羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座培訓課件

羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座羊水檢驗概念羊水（amnioticfluid）妊娠時羊膜腔中液體來源妊娠早期：母體血漿經(jīng)胎膜透析胎兒臍帶、胎盤表面羊膜及未角化胎兒皮膚產(chǎn)生透析液妊娠中晚期：胎尿（主要來源）動態(tài)平衡胎兒與母體之間

2羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座功能：保護母體和胎兒。

水----組成：

溶質(zhì)--

有機物----無機鹽----細胞---98%～99%1%～2%50%50%極少量3羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座l

適應證

高危妊娠

有流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎史者

疑胎兒遺傳性疾病者

親代有代謝性缺陷病者

曾分娩過染色體異常嬰兒者

高齡孕婦

確定性連鎖遺傳病攜帶者胎兒性別者

疑母兒血型不合者

妊娠早期受大劑量電離輻射者

曾患嚴重病毒感染性疾病者

檢查宮內(nèi)胎兒有無感染者

4羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座一、標本采集羊膜穿刺多由婦產(chǎn)科醫(yī)師進行。第一節(jié)標本采集與處理

5羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座標本項目標本要求妊娠16～20周診斷胎兒遺傳性疾病或性基因羊水20～30ml妊娠晚期判斷胎兒成熟度及疑有母嬰血型不合羊水10～20ml標本送檢立即，或4℃冰箱保存，小于24h標本處理1000～2000r/min，離心10min后，上清液作生化檢查中期妊娠羊水細胞作染色體核型分析或先天性代謝缺陷病檢查晚期妊娠羊水沉淀物作脂肪細胞及其他有形成份檢查穿刺時間取決于羊水檢查的目的(表)：6羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座項目病理顏色透明度正常：妊娠早期：無色透明或淡黃色妊娠晚期：略混濁黃綠色或深綠色：胎兒窘迫，羊水含胎糞金黃色：母兒血型不合，羊水中大量膽紅素膿性混濁臭味：羊膜腔感染黃色粘稠：胎盤功能減退、過期妊娠比密：足月妊娠1.007～1.025酸堿度：7.20～7.60妊娠后期滲透壓：230～270mmol/kg粘度：1.75～1.85表羊水理學檢查7羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座16周：約250ml足月：800ml～1200ml羊水過多（polyhydramnios）＞2000ml：①胎兒畸形：胎兒神經(jīng)管缺陷：無腦兒、腦膨出、脊柱裂。消化道畸形：食管或小腸閉鎖②胎盤臍帶病變：胎盤絨毛血管瘤、臍帶帆狀附著③孕婦及胎兒其他疾?。禾悄虿　BO或Rh血型不合④多胎妊娠⑤特發(fā)性羊水過多：原因不明，孕婦、胎兒及胎盤均無異常2．羊水過少（oligohydramnios）妊娠晚期羊水量＜300ml①胎兒畸型：胎兒先天腎缺如、雙腎發(fā)育不全、尿道閉鎖②過期妊娠：胎盤功能減退③胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩8羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座羊水化學檢查

水分98%～99%

有機物和無機鹽：1%～2%

有形成分：少量白細胞、胎兒上皮細胞9羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座表化學檢查項目檢查項目妊娠期臨床意義電解質(zhì)（mmol/L）足月妊娠鈉34～41鉀6.5～6.7氯108～110鈣2.25～2.5鎂0.41～8.82氣體PO2（mmHg）早期PCO233～55（4.4～7.3kPa）后期PCO242～55（5.6～7.3kPa）蛋白質(zhì)36～40周：達最高超過預產(chǎn)期：下降，故可用作診斷過期妊娠的指標。為母體血清蛋白的1/20。60%～70%為清蛋白。增高：前清蛋白來自胎兒并隨胎齡的增長而增高。重癥母嬰Rh血型不合、死胎及無腦兒時10羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座檢查項目妊娠期臨床意義脂肪脂肪：500mg/L，50%脂肪酸，磷脂30～45mg/L妊娠后半期：膽固醇0.52～2.48mg/L甘油三脂68μmol/L膽紅素28周前：多為未結合膽紅素隨著胎兒肝臟發(fā)育成熟未結合膽紅素減少而結合膽紅素增加葡萄糖2.02～2.76mmol/L37周后：輕度降低來自母體，可以反映胎兒腎成熟程度代謝產(chǎn)物肌酐、尿酸、尿素評價胎兒腎成熟度的指標。11羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座檢查項目妊娠期臨床意義甲胎蛋白16～20周：40mg/L32周：為25mg/L增高：主要見于開放型神經(jīng)管畸形酶：γ-谷胺酰轉移酶、肌酸激酶、膽堿脂酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶等。酶主要來自破壞的羊水細胞和少量來自胎兒，常用于胎兒遺傳性代謝缺陷病產(chǎn)前診斷激素：蛋白激素、前列腺素、甲狀腺激素、甾體激素，等來自胎盤及胎兒12羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座胎兒成熟度檢驗

