血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定

關(guān)于血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定實驗提綱實驗目的1酶活性測定原理與方法2比色分析法原理與公式計算3722分光光度計操作方法與注意事項4

思考題5第2頁,共19頁，2024年2月25日，星期天1實驗目的1234掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的原理熟悉血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的方法熟悉比色分析法了解722分光光度計的使用方法第3頁,共19頁，2024年2月25日，星期天2酶活性測定原理與方法酶活性測定原理＋2,4－二硝基苯肼

(黃色)丙酮酸二硝基苯腙(紅棕色)NaOHα-酮戊二酸丙氨酸谷氨酸丙酮酸＋GPT丙酮酸第4頁,共19頁，2024年2月25日，星期天酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法1試管號標準管標準空白管測定管測定空白管丙酮酸標準液（ml）(1ml=100μg)0.1－－－新鮮血清（ml）－－0.10.1底物液（37℃）（ml）0.50.50.5－0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（ml）(pH=7.4)－0.1－－

此前三管置于37℃保溫30分鐘2，4-二硝基苯肼(ml）0.50.50.50.5底物液（ml）－－－0.5充分混合，置于37℃保溫20分鐘0.4mol/LNaOH（ml）555523第5頁,共19頁，2024年2月25日，星期天酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法標準管標準空白管測定管測定空白管顏色深淺不一第6頁,共19頁，2024年2月25日，星期天酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法試管號標準管標準空白管測定管測定空白管丙酮酸標準液（ml）(1ml=100μg)0.1－－－新鮮血清（ml）－－0.10.1底物液（37℃）（ml）0.50.50.5－0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（ml）(pH=7.4)－0.1－－

此前三管置于37℃保溫30分鐘2，4-二硝基苯肼(ml）0.50.50.50.5底物液（ml）－－－0.5充分混合，置于37℃保溫20分鐘0.4mol/LNaOH（ml）5555第7頁,共19頁，2024年2月25日，星期天酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法標準管標準空白管測定管測定空白管如何排除干擾?真正丙酮酸定量?顏色深淺不一:還有其他酮酸的影響第8頁,共19頁，2024年2月25日，星期天3比色分析法原理與公式計算比色分析法原理定義——通過比較有色物質(zhì)溶液顏色的深淺，測知該物質(zhì)濃度的方法。12原理——Lambert－Beer定律第9頁,共19頁，2024年2月25日，星期天3比色分析法原理與公式計算比色分析法公式推導2A標/A測=C標/C測數(shù)學表達式——A=K×C×L溶液吸光度溶液吸光系數(shù)溶液濃度液層厚度1公式推導第10頁,共19頁，2024年2月25日，星期天本實驗公式計算3比色分析法原理與公式計算A標準－A標準空白0.1ml血清所產(chǎn)生的丙酮酸μg數(shù)＝A測定－A測定空白C標準×谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位的定義：1ml血清于37℃與底物作用30分鐘，產(chǎn)生2.5μg丙酮酸為1個GPT活性單位?；盍挝?ml＝0.1ml血清所產(chǎn)生的丙酮酸μg數(shù)×102.512第11頁,共19頁，2024年2月25日，星期天上述各管靜置10分鐘后，使用722分光光度計，在520nm處，以蒸餾水校正零點，測定各管相應吸光度值。標準管標準空白管測定管測定空白管酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法第12頁,共19頁，2024年2月25日，星期天4722分光光度計使用方法及注意事項使用方法接通電源前，檢查儀器部件是否完好，工作電壓是否正常。將比色杯內(nèi)放好空白液（蒸餾水）、標準液、標準空白液、測定液、測定空白液，置于比色池中（由下向上的順序放置）。（見圖）1234蓋上暗箱蓋，選擇儀器自動校正空白液“A”=0，并由下向上的順序讀取各管“A”（即A標準、A標空、A測定、A測空）。（見圖）start接通電源打開暗箱蓋，進入光度測量界面。選擇測定的波長（520nm）。（見圖）GOTOλ第13頁,共19頁，2024年2月25日，星期天4722分光光度計使用方法及注意事項使用方法第14頁,共19頁，2024年2月25日，星期天4722分光光度計使用方法及注意事項使用方法第15頁,共19頁，2024年2月25日，星期天4722分光光度計使用方法及注意事項使用方法第16頁,共19頁，2024年2月25日，星期天注意事項4722分光光度計使用方法及注意事項手持比色杯磨砂面，比色杯光面對準光路。比色杯內(nèi)液體體積占總體積2/3，比色杯外壁不可有液體，則需擦鏡紙沾去。與比色杯由下向上所放位置對應，儀器所報數(shù)據(jù)順序則由1-5。123第17頁,共19頁，2024年2月25日，星期天5思考題123實驗操作中第一次37℃保溫30分鐘和第二次37℃保溫20分鐘，各有什么意義？為什