎo)心臟并在心肌中表達(dá)蛋白。

裸質(zhì)粒載體腺病毒原理主要優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)和改進(jìn)方向1目的基因的選取3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題簡(jiǎn)便、幾乎無(wú)抗原性，在心肌中能較好表達(dá)

裸質(zhì)粒載體

腺病毒原理

主要優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)和改進(jìn)方向1目的基因的選取3基因?qū)氲姆绞?其他問(wèn)題

裸質(zhì)粒載體表達(dá)時(shí)間短暫，持續(xù)3周左右，表達(dá)效率亦相對(duì)有限冠心病基因治療多采用可產(chǎn)生生物活性蛋白的基因，研究顯示，僅少量被轉(zhuǎn)染細(xì)胞分泌的蛋白就可以獲得理想的治療效應(yīng)，因此彌補(bǔ)了裸質(zhì)粒載體基因轉(zhuǎn)移效率低的不足20基因轉(zhuǎn)移途徑的選擇是心臟基因治療的研究重點(diǎn)之一,也是其不同于其它疾病基因治療的一個(gè)獨(dú)特方面。心臟基因轉(zhuǎn)移的主要途徑可以分為心肌內(nèi)途徑和血管內(nèi)途徑兩大類(lèi),心包內(nèi)基因轉(zhuǎn)移也有少數(shù)報(bào)道。心肌內(nèi)途徑在治療性血管生成的研究中應(yīng)用較多。1目的基因的選取2導(dǎo)入載體的選擇4其他問(wèn)題3基因?qū)氲姆绞?1

心肌內(nèi)注射法

血管途徑

心包轉(zhuǎn)移法3基因?qū)氲姆绞?目的基因的選取2導(dǎo)入載體的選擇4其他問(wèn)題1目的基因的選取2導(dǎo)入載體的選擇4其他問(wèn)題3基因?qū)氲姆绞叫募?nèi)注射法冠心病基因治療的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)多采用開(kāi)胸心肌內(nèi)注射的方式導(dǎo)入基因制劑,這種方法能夠?qū)崿F(xiàn)基因的定位轉(zhuǎn)移,且被證實(shí)能獲得理想的效果。但手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)、創(chuàng)傷性和高額費(fèi)用限制了臨床應(yīng)用開(kāi)胸？！1目的基因的選取2導(dǎo)入載體的選擇4其他問(wèn)題3基因?qū)氲姆绞浇陙?lái)研制出一種新的心電標(biāo)測(cè)定位注射系統(tǒng)(NOGA),能夠通過(guò)介入途徑從心室腔內(nèi)標(biāo)測(cè)缺血心肌并實(shí)現(xiàn)經(jīng)心內(nèi)膜的心肌內(nèi)注射。心肌內(nèi)注射法需要特殊的介入器械,外源基因與血管壁接觸的時(shí)間、面積都受到很大限制,而冠脈內(nèi)直接基因注射轉(zhuǎn)染率低,

基因轉(zhuǎn)染不局限,

易有系統(tǒng)轉(zhuǎn)染擴(kuò)散的危險(xiǎn)。1目的基因的選取2導(dǎo)入載體的選擇4其他問(wèn)題3基因?qū)氲姆绞窖芡緩桨ǎ?/p>

血管壁局部轉(zhuǎn)移

冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射

血管途徑1目的基因的選取2導(dǎo)入載體的選擇4其他問(wèn)題3基因?qū)氲姆绞叫陌皇怯杀趯雍团K層心包構(gòu)成的封閉腔隙，將攜基因載體導(dǎo)人這一腔隙可以提高特異性，能延長(zhǎng)外基因與心包及心包臟層下心肌的接觸時(shí)間，提高轉(zhuǎn)染心肌的效率。

心包轉(zhuǎn)移法4其他問(wèn)題3基因?qū)氲姆绞?導(dǎo)入載體的選擇1目的基因的選取

新的研究方向——基因、細(xì)胞聯(lián)合治療KenSuzuki等用HVJ-VEGF165轉(zhuǎn)染大鼠的骨骼肌成肌細(xì)胞,并將這些細(xì)胞移植至同種系大鼠心肌梗塞模型的壞死心肌組織中,在限制心肌梗塞面積、改善心功能的方