血紅蛋白分析流產(chǎn)物染色體非整倍體病檢測(cè)

關(guān)于血紅蛋白分析流產(chǎn)物染色體非整倍體病檢測(cè)血紅蛋白病血紅蛋白?。℉emoglobinopathy）為世界上最常見(jiàn)的一類單基因遺傳病由于血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)異常（異常血紅蛋白病），或珠蛋白肽鏈合成速率異常（珠蛋白生成障礙性貧血，又稱海洋性貧血）所引起的一組遺傳性血液病。臨床可表現(xiàn)溶血性貧血、高鐵血紅蛋白血癥或因血紅蛋白氧親和力增高或減低而引起組織缺氧或代償性紅細(xì)胞增多所致紫紺。第2頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天血紅蛋白病根據(jù)合成受阻的珠蛋白類型，可分為α-、β-、δ-、和δβ-地貧等。α-和β-地貧是最重要、最常見(jiàn)的地貧類型，少見(jiàn)的地中海貧血（γ-地貧、δ-地貧、(δβ)0-地貧）異常血紅蛋白病(可與地中海貧血相互作用)

（HbQ、HbG、HbS、HbC、HbE）胎兒血紅蛋白持續(xù)存在綜合癥（HPFH)第3頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天血紅蛋白分析技術(shù)血紅蛋白分析技術(shù)：采用HPLC等相應(yīng)技術(shù)，分析受檢個(gè)體的血紅蛋白組份，如HbA2、HbF、HbA及異常Hb等。血紅蛋白分析技術(shù)是進(jìn)行地貧基因分析的基本前提。第4頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天血紅蛋白分析的臨床應(yīng)用HbA2、HbF及異常Hb等血液學(xué)表型指標(biāo)是地中海貧血初步篩查指標(biāo)，單獨(dú)通過(guò)這些指標(biāo)和/或結(jié)合全血細(xì)胞分析技術(shù)可以查出地貧初篩陽(yáng)性個(gè)體。第5頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天血紅蛋白分析的臨床應(yīng)用HbA2升高（＞3.5%）：可疑的β-地貧除極少數(shù)的臨床表型為靜止型的突變位點(diǎn)外，幾乎所有的β-地貧攜帶者HbA2值均升高。部分疾病如瘧疾、甲狀腺功能亢進(jìn)等也可引起HbA2值升高。因此絕大多數(shù)β-地貧攜帶者HbA2值升高，HbA2值升高不全是β-地貧攜帶者。第6頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天血紅蛋白分析的臨床應(yīng)用HbA2降低（＜2.5%）：可疑的α-地貧此外，缺鐵性貧血、鉛中毒、骨髓增生性疾病、鐵幼粒細(xì)胞性貧血也可引起HbA2降低HbA2正常（2.5%～3.5%），同時(shí)MCV和/或MCH低：可疑α-地貧靜止型α-地貧：包括Hb組份等所有血液學(xué)指標(biāo)可全部正常第7頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天血紅蛋白分析的臨床應(yīng)用HbF值升高，達(dá)40%以上，提示重型或中間型β-地貧胎兒血紅蛋白持續(xù)存在綜合癥（HPFH)：

