進口魚粉檢驗檢疫操作規(guī)程

進口魚粉檢驗檢疫操作規(guī)程24.4抽樣比例4.4.1袋裝魚粉品質(zhì)檢驗樣品抽樣按每50kg計為一袋，100t以下任取50袋；100t以上，按一批貨物總袋數(shù)的百分之一抽取，每袋抽樣15g,每500t抽取一份原始樣品(不足500t按500t計算)。4.4.2袋裝魚粉檢疫樣品抽樣按每50kg計為一裝，100t以下任取40袋；100t以上，按一批貨物總袋數(shù)的百分之一抽取，每袋抽樣15g,20袋采集的份樣合為一個樣品，樣重約300g(不足500t按500t計算)。4.4.3散裝魚粉檢驗檢疫樣品抽樣待魚粉灌包進倉后按4.4.1和4.4.2操作。4.5抽樣方法4.5.1按4.4抽取樣品份數(shù)。在每堆垛四周，上、中、下各部位以曲線型走向，隨機抽取樣品。4.5.2將扦樣口朝下，自魚粉袋包角斜角方向插入裝內(nèi)，然后旋轉(zhuǎn)朝上(180℃)抽出，裝入抽樣裝。使用經(jīng)清潔、干燥、滅菌的鋁或不銹鋼制成的分樣鏟(薄鐵板或不輛鋼板分樣板兩塊)。5.2.1四分法：按SN/T0800.1規(guī)定執(zhí)行。5.2.2檢疫樣品按每100t制成一份實驗室樣品；檢驗樣品按每3000t制成一份實驗室樣品。樣品標(biāo)簽應(yīng)寫明報檢號、品名、數(shù)量(重量)、檢驗項目、送樣日期、送樣單位等有關(guān)內(nèi)容。樣品應(yīng)密封保存陰涼干燥處。6實驗室檢驗檢疫將5.2.2實驗室檢驗樣品置于清潔的白色搪瓷盤中，用分樣板充分混勻后推平，以四分法逐步縮分至250g,裝入盛樣玻璃瓶內(nèi)。檢驗樣品的盛樣玻璃瓶上須加貼標(biāo)簽，標(biāo)簽上應(yīng)有報檢號、樣品名稱，檢驗項目，開檢日期、檢畢日期等記錄。6.1.3檢驗方法按照GB/T6432進行測定。按照GB/T6433進行測定。按照GB/T6439進行測定。按照GB/T6438進行測定。6.1.3.5砂分(鹽酸不溶性灰分)按照GB/T9825進行測定。6.1.3.6揮發(fā)性鹽基氮按照GB/T5009.45進行測定。按照ZBB46002進行測定。按照GB/T6435進行測定。6.2.1沙門氏菌的檢驗方法見附錄A。6.2.2細菌總數(shù)的測定方法見附錄B。6.2.3霉菌檢驗方法見附錄C。6.2.4致病性弧菌檢驗方法見附錄D。6.2.5進口動物源性中牛羊源性成分檢測方法按照SN/T1119—2002進行測定。7檢驗檢疫結(jié)果評定及處置7,1檢驗結(jié)果符合合同規(guī)定的，檢疫未發(fā)現(xiàn)危險性有害生物的，評定為合格，出具《入境貨物檢驗檢疫7.2凡檢驗中某項(幾項)結(jié)果不符合合同要求的，評定為不合格，出具《索賠證書》,7.3檢疫項目中有不符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)或發(fā)現(xiàn)動植物危險性有害生物(如沙門氏菌、谷斑皮蠹等)的，評定為不合格。出具《檢驗檢疫處理通知書》實施檢疫處理，并出具《植物檢疫證書》或《獸醫(yī)衛(wèi)生證書》,7.4對來自衛(wèi)生檢疫疫區(qū)的貨物，出具《檢驗檢疫處理通知書》實施衛(wèi)生處理，并簽發(fā)《熏蒸/消毒證(規(guī)范性附錄)A.1預(yù)增菌培養(yǎng)取檢疫樣品25g,加入裝有225mL緩沖蛋白胨水的500mL廣口瓶內(nèi)(塊粒狀用均質(zhì)器，以8000r/min~10000r/min打碎1min)。在36℃±1℃培養(yǎng)16h~20h。取預(yù)增菌培養(yǎng)物10mL,接種于裝有100mL.四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液的培養(yǎng)瓶中，另取預(yù)增菌培養(yǎng)物10mL,接種于裝有100mL.亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液培養(yǎng)瓶中，四硫磺酸鈉培養(yǎng)瓶在43℃培養(yǎng)24h。亞硒酸鹽胱氨酸培養(yǎng)瓶在36℃±1℃培養(yǎng)24h。A.4.1取第A.3章結(jié)果為陽性的TTB或SC選擇性增菌培養(yǎng)物一接種環(huán)，分別劃線接種酚紅煌綠(BS)瓊脂平皿和DHL瓊脂平皿，各接種兩個平皿，將平皿底部向上在36℃±1℃培養(yǎng)。