【寧心安神茶的有效成分含量測定探究4400字（論文）】

寧心安神茶的有效成分含量測定研究目錄TOC\o"1-2"\h\u23826寧心安神茶的有效成分含量測定研究 19922關鍵詞：寧心安神藥茶薯蕷皂苷元HPLC-ELSD含量測定 145681.實驗材料及試劑 2241541.1儀器 2237971.2藥品與試劑 3195662.實驗方法與結果 3135912.1色譜條件 3110242.2溶液的制備 3311572.3專屬性試驗 4314322.4線性關系考察 5298222.5方法學考察 612132.6樣品測定結果 8162023.分析與討論 9254633.1薯蕷皂苷元提取方法的確定 9313343.2流動相的選擇 9282613.3建立HPLC-ELSD法含量測定的意義 9241833.4結果討論 101730參考文獻 1摘要：目的建立寧心安神藥茶中有效成分-薯蕷皂苷元的含量測定方法。方法采用HPLC-ELSD法測定寧心安神茶中薯蕷皂苷元的含量，色譜柱型號為DiamonsilC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相A為乙腈，流動相B為0.1%醋酸水溶液（98:2）；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：203nm；ELSD漂移管溫度85℃。結果：測得薯蕷皂苷元在進樣量2.5～12.5μg范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好，線性方程為y=125.79x-231.91（r=0.9992）。精密度，重復性，穩(wěn)定性試驗RSD值均<3%。測得寧心安神茶中薯蕷皂苷元的含量約為0.38mg/g。結論：所建立的HPLC-ELSD法具有高效、高速度、高靈敏度、高專屬性的特點,為進一步確定寧心安神茶中有效成分的質量控制提供了有效手段。關鍵詞：寧心安神藥茶薯蕷皂苷元HPLC-ELSD含量測定寧心安神茶的配料中百合藥食兩用，其主要成分有皂苷類、多糖、生物堿、微量元素及蛋白質、磷脂、無機元素等[1]。藥理研究表明，百合在止咳化痰，抗疲勞與耐缺氧，升高外周白細胞，降血糖及抑制遲發(fā)過敏性反應、催眠安神等方面均具有顯著效果，而百合擁有的這些功效與其所含的甾體皂苷和苷元，尤其是皂苷元密切相關，甾體皂苷元是一類具有螺旋甾烷結構的化合物或其衍生物，百合藥材中單一成分的甾體皂苷含量低，給百合總皂苷的含量測定的準確度帶來一定難度[2]。但百合中含有甾體皂苷的皂苷元富含薯蕷皂苷元，薯蕷皂苷元具有抗血栓，改善血管功能等寧心作用[3]。利用高效液相色譜法（HPLC）來測定百合中薯蕷皂苷元的含量是目前常用的一種分析方法，其操作過程簡便快速，實驗結果準確，是工業(yè)生產(chǎn)和化學研究上檢測薯蕷皂苷元含量的理想方法。因此本實驗通過酸水解以薯蕷皂苷元為標準用高效液相－蒸發(fā)光散射檢測器(HPLC－ELSD)測定寧心安神茶的配料百合中的薯蕷皂苷元含量，從而進一步確定寧心安神茶的質量標準。有些中藥是通過抑制機體對外源性脂類的吸收和膽固醇轉化物膽酸在肝腸循環(huán)中減少膽酸重吸收的數(shù)量的機制陽氏血脂川，如中藥草決明、何首烏、虎杖、大黃等;有些中藥通過阻斷膽汁酸的肝腸循環(huán)，減少膽汁酸重吸收的數(shù)量，既能使得膽汁酸及其衍生物排泄量增加，又能觸發(fā)反饋機制使膽汁酸合成限速酶活性增加，促進膽固醇轉化為膽汁酸，起到陽氏膽固醇的目的，像構祀、海帶、甘薯、大豆、決明子等[4];大黃、香菇等中藥是通過抑制脂類合成對血脂起到降低作用;蕎麥、銀杏、山碴、黃答等對血脂有抗過氧化的作用;月見草、澤瀉、姜黃、南瓜等是通過提高高密度膽固醇，陽氏低密度月旨蛋白、極低密度脂蛋白膽固醇水平實現(xiàn)調血脂作用。1.實驗材料及試劑1.1儀器儀器公司L-3535型高效液相色譜儀（20164460）北京普源精電科技有限公司蒸發(fā)光散射檢測器北京普源精電科技有限公司XWK-Ⅲ型空氣發(fā)生器天津市津分分析儀器制造有限公司AP-9950無油隔膜式真空泵(20164341)天津奧特賽恩斯儀器有限公司FA224型電子分析天平（萬分之一）上海舜宇恒平科學儀器有限公司EX125ZH型電子分析天平(十萬分之一）奧豪斯儀器有限公司B-5200DTDN型超聲波清洗器寧波新芝生物科技股份有限公司DZKW-D-Z電熱恒溫水浴鍋天津市濱海新區(qū)大港紅杉實驗設備廠DE-100g萬能粉碎機紅景天萬能粉碎機SY-5000旋轉蒸發(fā)儀上海亞榮生化儀器廠XMTD電熱恒溫干燥箱余姚工業(yè)儀表二廠1.2藥品與試劑藥品來源槐花（批號21050）亳州市京皖中藥飲片廠玫瑰（批號210901）亳州市京皖中藥飲片廠百合（批號211001）北京本草方源（亳州）藥業(yè)科技有限公司薯蕷皂苷元中國食品藥品檢定研究院乙腈、甲醇賽默飛世爾科技（中國）有限公司無水乙醇、正丁醇、石油醚（沸點60-90℃）、濃硫酸、鹽酸分析純超純水、蒸餾水實驗室自制2.