胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901ADR S100A6基因轉(zhuǎn)染的研究的開(kāi)題報(bào)告

胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901ADRS100A6基因轉(zhuǎn)染的研究的開(kāi)題報(bào)告一、研究背景及意義胃癌是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，全球每年新發(fā)胃癌患者達(dá)到100萬(wàn)，其中中國(guó)是胃癌的高發(fā)區(qū)之一，其患病率和死亡率均居世界前列。治療胃癌的主要方法是手術(shù)切除、化學(xué)藥物治療、放射治療等。然而，由于胃癌多發(fā)生在老年人身上，加之該腫瘤常常在患者身體狀況較差時(shí)才能及早發(fā)現(xiàn)，很多患者不能耐受手術(shù)治療，只能接受藥物治療。但是，藥物治療后會(huì)出現(xiàn)耐藥性，導(dǎo)致治療失敗。因此，研究胃癌藥物耐藥的分子機(jī)制對(duì)于擴(kuò)大治療選擇、提高治療成功率具有重要意義。S100A6基因是一種小分子的膠原蛋白家族成員，主要分布在細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)等部位，參與了多種細(xì)胞生命活動(dòng)，如細(xì)胞增殖、分化、凋亡、信號(hào)傳導(dǎo)等。在腫瘤細(xì)胞中，S100A6基因過(guò)表達(dá)，可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，而且與藥物耐藥性密切相關(guān)。已有研究表明，在胃癌細(xì)胞株中，S100A6基因的表達(dá)也較高。因此，本研究的目的是通過(guò)將S100A6基因轉(zhuǎn)染到胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901ADR中，探討S100A6基因在胃癌耐藥中的作用機(jī)制，為胃癌藥物耐藥性研究提供新的思路。二、研究方法1.胃癌耐藥細(xì)胞株的培養(yǎng)及藥物敏感性檢測(cè)選取胃癌藥物耐藥細(xì)胞株SGC7901ADR進(jìn)行研究，采用MTT法檢測(cè)不同濃度的藥物對(duì)該細(xì)胞株的抑制率，以評(píng)估細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性；采用CCK-8法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，建立胃癌藥物耐藥模型。2.重組質(zhì)粒的構(gòu)建在S100A6基因的CDS區(qū)引入限制酶切位點(diǎn)，PCR擴(kuò)增并純化，將PCR產(chǎn)物與載體pEGFP-C1進(jìn)行酶切，然后將片段并聯(lián)后變性作用驗(yàn)證并測(cè)序確定突變的正確性。3.質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染采用基因轉(zhuǎn)染試劑（如Lipofectamine2000），將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到SGC7901ADR細(xì)胞中，以達(dá)到穩(wěn)定表達(dá)的目的。4.基因表達(dá)的檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Westernblotting檢測(cè)S100A6基因在細(xì)胞中的表達(dá)，以及檢測(cè)胃癌細(xì)胞的相關(guān)信號(hào)通路與耐藥性的變化。5.對(duì)SGC7901ADR轉(zhuǎn)染S100A6基因的細(xì)胞進(jìn)行化療藥物的敏感性和細(xì)胞增殖情況的檢測(cè)對(duì)轉(zhuǎn)染S100A6基因的SGC7901ADR細(xì)胞做不同化療藥物的藥敏試驗(yàn)，以同時(shí)測(cè)定細(xì)胞增殖情況和藥物敏感性，以評(píng)估S100A6基因在胃癌耐藥中的作用。三、研究預(yù)期結(jié)果本研究通過(guò)將S100A6基因轉(zhuǎn)染到胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901ADR中，將探討S100A6基因在胃癌藥物耐藥性中的作用機(jī)制。預(yù)計(jì)研究結(jié)果將有以下幾個(gè)方面的發(fā)現(xiàn)：1.S100A6基因在胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901ADR中的表達(dá)得到穩(wěn)定和顯著上調(diào)。2.S100A6基因參與了胃癌耐藥性的形成。3.S100A6基因可能通過(guò)激活相關(guān)信號(hào)通路等途徑參與胃癌異質(zhì)性和進(jìn)程的調(diào)節(jié)。4.通過(guò)調(diào)控S100A6基因的表達(dá)，可逆轉(zhuǎn)SGC7901