不在常規(guī)基因檢測(cè)范圍，Hb分析可提示(δβ)0-地貧：不在常規(guī)基因檢測(cè)范圍，Hb分析可提示第8頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天地中海貧血基因（常規(guī)）檢測(cè)范圍目前全世界至少發(fā)現(xiàn)200種β地貧基因突變類型，在中國(guó)人中至少發(fā)現(xiàn)30種突變。目前已發(fā)現(xiàn)十多種以上α地貧基因缺失型突變，在中國(guó)人中至少發(fā)現(xiàn)十種以上；α地貧基因點(diǎn)突變有約70種，中國(guó)南方發(fā)現(xiàn)12種。地中海貧血基因（常規(guī)）檢測(cè)β地貧基因點(diǎn)突變17種，3種α地貧基因缺失型及3種α地貧基因點(diǎn)突變型；涵蓋中國(guó)南方人群中95%以上的α-和β-地中海貧血致病基因缺陷。第9頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天地中海貧血基因（常規(guī)）檢測(cè)的局限性地中海貧血基因（PCR/RDB法）檢測(cè)β珠蛋白基因突變類型有限：目前全世界至少發(fā)現(xiàn)200種β珠蛋白基因突變類型，在中國(guó)人中至少發(fā)現(xiàn)30種突變。國(guó)內(nèi)臨床應(yīng)用的PCR/RDB檢測(cè)試劑盒僅檢測(cè)17種常見(jiàn)及少見(jiàn)突變。因PCR/RDB法不能檢出所有已知突變和新突變，故有漏檢風(fēng)險(xiǎn)。第10頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天地中海貧血基因（常規(guī)）檢測(cè)的局限性地中海貧血基因（gap-PCR/PCR-RDB法）檢測(cè)β珠蛋白基因突變類型有限：包括3種α地貧基因缺失型及3種α地貧基因點(diǎn)突變型；但目前已發(fā)現(xiàn)十多種以上α地貧基因缺失型突變，在中國(guó)人中至少發(fā)現(xiàn)十種以上；α地貧基因點(diǎn)突變有約70種，中國(guó)南方發(fā)現(xiàn)12種。第11頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天地中海貧血基因（常規(guī)）檢測(cè)的局限性由于試劑盒的檢測(cè)范圍和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)條件的局限性，罕見(jiàn)或未知突變的漏檢率約為2%～5%。第12頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天為什么地貧基因檢測(cè)同時(shí)要做Hb分析血紅蛋白分析技術(shù)是進(jìn)行地貧基因分析的基本前提，是不可少的重要參考指標(biāo)。地貧基因罕見(jiàn)或未知突變類型，Hb分析往往提示異常，因此通過(guò)Hb分析，指導(dǎo)進(jìn)一步采取針對(duì)性的技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，從而避免漏檢。第13頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天地貧基因檢測(cè)技術(shù)與Hb分析的關(guān)系Hb分析是基因檢測(cè)前的初篩，初篩陽(yáng)性仍需要基因檢測(cè)進(jìn)行確診。Hb分析可發(fā)現(xiàn)基因分析的錯(cuò)誤結(jié)果，包括人為錯(cuò)誤及罕見(jiàn)或未知突變類型的漏檢等。因此Hb分析不能代替基因分析，反之亦然。第14頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天舉例李某，HbA2為5.1%常規(guī)地貧基因檢測(cè)（含17種基因突變）正常。HbA2結(jié)果提示有罕見(jiàn)或未知突變類型。進(jìn)一步作β全基因測(cè)序后發(fā)現(xiàn)其為β-地貧基因攜帶者（基因型為罕見(jiàn)的CD37突變雜合子）第15頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、流產(chǎn)物染色體非整倍體病檢測(cè)第16頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天導(dǎo)致流產(chǎn)的常見(jiàn)因素遺傳及遺傳突變因素：自然流產(chǎn)胚胎50%以上由染色體異常所致內(nèi)分泌因素：黃體功能不全、多囊卵巢、高催乳素血癥、糖尿病、甲狀腺功能異常等女性解剖因素：子宮畸形、宮頸機(jī)能不全、肌瘤等自身免疫疾病：抗心磷脂抗體綜合癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合癥血液高凝狀態(tài)（APTT、PT、FB、FDP、DD二聚體）男方因素：弱精、畸精、感染、遺傳等感染因素:

精神因素：第17頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天遺傳及遺傳突變發(fā)生的兩個(gè)途徑：50%是由于親代攜帶異?；蚨z傳給子代

