半夏瀉心湯的工藝改進(jìn)及藥效研究

西安交通大學(xué)網(wǎng)絡(luò)教育學(xué)院論文畢業(yè)論文任務(wù)書學(xué)生姓名學(xué)號學(xué)習(xí)中心入學(xué)時間專業(yè)藥學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文題目半夏瀉心湯的工藝改進(jìn)及藥效研究1.畢業(yè)論文任務(wù)要求：概述：半夏瀉心湯出自漢代著名醫(yī)家張仲景的《傷寒論》，由姜半夏、干姜、黃芩、黃連、黨參、灸甘草、大棗七味藥材組成，是和解劑的代表，可平調(diào)寒熱、和胃降逆、開解除痞，現(xiàn)代臨床仍然廣泛用于各種急慢性胃炎、胃潰瘍的治療。方中姜半夏、干姜、辛溫散結(jié)消痞，祛脾寒之氣以和陰，黃芩、黃連、苦寒降泄，清胃氣之熱以和陽，四藥互用，辛開苦降，陰陽得和，脾胃得調(diào)，為后世醫(yī)家辛開苦降法之始作。又佐以黨參、甘草、大棗甘平入脾胃，調(diào)和諸藥，補氣健脾，以固后天之本。即合《內(nèi)經(jīng)》“正氣存內(nèi)，邪不可干”之旨。全方配伍嚴(yán)謹(jǐn)，祛邪補虛，融為一爐，為治療脾胃病的經(jīng)典之作。大量臨床研究報道，此方具有和胃降逆，平調(diào)寒熱之功效，對治療脾虛胃熱證之胃脘痛，脘腹痞滿、呃逆噯氣、泛酸嘈雜、即見有上癥之慢性胃炎、消化性潰瘍有很好的療效，對人體內(nèi)的幽門螺桿菌也有很好地效果。因此將其開發(fā)成新的治療慢性胃炎、胃潰瘍的中成藥對滿足臨床用藥顯得尤為重要。本研究旨在采用現(xiàn)代工藝技術(shù)，對有效部分進(jìn)行藥效研究，為將古方制備成方便服用、質(zhì)量可控、易保存的現(xiàn)代制劑提供技術(shù)及理論依據(jù)。目的：將半夏瀉心湯制造傳統(tǒng)工藝進(jìn)行改造，并且對于改造以后的工藝的藥效進(jìn)行分析。為將古方制備成方便服用、質(zhì)量可控、易保存的現(xiàn)代制劑提供技術(shù)及理論基礎(chǔ)。方法：對處方用量進(jìn)行調(diào)整，并采用乙醇提取、大孔樹脂純化的方法進(jìn)行工藝改進(jìn)，通過對其進(jìn)行胃潰瘍的抑制作用、抗炎作用以及對幽門螺桿菌感染的治療作用等藥效研究，篩選出藥效最強的分離部位，結(jié)果：試驗結(jié)果顯示，采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%乙醇提取，并通過AB-8大孔樹脂富集，5倍量樹脂體積的40%乙醇洗脫得到的分離部位對抑制胃潰瘍、抗炎以及殺滅幽門螺桿菌的作用最強，故提取分離該有效部位，用于治療胃炎、胃潰瘍，可最大限度的減少患者服用量，保留有效成分。結(jié)論：本研究對半夏瀉心湯提取方法進(jìn)行工藝改進(jìn)，采用不同濃度的乙醇提取和純化，得到不同的提取組分，通過藥效試驗考察各提取組分抑制胃潰瘍、抗炎以及殺滅幽門螺桿菌(HP)的作用，并與古代水煎工藝進(jìn)行對比。結(jié)果表明，采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%乙醇提取，并通過AB-8樹脂富集，5倍量樹脂體積的40%乙醇洗脫得到的提取組分對胃炎、胃潰瘍有良好的治療作用，在不影響藥效的前提下，大大減少了患者的服用量，為將古方制備成方便服用、質(zhì)量可控、易保存現(xiàn)代制劑（顆粒、片劑、膠囊、口服液等）提供了技術(shù)和理論依據(jù)。2．主要參考資料：