目的：決定選擇高危妊娠有利分娩時機；降低新生兒死亡率

方法：監(jiān)測羊水成份變化，評價相關器官功能狀況13羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座胎兒肺成熟度檢查

羊水泡沫試驗

（foamstabilitytest或shaketest）檢測原理羊水中肺泡：表面活性物質(zhì)和磷脂經(jīng)振蕩后所形成的泡沫，在室溫下可保持數(shù)小時。檢測特點最常用床邊試驗，是間接估量羊水磷脂的方法。操作簡單、報告迅速臨床應用陽性：兩試管液面均有完整泡沫環(huán)，表示L/S≥2、胎兒肺已成熟。兩管均無泡沫環(huán)，示胎兒肺未成熟第1管液面有完整泡沫環(huán)，表示L/S＜214羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座薄層色譜法

卵磷脂（lecithin，L）與鞘磷脂（sphingomyelin，S）比值測定（L/S）檢測原理肺泡表面活性物質(zhì)能維持肺泡的穩(wěn)定性。34周前：卵磷脂與鞘磷脂含量接近。35周后：卵磷脂合成明顯加快，37周時，達高峰。求出L/S的比值。檢測特點臨床最早評估胎兒肺成熟度狀態(tài)的實用化學分析方法，準確性較高，至今仍為參考方法；但費力、耗時臨床應用L/S≥2，提示胎兒肺已成熟。L/S1.5～1.9，為臨界值，IRDS發(fā)生率為50%。注意：①當母體無糖尿?。?/p>

L/S＞2時，對預測無IRDS的可能性為95%，表明L/S診斷特異性高；L/S＜2時，對預測發(fā)生IRDS的可能性為25%，表明L/S診斷靈敏度很低②當母體有糖尿病：即使L/S＞2時，仍可發(fā)生IRDS。15羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座磷脂酰甘油測定

（phosphatidylglycerol，PG）檢測原理磷脂酰甘油是肺泡表面活性物質(zhì)磷脂成份之一，約占羊水中總磷脂的10%。妊娠35周后羊水中出現(xiàn)磷脂酰甘油，含量隨妊娠時間而增加。檢測方法：酶法、快速膠乳凝集試驗測定檢測特點直接檢測羊水中卵磷脂和磷脂酰甘油；靈敏度和特異性高。臨床應用PG陽性，提示胎兒肺已成熟，新生兒一般不會發(fā)生IRDSPG陰性，即使L/S比值≥2，仍可能發(fā)生IRDS。16羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座羊水吸光度測定檢測原理檢測特點羊水磷脂類物質(zhì)含量與其濁度之間呈正比，磷脂類物質(zhì)越多，則吸光度越大。間接估量羊水磷脂，其他羊水成分濁度的影響。17羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座熒光偏振微粘度測量法

（microviscositytestbyfluorescencedepolarizationmethod）

檢測原理檢測特點根據(jù)較高的表面活性物質(zhì)可產(chǎn)生較低的偏振值的原理，測定羊水肺泡表面活性物質(zhì)。價廉、準確。靈敏度87%，特異性92%。18羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座新生兒特發(fā)性呼吸窘迫綜合征（idiopathicrespiratorydistresssyndrome，IRDS）