實驗方法與結果2.1色譜條件色譜柱：DiamonsilC18柱（5μm,250mm×4.6mm）;流速：1.0ml/min;流動相[5]：A乙腈-B0.1%醋酸水溶液（98:2,v/v）;柱溫：30℃;進樣量：20μL;ELSD漂移管溫度:85℃;載氣：N2。2.2溶液的制備2.2.1對照品溶液的制備精密稱取薯蕷皂苷元對照品12mg，加無水乙醇定容至10ml容量瓶中制成每1ml含1.25mg的溶液，過0.45μm微孔濾膜，轉移至西林瓶中，即得。2.2.2供試品溶液的制備精密量取寧心安神茶粉末10g，于250ml圓底燒瓶中，用3*150ml70％乙醇在超聲波清洗器內(nèi)分別超聲提取3次，溫度55℃，每次45min，趁熱抽濾，合并濾液，測量pH值呈中性，轉移至旋轉蒸發(fā)儀內(nèi)減壓回收乙醇至干，殘渣用3*10ml水分次溶解后轉移至分液漏斗中，以3*40ml水飽和正丁醇溶液萃取3次至溶液基本無色REF_Ref7806\r\h[6]，合并正丁醇液，轉移至旋轉蒸發(fā)儀內(nèi)減壓回收溶劑至干，殘渣用120ml6％稀硫酸在100℃水浴鍋中回流水解5h，冷卻至室溫后用3*50ml石油醚萃取3次合并石油醚液并水洗至pH值呈中性，回收溶劑至干，殘渣用乙腈溶解并定容至10ml容量瓶中，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，轉移至西林瓶中，即得[7]。2.2.3陰性溶液的制備按照寧心安神藥茶制備處方工藝加入除百合外的其他藥茶配方,配制成陰性樣品,精密量取陰性樣品粉末10g，按“2.2.2”項下樣品處理方法平行處理寧心安神藥茶陰性樣品,得陰性樣品溶液[8]。2.3專屬性試驗精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10μl,在2.2項色譜條件下測定,記錄色譜圖，結果見圖1。圖1專屬性試驗色譜圖A對照品B供試品C陰性對照品由上圖可見,在2.1項色譜條件下,薯蕷皂苷元峰形良好,保留時間10.475min,陰性對照色譜在此處無假陽性峰,根據(jù)實驗結果可表明此方法專屬性良好，其他組分對測定無干擾[9]。2.4線性關系考察精密吸取2.2.1項下所制備的薯蕷皂苷元對照品溶液（1.25mg/ml）2μl,3μl，4μl,5μl,8μl,10μl依次注入液相色譜儀，分別進樣兩次，記錄色譜圖，以兩次峰面積平均值Y（mV.s）為縱坐標，薯蕷皂苷元進樣量X(μg)為橫坐標，照2.1項下的色譜條件進行回歸分析，結果見表1。表1線性關系考察實驗結果樣品編號進樣量（μg）峰面積1（mV.s）峰面積2（mV.s）平均值12.5111.158105.446108.30223.75241.194232.874237.03435375.082377.994376.53846.25544.943554.834549.8885101007.0371003.7921005.414612.51376.4871349.7011363.094回歸方程為：y=125.79x-231.91相關系數(shù)r=0.9992結果可表明，薯蕷皂苷元在進樣量2.5～12.5μg范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好，結果見圖2。圖2薯蕷皂苷元標準曲線2.5方法學考察2.5.1精密度實驗取2.2.1項下制備的同一對照品溶液進行實驗，每次進樣2μL，重復進樣6次，測定薯蕷皂苷元峰面積值的RSD=2.27%。結果表明，該實驗儀器的精密度良好，實驗結果見表2。表2薯蕷皂苷元精密度實驗結果進樣次數(shù)123456峰面積100.526100.618103.022104.030105.44699.549平均值102.199RSD值（%）2.27%2.5.2穩(wěn)定性實驗取2.2.2項下所制備的同一供試品溶液進行實驗，每次進樣40μL，分別在0,2,4,6,8,12h各進一針，測得薯蕷皂苷元的峰面積值的RSD=2.25%（n=6）。