[1]范方馨,謝鳴.半夏瀉心湯與黃連湯證治辨析[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2019(04):343-346.[2]孫雪青.半夏瀉心湯加減治療痞滿的療效探析[J].海峽藥學(xué),2019,31(06):159-160.[3]朱春亮.半夏瀉心湯加黃芪治療寒熱錯雜型腹瀉型腸易激綜合征的臨床研究[D].福建中醫(yī)藥大學(xué),2019.[4]高來順.半夏瀉心湯治療慢性萎縮性胃炎的臨床效果[J].深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志,2019,29(10):53-54.[5]楊貴珍,孫錦霞,王莉新,姜昕,鄭月娟.半夏瀉心湯通過介導(dǎo)MAPK信號通路抑制巨噬細(xì)胞炎癥因子的分泌[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2018,32(05):67-72.[6]殷貝,李佑生,陳玲玲,陳伊莉.半夏瀉心湯治療糖尿病胃輕癱隨機對照試驗的Meta分析[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2018,26(09):766-774.[7]李杰,賈壯壯.半夏瀉心湯臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].湖南中醫(yī)雜志,2018,34(02):185-188.[8]史麗偉,杜立娟,倪青.半夏瀉心湯治療糖尿病的理論探討與臨床應(yīng)用[J].中醫(yī)雜志,2018,59(03):246-250.3．畢業(yè)論文進(jìn)度安排：起止時間階段內(nèi)容收集有關(guān)論文（設(shè)計）資料，指導(dǎo)老師組織學(xué)生進(jìn)行論文選題、指導(dǎo)學(xué)生選定任務(wù)書或?qū)徍藢W(xué)生自擬任務(wù)書并下達(dá)畢業(yè)論文（設(shè)計）任務(wù)書。撰寫論文、提交初稿，指導(dǎo)老師進(jìn)行論文指導(dǎo)和評閱。上傳畢業(yè)論文（設(shè)計）終稿，指導(dǎo)老師進(jìn)行指導(dǎo)和評閱。畢業(yè)論文（設(shè)計）答辯。目錄10354摘要 110318第一章引言 211986第二章實驗部分 2155312.1儀器及材料 2214742.2試驗方法 374632.2.1樣品1 3248472.2.2樣品2 343212.2.3樣品3 3160582.2.4樣品4 3116342.2.5樣品5 4102192.3提取組分藥效試驗 457112.3.1對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的抑制作用研究 4237222.3.2抗炎作用研究 451752.3.3抗幽門螺桿菌（HP）作用研究 4205183結(jié)果與討論 5115893.1提取組分對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的抑制作用藥效結(jié)果 5309963.2取組分抗炎作用藥效結(jié)果 5272253.3提取組分對幽門螺桿菌殺滅作用 524032第四章結(jié)論 67411參考文獻(xiàn) 6948致謝 7摘要目的：分析半夏瀉心湯的改造工藝以后的藥效，為將古方制備成方便服用、質(zhì)量可控、易保存的現(xiàn)代制劑提供技術(shù)及理論基礎(chǔ)。方法：對處方用量進(jìn)行調(diào)整，并采用乙醇提取、大孔樹脂純化的方法進(jìn)行工藝改進(jìn)，獲得4種提取組分，通過對其進(jìn)行胃潰瘍的抑制作用、抗炎作用、以及對幽門螺桿菌感染的治療作用等藥效研究，篩選出藥效最強的分離部位，結(jié)果：試驗結(jié)果顯示，采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%乙醇提取，并通過AB-8大孔樹脂富集，5倍量樹脂體積的40%乙醇洗脫得到的分離部位對抑制胃潰瘍、抗炎以及殺滅幽門螺桿菌的作用最強，故提取分離該有效部位，用于治療胃炎、胃潰瘍，可最大限度的減少患者服用量，保留有效成分。結(jié)論：本研究對半夏瀉心湯提取方法進(jìn)行工藝改進(jìn)，采用不同濃度的乙醇提取和純化，得到不同的提取組分，通過藥效試驗考察各提取組分抑制胃潰瘍、抗炎以及殺滅HP的作用，并與古代水煎工藝進(jìn)行對比。