必要時可取第A.2章選擇性增菌培養(yǎng)物重復(fù)分離培養(yǎng)一次，A.4.2分離培養(yǎng)20h~24h后，檢查平皿A.4.3如生長微弱，或無典型沙門氏菌落出現(xiàn)時，可在36℃±1℃重新培養(yǎng)18h～24h。再檢驗平Ⅲ離到乳糖陽性沙門氏菌時，三糖鐵斜面是黃色的，因而證實沙門氏菌，不應(yīng)僅僅限于三糖鐵培養(yǎng)的結(jié)果。表A.1三糖鐵培養(yǎng)基變化表A.5.1.2尿素瓊脂培養(yǎng)基：在瓊脂表面劃線，在36℃±1℃培養(yǎng)24h,應(yīng)不時檢查，如反應(yīng)是陽性，尿素極快的釋放氨，它使酚紅的顏色變成玫瑰紅色—桃紅色，以后再變成深粉紅色，反應(yīng)常在2h~24h之間出現(xiàn)。通常，沙門氏菌反應(yīng)為陰性。A.5.1.3賴氨酸脫羧反應(yīng)培養(yǎng)基；將培養(yǎng)物剛好接種在液體表面之下，在36℃±1℃培養(yǎng)24h,生長后產(chǎn)生紫色，表明是陽性反應(yīng)。約95%的沙門氏菌反應(yīng)為陽性。A.6抗原反應(yīng)A.6.1以純墻養(yǎng)菌落，用沙門氏菌因子血清O、Vi或H型，用平板凝集法，檢查其抗原的存在。在仔細擦凈的玻璃板上，放1滴鹽水，使部分被檢菌落分散于鹽水中，均勻混合后，輕輕搖動30s~60s,對著黑的背影觀察，如果細菌已凝集成或多或少的清晰單位，此菌株被認(rèn)為能自凝，不宜提供作抗原鑒定。A.6.2O抗原檢查：用認(rèn)為無自凝力的純菌落，按A.6.1方法，用1滴O型血清代替鹽水，如發(fā)生凝集，判為陽性。A.6.3Vi抗原檢查：用認(rèn)為無自凝力的純菌落，按A.6.1方法，用1滴Vi型血清代替鹽水，如發(fā)生凝集，判為陽性。A.6.4H抗原檢查：用認(rèn)為無自凝力的純菌落接種在半固體營養(yǎng)瓊脂中，在36℃±1℃培養(yǎng)18h~20h,用這種培養(yǎng)物作為檢查H抗原用，按照A.6.1方法，用1滴H血清代替鹽水，如發(fā)生凝集，判為A.7生化和血清反應(yīng)結(jié)果判定只有以上生化反應(yīng)(包括儀器鑒定)均典型，同時O,Vi或H抗原血清反應(yīng)陽性，才可判定“檢出沙門氏菌"。A.8檢驗報告綜合以上生化試驗、血清鑒定結(jié)果，報告檢驗樣品是否含有沙門氏菌。衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)為“不得檢出/A.9檢驗程序沙門氏菌檢驗程序見圖A.1。(規(guī)范性附錄)細菌總數(shù)檢驗方法B.1操作步驟B.1.1試樣稀釋及培養(yǎng)B.1.1.1無菌稱取試樣10.0g,放入含有90mL稀釋液的滅菌三角燒瓶(瓶內(nèi)預(yù)先加有適當(dāng)數(shù)量的玻瑞珠)。經(jīng)充分振搖，制成1:10的均勻稀釋液。最好置振茜器中以8000r/min~10000r/min的速度處理2min~3min。B.1.1.2用1mL.滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,沿管壁慢慢注入含有9mL稻釋液的試管內(nèi)(注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稻釋液》,振搖試管，混合均勻，作成1:100的稀釋液。B.1.1.3另取一支1mL滅菌吸管，按上述操作順序，作10倍遞增稀釋，如此每遞增稀釋一次，即更換一支吸管。B.1.1.4根據(jù)魚粉衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)υ嚇游廴境潭鹊墓烙嫞x擇2個～3個適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度作兩個平Ⅲ。B.1.1.5稻釋液移入平皿后，應(yīng)及時將涼至46℃±1℃的平板計數(shù)用培養(yǎng)基(可放置46℃±1℃水浴鍋內(nèi)保溫)注入平皿約15mL,小心轉(zhuǎn)動平皿使試樣與培養(yǎng)基充分混勻。從稀釋試樣到傾注培養(yǎng)基之間，時間不能超過15min。