如地中海貧血、遺傳性耳聾和大部分遺傳代謝性疾病等

約占5%50%是由于生殖細(xì)胞突變導(dǎo)致的

如95%以上唐氏綜合癥等染色體非整倍體異常，一般無(wú)家族史

約占95%第18頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天人類染色體：男性46,XY;女性46,XX第19頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天分離定律、自由組合定律和連鎖互換三大定律是生物延續(xù)的保證，并以二倍體規(guī)律遺傳。非整倍體是因生殖細(xì)胞減數(shù)分裂錯(cuò)誤所導(dǎo)致。胚胎非整倍體突變的發(fā)生機(jī)制第20頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天生殖細(xì)胞減數(shù)分裂21-三體綜合癥的發(fā)生機(jī)理精原細(xì)胞卵原細(xì)胞21-三體綜合癥的發(fā)生機(jī)理第21頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天已證實(shí)，染色體異常是自然流產(chǎn)的主要原因，而且具有一定規(guī)律。規(guī)律一：流產(chǎn)時(shí)間越早，染色體畸變的可能性越大在<15孕周的自然流產(chǎn)中，染色體異常發(fā)生率約為50%～80%。在15～24孕周期間自然流產(chǎn)中，染色體異常發(fā)生率約占20%。在>24孕周的死胎中，染色體異常發(fā)生率約占10%。第22頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天規(guī)律二：在由于染色體異常導(dǎo)致流產(chǎn)的病例中，90%以上為染色體數(shù)目異常第23頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天規(guī)律三：具有胚胎染色體異常流產(chǎn)史或活產(chǎn)史者，再次發(fā)生幾率增高如果首次流產(chǎn)的胎兒為非整倍體，再次流產(chǎn)的胎兒也可能為非整倍體，但這種異?？梢圆辉谕蝗旧w上發(fā)生。三體癥（如16三體）胎兒一般是致死性（流產(chǎn)），但再次妊娠可能會(huì)出現(xiàn)表型異常和其他三體型（如18三體）的活嬰。第24頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天若為染色體結(jié)構(gòu)異常導(dǎo)致流產(chǎn)者，夫妻應(yīng)做染色體核型分析檢查，但不能替代流產(chǎn)胚胎的染色體檢查。第25頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天所以，流產(chǎn)胚胎遺傳檢測(cè)的意義在于排除染色體突變導(dǎo)致的流產(chǎn)：⒈自然淘汰：60%以上由于染色體突變引起，屬于自然淘汰其中約90%以上為生殖細(xì)胞減數(shù)分裂或早期卵裂錯(cuò)誤導(dǎo)致染色體突變，屬于自發(fā)突變（一般為染色體數(shù)目異常）。不足10%是由于父母雙方之一為染色體平衡易位攜帶者而引起，屬于遺傳（一般為結(jié)構(gòu)畸變）。需進(jìn)一步檢查父母染色體以確認(rèn)。⒉母體因素第26頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天指導(dǎo)妊娠1.自然淘汰的流產(chǎn)處理方式流產(chǎn)胚胎若為非整倍體，再次妊娠前無(wú)需特殊準(zhǔn)備，但要做產(chǎn)前診斷。流產(chǎn)胚胎若為結(jié)構(gòu)畸變，一定要查父母，可通過(guò)PGD技術(shù)選擇正常胚胎，或自然妊娠后做產(chǎn)前診斷。第27頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.對(duì)于母體因素引起的流產(chǎn)：黃體功能不全：補(bǔ)黃體多囊卵巢等：治療后再妊娠生殖道異常：注意保胎生殖道感染：治療后再次

妊娠，注意孕早期檢測(cè)；改變不良的生活習(xí)慣等。免疫治療第28頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天流產(chǎn)組織染色體檢測(cè)方法核型分析熒光原位雜交（FISH）Array-CGH技術(shù)

MLPA技術(shù)基因測(cè)序技術(shù)第29頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天流產(chǎn)組織培養(yǎng)+核型分析方法：接種、培養(yǎng)、制片和觀察要求：流產(chǎn)組織要求無(wú)菌、新鮮優(yōu)點(diǎn)：直觀、金標(biāo)準(zhǔn)，可查出染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目異常缺點(diǎn)：標(biāo)本要求高，培養(yǎng)失敗率高、繁瑣、費(fèi)時(shí)第30頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天熒光原位雜交技術(shù)分析方法：雜交、觀察優(yōu)點(diǎn)：無(wú)需培養(yǎng)、標(biāo)本要求低、較直觀缺點(diǎn)：成本高、費(fèi)時(shí)、需要熒光顯微鏡，一般只能查出常見(jiàn)染色體數(shù)目異常等。第31頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天染色體片段分析多重連接探針擴(kuò)增multiplexligationdependentprobeamplification，MLPA)方法：DNA提取，PCR擴(kuò)增，測(cè)序優(yōu)點(diǎn)：無(wú)需培養(yǎng)、標(biāo)本要求低、較直觀、快速、試劑成本低廉等。缺點(diǎn)：需要測(cè)序儀等特殊儀器、不能查出探針以外的染色體片段等第32頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天微陣列比較基因組雜交技術(shù)（array-CGH）原理：將待測(cè)樣本DNA雜交到覆蓋有標(biāo)準(zhǔn)人類全基因組核苷酸序列的微陣列上，經(jīng)配套掃描儀掃描，計(jì)算機(jī)軟件及生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)分析樣本全基因組DNA拷貝數(shù)改變。

優(yōu)點(diǎn)：克服了傳統(tǒng)方法的局限性，直接定位在基因水平上。缺點(diǎn)：設(shè)備昂貴，收費(fèi)高。第33頁(yè),共37頁(yè)，2024年2月25日，星期天標(biāo)本要求

流產(chǎn)胚胎（絨毛）：請(qǐng)?jiān)谖⒐谓q毛后從吸管的無(wú)菌端取出并置于無(wú)菌紗布上，與蛻膜進(jìn)行鑒別（無(wú)法確定絨毛組織的，12周內(nèi)送檢整個(gè)胚胎；12周以上的送檢心臟血或肝臟），待確定為絨毛組織或胎芽后將標(biāo)本浸泡于無(wú)菌生理鹽水中。盡量新鮮，2~8℃保存，當(dāng)天送檢。引產(chǎn)的異常胎兒：建議優(yōu)先送檢引產(chǎn)胎兒的心臟血（EDTA抗凝血3-4ml）。如無(wú)法獲得胎兒血樣本可切取黃豆大小的內(nèi)臟組織（肝臟最佳），浸泡于無(wú)菌生理鹽水中，2~8℃保存，當(dāng)天送檢。第34頁(yè),