結(jié)果表明，采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%乙醇提取，并通過AB-8樹脂富集，5倍量樹脂體積的40%乙醇洗脫得到的提取組分對胃炎、胃潰瘍有良好的治療作用，在不影響藥效的前提下，大大減少了患者的服用量，為將古方制備成方便服用、質(zhì)量可控、易保存現(xiàn)代制劑（顆粒、片劑、膠囊、口服液等）提供了技術(shù)和理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：半夏瀉心湯；工藝改進(jìn)；藥效第一章引言我國慢性胃炎、胃潰瘍發(fā)病率較高，統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，發(fā)病率可達(dá)60%以上，為臨床上常見多發(fā)病?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療胃炎、胃潰瘍多對癥處理，藥物多為嗎丁啉和維酶素等，或針對主要致病因素——幽門螺桿菌（helicobacterpylori，HP）多種抗生素聯(lián)合治療，如采用質(zhì)子泵抑制劑加克拉霉素加阿莫西林或甲硝唑三聯(lián)療法。雖然取得一定療效，但愈后復(fù)發(fā)率高，且病程又長，服藥時間長，還帶來胃腸道不適、失眠、頭昏、頭痛等副作用，尤其是隨著抗生素的廣泛使用，HP對常用抗生素的耐藥情況日益嚴(yán)重[1]。中醫(yī)認(rèn)為，胃居心下與脾互為表里，同居中洲，胃氣以下降為順，脾氣以上升為暢，脾升胃降，中焦氣機順暢，腐熟運化有常，故能行使機體后天之本[2]。若因傷寒誤治，損傷脾胃、邪熱內(nèi)陷，脾胃升降失職，病邪結(jié)于中焦，而成寒熱互結(jié)?；蛞蛩伢w中陽虧，脾胃虛弱，中陽不振，升降失職，加之飲食不節(jié)，情志不舒，勞逸失度，痰濕積滯，濕熱之邪乘虛而入，導(dǎo)致脾胃功能紊亂，陰陽失調(diào)，上下不通，氣機阻滯，寒熱互結(jié)，氣血運行不暢，胃之脈絡(luò)不通，而發(fā)生胃脘疼痛之癥[3]。半夏瀉心湯出自漢代著名醫(yī)家張仲景的《傷寒論》，由姜半夏、干姜、黃芩、黃連、黨參、灸甘草、大棗七味藥材組成，是和解劑的代表，可平調(diào)寒熱、和胃降逆、開解除痞，現(xiàn)代臨床仍然廣泛用于各種急慢性胃炎、胃潰瘍的治療。方中姜半夏、干姜、辛溫散結(jié)消痞，祛脾寒之氣以和陰，黃芩、黃連、苦寒降泄，清胃氣之熱以和陽，四藥互用，辛開苦降，陰陽得和，脾胃得調(diào)，為后世醫(yī)家辛開苦降法之始作[4]。又佐以黨參、甘草、大棗甘平入脾胃，調(diào)和諸藥，補氣健脾，以固后天之本。即合《內(nèi)經(jīng)》“正氣存內(nèi)，邪不可干”之旨。全方配伍嚴(yán)謹(jǐn)，祛邪補虛，融為一爐，為治療脾胃病的經(jīng)典之作。大量臨床研究報道，此方具有和胃降逆，平調(diào)寒熱之功效，對治療脾虛胃熱證之胃脘痛，脘腹痞滿、呃逆噯氣、泛酸嘈雜、即見有上癥之慢性胃炎、消化性潰瘍有很好的療效，對人體內(nèi)的幽門螺桿菌也有很好地抑滅效果[5]。因此將其開發(fā)成新的治療慢性胃炎、胃潰瘍的中成藥對滿足臨床用藥顯得尤為重要。本研究旨在采用現(xiàn)代工藝技術(shù)，對有效部分進(jìn)行藥效研究，為將古方制備成方便服用、質(zhì)量可控、易保存的現(xiàn)代制劑提供技術(shù)及理論依據(jù)。第二章實驗部分2.1儀器及材料T2K202中試提取機組、2K00401濃縮機組（江漢醫(yī)療制藥設(shè)備有限公司），2002型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申勝生物技術(shù)有限公司），DZF6050型真空干燥箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司），CCPP-176聚丙烯層析柱（天津市德固特科技發(fā)展有限公司），Wistar大鼠［（200±10）g，湖北中醫(yī)藥大學(xué)］，姜半夏、干姜、黃芩、黃連、黨參、灸甘草、大棗（湖北強康中藥飲片有限公司），AB-8樹脂（安徽三星樹脂有限公司），質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%乙醇（藥用級，湖南爾康制藥股份有限公司），水為注射用水（湖北科益藥業(yè)股份有限公司）。