肺泡表面活性物質(zhì)卵磷脂缺乏，是新生兒嚴重疾病之一。主要見于37周前早產(chǎn)兒、剖宮產(chǎn)兒、糖尿病產(chǎn)婦或妊娠高血壓綜合征的初生兒19羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座胎兒腎發(fā)育成熟檢測項目檢驗項目臨床意義羊水葡萄糖測定（amnioticfluidglucose，AFG）羊水葡萄糖主要來源母體血漿、部分來自胎尿。＜0.56mmol/L，提示胎兒腎發(fā)育成熟＞0.80mmol/L，提示胎兒腎不成熟妊娠24周，AFG達峰值約2.29mmol/L。當胎兒腎逐漸發(fā)育成熟，腎小管重吸收葡萄糖作用增強，胎兒尿排入羊水的葡萄糖減少。隨胎齡增加，胎盤通透性降低，母體血漿進入羊水的葡萄糖減少，AFG逐步降低。20羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座胎兒肝成熟度檢測項目檢測原理臨床意義用分光光度計測定羊水中膽紅素吸光度：羊水膽紅素濃度與胎兒肝臟酶系統(tǒng)發(fā)育成熟程度有關。A450：＜0.02：胎肝成熟0.02～0.04：肝成熟可疑＞0.04：胎肝未成熟。隨胎兒肝臟酶系統(tǒng)發(fā)育成熟，羊水未結合膽紅素逐漸減少，結合膽紅素逐漸增多。21羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座胎兒皮膚成熟度檢查檢測原理臨床應用羊水脂肪細胞百分率隨胎齡增加而增高。羊水沉淀物用硫酸尼羅藍水溶液染色，鏡檢脂肪細胞的百分率（脂肪細胞染成桔黃色、無核，其他細胞呈藍色）脂肪細胞百分率：＞20%，胎兒皮膚成熟10%～20%，胎兒皮膚成熟可疑＜10%，胎兒皮膚未成熟脂肪細胞來自胎兒皮脂腺及汗腺脫落細胞。隨胎齡增加，胎兒皮脂腺逐漸發(fā)育成熟，脂肪細胞出現(xiàn)率增高。1.36mmol/L硫酸尼羅藍，22羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座胎兒唾液腺成熟度檢查檢驗原理臨床應用羊水唾液腺型淀粉酶活性在妊娠36周后顯著增高。用Somogyi法檢測羊水淀粉酶＞120U/L為成熟。羊水胰腺型同功酶活性在妊娠過程中無明顯變化。妊娠28周左右，羊水唾液腺型淀粉酶活性快速增高。妊娠36周后，其活性顯著上升。23羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座羊水顯微鏡檢驗

一、羊水脂肪細胞計數(shù)【檢測原理】

脂肪細胞計數(shù)是反映胎兒皮膚成熟程度的指標。將羊水涂片用尼羅藍水溶液染色后，顯微鏡下觀察，計數(shù)200～500個細胞，計算脂肪細胞陽性率。24羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座【參考范圍】妊娠34周前羊水脂肪細胞≤1%；34～38周為1%～10%；38～40周為10%～15%；40周以后大于50%?！九R床意義】大于20%為胎兒皮膚成熟的指標。10%～20%為臨界值。小于10%為皮膚不成熟。大于50%為皮膚過熟。

25羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座二、羊水快速貼壁細胞計數(shù)

【檢測原理】1.正常羊水細胞需要4～5d才能貼壁生長。2.胎兒畸形，如神經(jīng)管缺陷及臍疝畸形時，羊水細胞僅需20h即可貼壁生長，此種細胞稱為快速貼壁細胞(RAC)，具有貼壁生長快、活細胞貼壁率高的特點。通過計算活細胞貼壁率，來判斷有無畸形。

26羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座【參考范圍】

＜4%。【臨床意義】

RAC主要用于胎兒畸形的診斷。臍疝畸形的RAC為9%～12%，無腦兒的RAC為100%。27羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座羊水病原生物學檢驗

一、病毒

1.風疹病毒檢查【檢測原理】①病毒分離培養(yǎng)法。②血凝抑制試驗。③風疹病毒特異性IgM測定。④PCR：靈敏度高，特異性強，具有早期快速診斷的價值。28羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座【臨床意義】風疹病毒是引起胎兒畸形的病毒之一①妊娠1～2周感染風疹病毒者，胎兒嚴重畸形發(fā)生率為30%～80%；②妊娠12～18周感染風疹病毒者，10%～20%胎兒可有智力障礙和聽力缺陷；③妊娠18周以后感染風疹病毒的危害性很低。29羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座2．巨細胞病毒檢查