結果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好，實驗結果見表3[10]。表3穩(wěn)定性實驗結果放置時間（h）0246812峰面積1774.2881744.7741706.0561718.2291792.8231801.115平均值1756.214RSD值（%）2.25%2.5.3重復性試驗取同一樣品5份，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，用自動進樣器精密吸取40μL，進樣，測定薯蕷皂苷元峰面積值，計算含量。測得6次薯蕷皂苷元平均含量為0.36mg/g,RSD值為2.24%（n=5）,表明該含量測定方法的重復性較好，實驗結果見表4。表4薯蕷皂苷元含量測定重復性試驗結果樣品編號峰面積平均值平均含量(mg/g)RSD值11774.2881748.8920.362.24%21744.77431706.05641718.22951801.1152.5.4加樣回收實驗取已知薯蕷皂苷元含量的藥茶粉末5份，各約10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，再加入相當于樣品中薯蕷皂苷元含量的80%，100%和120%的薯蕷皂苷元對照品溶液，按項下方法制備供試品溶液，分別注入液相色譜儀測定，計算回收率[11]。表5薯蕷皂苷元加樣回收率測定結果（n=5）樣品編號平均含量(%)RSD(%)10.04151.4720.05560.6330.06860.7740.05870.7650.04390.492.6樣品測定結果取寧心安神藥茶粉末10g按2.2.2項下方法操作制備供試品溶液，用自動進樣器精密量取供試品液40μL，注入高效液相色譜儀，在2.1項下色譜條件下進行測定，記錄薯蕷皂苷元色譜峰面積值，重復2次，取2次峰面積平均值，按外標法計算含量。高效液相色譜圖見圖4，含量測定結果見表6。圖4供試品高效液相色譜圖表6薯蕷皂苷元樣品測定結果樣品編號峰面積平均值含量（mg/g）11864.1471832.6310.3821801.115通過以上數(shù)據(jù)可知，寧心安神茶中含有的有效成分薯蕷皂苷元的含量約為0.38mg/g。3.分析與討論3.1薯蕷皂苷元提取方法的確定薯蕷皂苷元是一種甾體皂苷元，可溶于常見有機溶劑和醋酸，且不溶于水，故本實驗選擇有機溶劑乙腈（色譜純）作為最終提取物的溶劑。薯蕷皂苷元在一般植物體內(nèi)一般與鼠李糖、葡萄糖結合成薯蕷皂苷，故本實驗先提取總皂苷再采用酸水解的提取方法進行提取分離。在供試品溶液的制備中本實驗曾考察水浴加熱回流提取法和超聲提取法2種提取方法，結果以55℃超聲提取時測定的含量最高且提取方式最簡單便捷。3.2流動相的選擇在高效液相色譜法實驗過程曾采用乙腈-水、甲醇-水按一定比例作為流動相進行測定,結果顯示對照品峰形較差;后采取乙腈-0.1mol/L醋酸水溶液（98:2,v/v），結果顯現(xiàn)各峰峰形較好,且出峰時間適宜,因此,將其作為本實驗研究的流動相條件。3.3建立HPLC-ELSD法含量測定的意義由于薯蕷皂苷元系異螺旋甾烷的衍生物，分子結構中沒有共軛結構，在紫外測定中僅有末端吸收REF_Ref7806\r\h[1]，HPLC-UV檢測采用紫外末端測定薯蕷皂苷元的含量，該法受溶劑峰及其他物質的干擾較大，蒸發(fā)光散射檢測器(D)能有效地克服溶劑峰強等方面的不足，且不依賴被檢測物質的光學特性和官能團，在測定皂苷類物質時具有一定優(yōu)勢。因此本實驗采用高效液相-蒸發(fā)光散射檢測器（HPLC-ELSD）測定寧心安神茶中薯蕷皂苷元的含量，該方法的優(yōu)點為靈敏度高、干擾少且重現(xiàn)性好。3.4結果討論目前文獻中對于用HPLC-ELSD法測百合中薯蕷皂苷元的含量測定研究的報道較從本實驗結果看，寧心安神茶中薯蕷皂苷元含量較低，結果并不完善，且由于實驗周期短，實驗儀器操作經(jīng)驗不足等因素導致實驗數(shù)據(jù)較少，色譜圖峰形不佳，但是可以確認寧心安神茶中百合確實含有有效成分薯蕷皂苷元。導致實驗結果含量較低的因素可能是百合藥材的品種差異，實驗操作過程的不準確性，以及加樣回收實驗的缺失。因此目前可將寧心安神茶中薯蕷皂苷元的含量測定作為寧心安神茶的質量控制標準之一，但后續(xù)實驗仍需完善改進。參考文獻[1]史艷霞,周日寶,童巧珍等.HPLC法測定藥用百合中薯蕷皂苷元的含量[J].湖南中醫(yī)藥大學學報,2009,29(02):37-39.[2]文藝,王寶藝,侯響玲等.HPLC-EL