2.2試驗方法2.2.1樣品1水提對照樣品制備：稱取姜半夏4kg、黃芩3kg、干姜3kg、黨參3kg、炙甘草3kg、黃連2kg、大棗2kg，煎煮2次，每次2h，第一次加水200L，第二次加水160L，合并提取液，孔徑為150μm篩過濾，減壓濃縮，60℃真空干燥，粉碎至細(xì)粉備用。2.2.2樣品220%乙醇提取組分制備：稱取姜半夏4kg、黃芩3kg、干姜3kg、黨參3kg、炙甘草3kg、黃連2kg、大棗2kg，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%乙醇（以下簡稱20%乙醇）加熱回流2次，每次2h，第1次加20%乙醇200L，第2次加20%乙醇160L，合并提取液，孔徑為150μm篩過濾，將濾液減壓濃縮至相對密度為1.10的濃縮液，濃縮液上AB-8型大孔吸附樹脂柱（20kgAB-8樹脂裝柱，樹脂重量為藥材重量的1倍），用20%乙醇85L（為大孔吸附樹脂柱體積的5倍）洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮，60℃真空干燥，粉碎至細(xì)粉備用。2.2.3樣品340%乙醇提取組分制備：稱取姜半夏4kg、黃芩3kg、干姜3kg、黨參3kg、炙甘草3kg、黃連2kg、大棗2kg，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%乙醇（以下簡稱40%乙醇）加熱回流2次，每次2h，第1次加40%乙醇200L，第2次加40%乙醇160L，合并提取液，孔徑為150μm篩過濾，將濾液減壓濃縮至相對密度為1.10的濃縮液，濃縮液上AB-8型大孔吸附樹脂柱（20kgAB-8樹脂裝柱，樹脂重量為藥材重量的1倍），用40%乙醇85L（為大孔吸附樹脂柱體積的5倍）洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮，60℃真空干燥，粉碎至細(xì)粉備用。2.2.4樣品460%乙醇提取組分制備：稱取姜半夏4kg、黃芩3kg、干姜3kg、黨參3kg、炙甘草3kg、黃連2kg、大棗2kg，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%乙醇（以下簡稱60%乙醇）加熱回流2次，每次2h，第1次加60%乙醇200L，第2次加60%乙醇160L，合并提取液，孔徑為150μm篩過濾，將濾液減壓濃縮至相對密度為1.10的濃縮液，濃縮液上AB-8型大孔吸附樹脂柱（20kgAB-8樹脂裝柱，樹脂重量為藥材重量的1倍），用60%乙醇85L（為大孔吸附樹脂柱體積的5倍）洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮，60℃真空干燥，粉碎至細(xì)粉備用。2.2.5樣品580%乙醇提取組分的制備：稱取姜半夏4kg、黃芩3kg、干姜3kg、黨參3kg、炙甘草kg、黃連2kg、大棗2kg，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%乙醇（以下簡稱80%乙醇）加熱回流2次，每次2h，第1次加80%乙醇200L，第2次加80%乙醇160L，合并提取液，孔徑為150μm篩過濾，將濾液減壓濃縮至相對密度為1.10的濃縮液，濃縮液上AB-8型大孔吸附樹脂柱（20kgAB-8樹脂裝柱，樹脂重量為藥材重量的1倍），用80%乙醇85L（為大孔吸附樹脂柱體積的5倍）洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮，60℃真空干燥，粉碎至細(xì)粉備用。2.3提取組分藥效試驗2.3.1對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的抑制作用研究健康Wistar大鼠，隨機分為正常對照組、樣品1～5組，每組均10只，雌雄各半。1～5組的給藥劑量相同，即將干膏折算成生藥材的重量，按10g生藥材每1kg體重進(jìn)行灌胃給藥，正常對照組給予等容量蒸餾水。