如估計到試樣中所含微生物可能在瓊脂平板表面生長時，待瓊脂完全凝固后，可在培養(yǎng)基表面傾注涼至46℃±1℃的水瓊脂培養(yǎng)基4mL.,B.1.1.6待瓊脂凝固后，倒置平皿于30℃±1℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)72h±3h取出，計數(shù)平板內(nèi)菌落數(shù)目，菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即得每克試樣所含細菌總數(shù)。B.1.2菌落計數(shù)方法作平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀察，必要時借助于放大鏡檢查，以防遺漏。在計數(shù)出各平板菌落數(shù)后，求出同一稀釋度兩個平板菌落的平均數(shù)。B.1.3菌落計數(shù)的報告選取菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)。每一稀釋度采用兩個平板菌落的平均數(shù)，如兩個平板其中一個有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，如片狀菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘2以代表全平板菌落數(shù)。B.1.4稀釋度的選擇B.1,4.1應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之。B.1.4.2如有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30～300之間，視兩者之比如何來決定，如其比值小于2,應(yīng)報告其平均數(shù)；如大于2,則報告其中較小的數(shù)字。如所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300,則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。如所有稻釋度的平均菌落數(shù)均小于30,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)來以稀釋倍數(shù)報告之。如所有稀釋度均無菌落生長，則以小于(<)1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之。如所有稻釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分大于300或小于30時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。(規(guī)范性附錄)致病性弧菌的檢測方法D.1檢驗步驟稱取檢樣25g,加入裝有225mL堿性蛋白胨水增菌液(APW)的廣口瓶內(nèi)。固體樣品應(yīng)以均質(zhì)器8000r/min打碎，或以剪刀充分剪碎。置37℃培養(yǎng)8h～16h后，取此培養(yǎng)液10mL加入10mL雙料賊性蛋白胨水(APW)中，置37℃培養(yǎng)6h~8h。以3mm~5mm接種環(huán)取上述增菌液的表面生長物一環(huán)劃線接種TCBS瓊脂平皿兩個，置37℃培養(yǎng)20h~24h。在TCBS瓊脂上，強菌菌落為黃色或綠色菌落，光滑，稍平。D.1.3確定罪菌屬D.1.3.1用接種環(huán)挑取TCBS瓊脂平板上可疑菌落數(shù)個，進行革蘭氏染色和鏡檢?；【鷳?yīng)該為G陰性直或彎曲桿菌，有動力。D.1.3.2用接種環(huán)挑取可疑菌落數(shù)個，于無菌白色濾紙或無菌玻片上，滴加氧化酶試劑進行氧化酶反應(yīng)?；【鷳?yīng)該為氧化酶反應(yīng)陽性。D.1.3.3以接種環(huán)取氧化酶反應(yīng)陽性的培養(yǎng)物于D-甘露糖溶液中，弧菌應(yīng)該為D-甘露糖發(fā)醇反應(yīng)D.1.3.4以接種環(huán)取D-甘露糖反應(yīng)陽性的培養(yǎng)物，接種O/129試驗用培養(yǎng)基，其上加貼150xgO/129紙片，置37℃培養(yǎng)18h~24h。弧菌對O/129抑菌試驗敏感。D.1.4鑒定致病性弧菌D.1.4.1用接種環(huán)挑取上述弧菌屬定性生化反應(yīng)陽性的培養(yǎng)物，接種三糖鐵瓊脂(TSI),雙糖鐵瓊脂(KIA)、精氨散葡萄糖斜面瓊脂(AGS),T?N,肉湯和T?N,肉湯，穿刺底層并劃線斜面。上述培養(yǎng)物置37℃培養(yǎng)18h～24h。