巨細胞病毒是皰疹病毒的一種。

WHO已將其列為引起新生兒出生缺陷的主要病原體。3.單純皰疹病毒檢查

單純皰疹病毒是皰疹病毒的一種。與胎兒和新生兒有關的主要是Ⅱ型。30羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座二、弓形蟲

【檢測原理】①組織學：可直接尋找弓形蟲的滋養(yǎng)體、包囊或卵囊等。②血清學：有Sabin-Feldman染色試驗、補體結合試驗、間接熒光抗體試驗或間接血凝試驗等。③

PCR：以B1基因、200-300重復序列（AF146527）或16SrDNA為目的基因。31羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座【臨床意義】可引起弓形蟲病，為人畜共患疾病。孕婦感染弓形蟲后，除了通過胎盤感染胎兒外，還可經(jīng)過羊水進入消化道而使胎兒感染。孕婦感染弓形蟲后，可造成流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎兒小頭畸形、腦積水、視力障礙、智力發(fā)育缺陷等畸形。32羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座羊水檢驗的質(zhì)量控制與臨床應用一、質(zhì)量控制①AFP：母體AFP檢測連續(xù)2次陽性時，再考慮是否行羊水AFP檢查。②羊水膽紅素檢測：要求避光。③羊水泡沫試驗：新鮮標本或4℃冷藏。操作時需用力振蕩。33羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座二、臨床應用產(chǎn)前診斷34羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座先天性遺傳性疾病產(chǎn)前診斷

產(chǎn)前診斷（prenataldiagnosis）

＝出生前診斷（antenataldiagnosis）＝宮內(nèi)診斷(intrauterinediagnosis)

檢查目的

判斷胎兒有無先天性遺傳性疾病，以確定是否進行選擇性流產(chǎn)

檢查方法

影像學、生物化學、細胞遺傳學、分子生物學等技術35羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座產(chǎn)前診斷疾病種類：

染色體病染色體異常染色體疾病常染色體數(shù)目異常常染色體多1條染色體稱為三體先天愚型（21－三體綜合征）常染色體結構異常染色體缺失、重復、倒位及易位性染色體數(shù)目異常性染色體數(shù)異常先天性卵巢發(fā)育不全癥（45，XO）36羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座產(chǎn)前診斷疾病種類：

染色體病染色體異常染色體疾病單基因遺傳病僅有1對基因發(fā)生突變或異常，多為酶缺陷引起代謝紊亂、代謝中間產(chǎn)物累積用生化方法可診斷300多種先天性代謝缺陷病。用羊水細胞診斷80多種先天性代謝缺陷病。多基因遺傳病2對以上基因發(fā)生突變。占產(chǎn)前診斷的40%～50%先天畸形如唇腭裂和畸形足、脊柱裂、無腦兒、神經(jīng)管畸形、幽門狹窄；先天性心臟病先天性髖關節(jié)脫位，等37羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座染色體核型分析

是產(chǎn)前診斷染色體病主要方法

染色體細胞制備培養(yǎng)時間：

胎兒羊水細胞9～12d

絨毛細胞7～14d

胎兒血細胞24～48

原位雜交技術或引物原位DNA合成技術，1h可獲染色體核型分析準確結果38羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座先天性遺傳性疾病產(chǎn)前診斷

性連鎖遺傳病(sex-linkedinheritancedisease)：

多為X連鎖隱性遺傳病，臨床常見有血友病甲、血友病乙、G-6-PD缺乏癥等。

如：父親為X連鎖隱性基因攜帶者，母親為正常，則男性胎兒正常，女性胎兒全為X連鎖隱性基因攜帶者

如：母親為X連鎖隱性基因攜帶者，父親為正常，則男性正常胎兒和患兒各占50%，女性正常胎兒和基因攜帶者各50%39羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座X染色質(zhì)檢查