試驗第一天上午各組分別灌胃1次，下午開始禁食不禁水，第二、三天上午再分別灌胃1次，第三天下午（即禁食48h后）開始手術(shù)。手術(shù)時，將大鼠用乙醚麻醉、沿腹中線切開腹壁，找出胃與十二指腸，用縫合線避開血管結(jié)扎胃幽門與十二指腸結(jié)合部，并由十二指腸再給藥一次，隨后縫合腹壁、碘酊消毒后放回籠中，同時禁食禁水。18h后，拉頸椎處死大鼠，剖腹取出胃并收集胃液，隨即向胃內(nèi)注入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%福爾馬林溶液10mL，再將胃放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%福爾馬林溶液中固定10min以上。然后沿胃大彎剪開胃，將其平展于玻璃板上，仔細(xì)觀察前胃部粘膜潰瘍的發(fā)生情況，并按下述標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潰瘍分級。0：無潰瘍；1：潰瘍點、出血點（＜1mm）；2：1~5個小潰瘍（＞1mm，＜3mm）；3：6個以上小潰瘍或1個大潰瘍（＞3mm）；4：2個以上大潰瘍；5：穿孔性潰瘍。2.3.2抗炎作用研究取健康Wistar大鼠，隨機分為正常對照組、樣品1~5組，每組均10只，雌雄各半。進(jìn)行灌胃給藥，正常對照組給予等容量蒸餾水。連續(xù)3d，每天灌胃一次，最后一次灌胃后0.5h，從大鼠左后肢足趾皮下注射新鮮蛋清0.1毫升/只致炎。致炎前測量一次踝關(guān)節(jié)周長，并于致炎后2h分別測量一次踝關(guān)節(jié)周長，計算關(guān)節(jié)腫脹率。2.3.3抗幽門螺桿菌（HP）作用研究幽門螺桿菌（HP）是一種革蘭陰性需氧螺桿菌，目前全世界超過50%的人受其感染，是導(dǎo)致胃炎、胃潰瘍的一種最常見致病因素，WHO將其定為胃的Ⅰ類致病因子。本試驗將考察不同分離部位對HP的殺滅效果。取健康Wistar大鼠，隨機分為正常對照組、無治療藥物組、樣品1～5組、每組均10只，雌雄各半。除正常對照組外其余各組連續(xù)10天空腹灌胃食醋2.5mL/只；第11天，采用空腹束縛水浴6h；從第12天起，上述隔天空腹灌胃HP混懸液（1×109CFU/mL）1.5mL/只，共3次；第16天除正常對照組和無治療藥物模型對照組外其余各組灌胃給藥，連續(xù)給藥10天。第25天下午所有組動物禁食過夜，次日將各組動物脫頸椎處死，在無菌的條件下，取胃粘膜快速進(jìn)行尿素酶試驗和HP接種培養(yǎng)，同時直接涂片觀察HP陽性率。第三章結(jié)果與討論3.1提取組分對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的抑制作用藥效結(jié)果各提取組分對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的抑制作用藥效試驗結(jié)果用t值法進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果見表1。表1各提取組分大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的抑制作用組別劑量/（g/kg）潰瘍潰瘍分級抑制率/%對照-3.4±1.2-樣品110.01.7±1.1*50.0樣品210.02.1±1.1*38.2樣品310.01.6±1.2**52.9樣品410.02.2±1.2*35.3樣品510.02.4±1.1*29.4藥效結(jié)果顯示，采用40%乙醇提取和洗脫得到的提取組分（樣品3）對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍具有顯著的抑制作用，效果略優(yōu)于傳統(tǒng)水煎，表明該分離部位對胃潰瘍有較好的治療作用[6]。3.2取組分抗炎作用藥效結(jié)果各提取組分抗炎作用藥效試驗結(jié)果見表2。試驗結(jié)果表明，采用40%乙醇提取和洗脫得到的提取組分（樣品3）具有較