反液相色譜法測(cè)定有機(jī)化合物中甲苯的含量

40507035接慶男-4--反液相色譜法測(cè)定有機(jī)化合物中甲苯的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.了解高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)及基本操作

2.了解反相色譜法的基本規(guī)律

3.掌握利用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行色譜定量分析的實(shí)驗(yàn)方法二、實(shí)驗(yàn)原理：高效液相色譜儀的基本組成HPLC的基本組成示意圖六通閥示意圖在液相柱色譜中，采用顆粒十分細(xì)的高效固定相，并采用高壓泵輸送流動(dòng)相，全部工作通過(guò)儀器來(lái)完成。這種色譜法稱為高效液相色譜法。主要分為四類，即液固吸附色譜、液液分配色譜、離子交換色譜和分子排阻色譜。其中液液分配色譜是根據(jù)不同組分在兩種互不相溶的液相中的分配系數(shù)不同而實(shí)現(xiàn)分離的，流動(dòng)相的極性小于固定相的化學(xué)鍵合相色譜稱為正相色譜，流動(dòng)相的極性大于固定相的化學(xué)鍵合相色譜稱為反相色譜。反相色譜是目前最常用的液相色譜分離方法。如以C18烷基鍵合相柱，采用甲醇或乙氰的水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行色譜分析。高效液相色譜法的特點(diǎn)1.分析速度快

2.分離效率高

3.靈敏度高、易于實(shí)現(xiàn)操作自動(dòng)化本實(shí)驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)法，計(jì)算混合物中甲苯的含量：內(nèi)標(biāo)法是在試樣各含量不同的一系列標(biāo)準(zhǔn)試樣中，分別加入固定量的純物質(zhì)，即內(nèi)標(biāo)物。當(dāng)測(cè)得分析物和內(nèi)標(biāo)物對(duì)應(yīng)的響應(yīng)后，以分析物和內(nèi)標(biāo)物的響應(yīng)比對(duì)分析物濃度（或含量）作圖，即可得到相應(yīng)的校正曲線，最后用測(cè)得的試樣與內(nèi)標(biāo)物的響應(yīng)比（或其函數(shù)）在校正曲線上獲得對(duì)應(yīng)于試樣的濃度（或含量）。三、實(shí)驗(yàn)步驟：1.確定實(shí)驗(yàn)條件（流動(dòng)相：甲醇80%、水20%，流速0.8mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)254nm等）2.溶液的配制：（1）內(nèi)標(biāo)物溶液的配制：準(zhǔn)確稱取一定量的對(duì)氯硝基苯純品，加甲醇溶解后制成50μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；（2）甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：準(zhǔn)確量取一定量甲苯的標(biāo)準(zhǔn)品，加甲醇溶解后制成19.1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；（3）樣品溶液的制備：準(zhǔn)確移取適量樣品，加甲醇超聲溶解，定容于100mL容量瓶中，過(guò)濾備用。3.相對(duì)校正因子的測(cè)定：分別取5μL甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液和5μL對(duì)氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液，待儀器穩(wěn)定后，注入溶液，記錄色譜圖。

f’=AsWi/AiWs4.樣品分析：

按照內(nèi)標(biāo)物量/樣品量=1/2的量配制樣品溶液，待儀器穩(wěn)定后，注入5μL混合溶液，記錄色譜圖。

Wi=f’Ai’Ws’/As’四、注意事項(xiàng)：1.檢查流動(dòng)相是否充足，儲(chǔ)液罐要密閉；2.流動(dòng)相有氣泡要脫氣，否則影響靈敏度；3.待儀器穩(wěn)定后，再進(jìn)樣；4.進(jìn)樣器要充分洗滌；不可有氣泡；5.實(shí)驗(yàn)完成后用100%甲醇沖洗色譜柱。五、數(shù)據(jù)處理：利用公式f’=AsWi/AiWs，Wi=f’Ai’Ws’/As’?？捎?jì)算出相對(duì)校正因子和樣品中甲苯的量。f’=569.40497*20/(8504.81836*50*10-3)=26.78Wi=（26.78*7303.35205/216.38797