（examinationofXchromatin，Barrtest）羊水細胞染色硫瑾或甲苯胺藍可數(shù)細胞胞核大、核膜完整，染色質(zhì)均勻，結構清晰X染色質(zhì)（Barr小體）呈深藍色染色質(zhì)塊，位于可數(shù)細胞核膜內(nèi)緣處。計數(shù)100個可數(shù)細胞核中與核膜相貼的X染色質(zhì)，計算百分率。女胎≥6%，男胎≤5%非可數(shù)細胞細胞核固縮，染色較深，結構不清40羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座性別基因診斷

目的：羊水細胞性別檢查復雜，干擾因素多?；蛟\斷可提高正確性、可靠性。

性別基因診斷最常用方法Y特異DNA探針Y染色體特異的SRY基因區(qū)域（sexdeterminatingregionofYchromosome）聚合酶鏈反應(PCR)目前認為，SRY是睪丸決定因子的最佳候選基因42羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座神經(jīng)管缺陷產(chǎn)前診斷

1．甲胎蛋白(AFP)測定：神經(jīng)管缺陷產(chǎn)前診斷最常用方法來源AFP主要在胎兒肝臟和卵黃囊合成，部份來自胎兒胃腸道、羊膜及絨毛膜細胞，隨胎兒尿液排入羊水正常妊娠16～20周羊水中達40mg/L20～22周逐步下降32周后降至25mg/L至妊娠足月無腦兒、脊柱裂等開放性神經(jīng)管缺陷胎兒胎兒血AFP是羊水AFP的150～200倍?；純海嚎墒寡蛩蠥FP含量高于正常妊娠羊水中10倍以上。母血篩查診斷開放性神經(jīng)管缺陷，準確率90%以上其他AFP增高疾病胎兒腦積水、先天腎臟病及糖尿病，先兆子癇等所致胎盤功能不足、流產(chǎn)、死胎等43羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座2．羊水膽堿酯酶測定羊水總膽堿酯酶測定(totalcholinesterase，TChE)正常妊娠妊娠12周，羊水ChE活性明顯增高開放性神經(jīng)管缺陷胎兒胎兒腦脊液和血液：直接滲入羊水，羊水ChE活性明顯增高。羊水真性膽堿酯酶測定(actualcholinesterase，AChE)檢測方法聚丙烯酰胺凝膠電泳分析。篩診陽性率可達到99.5%活性增高有助于確診胎兒開放性神經(jīng)管畸形。其他：嚴重先天畸形、流產(chǎn)、胎兒臍疝等44羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座粘多糖沉積病產(chǎn)前診斷發(fā)病機制細胞溶酶體酸性水解酶先天性缺陷臨床表現(xiàn)肝脾腫大、智力障礙、骨骼畸形等最佳方法測定培養(yǎng)羊水細胞內(nèi)酸性水解酶活性常用方法甲苯胺藍定性試驗正常妊娠早期：弱陽性正常妊娠中、后期：陰性。陽性：提示胎兒患有粘多糖沉積病糖醛酸半定量試驗肌酐中糖醛酸含量反映酸性粘多糖的多少正常妊娠16～20周：含量為3.3～7.0mg/mgCr。增高：提示胎兒患粘多糖沉積病45羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座胰腺纖維囊性變產(chǎn)前診斷γ-谷氨酰轉移酶（γ-GT）測定產(chǎn)前早期診斷胰腺纖維囊性變的最佳指標正常妊娠14～15周：為母體血清10～100倍。隨著胎齡增長，γ-GT活性逐漸下降。30～40周：為妊娠15周的1/40。胰腺纖維囊性變胎兒妊娠15周，羊水γ-GT活性明顯降低其他疾病21三體或18三體綜合征畸胎堿性磷酸酶(ALP)測定正常妊娠19周左右，ALP活性最高。29周后ALP活性穩(wěn)定在產(chǎn)前水平。胎兒胰腺囊性變ALP活性明顯降低46羊水檢驗醫(yī)學知識專題講座羊水細胞內(nèi)酶分析

先天性代謝缺陷?。合狄蚧蛲蛔儗е履撤N酶的缺失

多數(shù)先天性代謝缺陷?。荷袩o有效的治療方法（除苯丙酮尿癥、肝豆狀核