實(shí)驗(yàn)除草劑與殺菌劑毒力測定

關(guān)于實(shí)驗(yàn)除草劑與殺菌劑毒力測定利用有害生物（靶標(biāo)生物，如昆蟲、螨類、病菌、線蟲、雜草等）對作用物的反應(yīng)評價(jià)化合物生物活性的基本方法---陳年春“農(nóng)藥生測技術(shù)”農(nóng)藥生測現(xiàn)在已發(fā)展成為是集昆蟲學(xué)、植物病理學(xué)、微生物學(xué)、植物學(xué)、雜草學(xué)、化學(xué)、生物技術(shù)、統(tǒng)計(jì)學(xué)等多學(xué)科于一體的綜合技術(shù)，是農(nóng)藥科技創(chuàng)新工程中不可或缺的關(guān)鍵技術(shù)。農(nóng)藥生測技術(shù)內(nèi)涵第2頁,共17頁，2024年2月25日，星期天生理活性物質(zhì)靶標(biāo)生物蟲、草、菌等反應(yīng)程度生物測定已成為研究作用物、靶標(biāo)生物和反應(yīng)強(qiáng)度三者關(guān)系的一項(xiàng)專門技術(shù)第3頁,共17頁，2024年2月25日，星期天殺菌劑的毒力測定第4頁,共17頁，2024年2月25日，星期天殺菌劑生物測定流程藥劑毒力測定；定性定量分析；防治效果測定；第5頁,共17頁，2024年2月25日，星期天殺菌劑室內(nèi)生物測定主要方法孢子萌芽測定法：觀察供試病菌孢子是否萌發(fā)，來判定殺菌劑毒力大小；生長速率法：將不同濃度的藥液與溶化的培養(yǎng)基混合，制成帶毒培養(yǎng)基平面，在平面上接種病原菌，以其生長速度快慢判定藥劑毒力大小。第6頁,共17頁，2024年2月25日，星期天

將不同濃度的藥液和熱的培養(yǎng)基混合，用這種含藥培養(yǎng)基培養(yǎng)病原菌，以病原菌的生長進(jìn)度的快慢來判定藥劑毒力的大小。

生長速率法原理菌餅（菌碟）含藥培養(yǎng)基生長速率法示意圖注意事項(xiàng)：應(yīng)先加藥液再加培養(yǎng)基（1:9）；對一些受熱易分解的藥劑則要待培養(yǎng)基冷卻到50度左右時(shí)再加入。第7頁,共17頁，2024年2月25日，星期天優(yōu)點(diǎn)：①操作比較簡單；②適用范圍廣，適用于乳油、水劑、可濕性粉劑等；③重復(fù)性好，只要操作認(rèn)真，均可得到可靠的結(jié)果。生長速率法的優(yōu)缺點(diǎn)缺點(diǎn)：①對供試菌種要求較嚴(yán)格，病菌要易于培養(yǎng)，生長較快且邊緣整齊、產(chǎn)孢子緩慢，而且是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要的病原菌；②對供試藥劑要求，有一定的耐熱性，遇熱不易分解。第8頁,共17頁，2024年2月25日，星期天多菌靈（carbendazim）對小麥赤霉病菌的毒力測定供試菌株：

小麥赤霉病菌（Fusariumgraminerarum）敏感菌株2021和抗性菌株JT04。2021JT04試驗(yàn)?zāi)康模赫莆丈L速率法測定殺菌劑毒力。

第9頁,共17頁，2024年2月25日，星期天供試藥劑：

98%多菌靈原藥，由江蘇龍燈化學(xué)有限公司提供。多菌靈用0.1MHCl分別配成10000μg/mL、100μg/mL母液。劑量設(shè)置：1.測定敏感菌株2021，取一定量的100μg/mL母液多菌靈母液，加入到50mLPSA中，每個處理3個重復(fù)。

2.測定多菌靈抗性菌株JT04：藥劑濃度為：

0（對照）、1.25、2.5、5、10、20、40μg/mL，取400μL10000μg/mL母液，加入到100mLPSA中，即得40μg/mL，然后梯度稀釋，每個處理3個重復(fù)。

藥劑濃度(μg/mL)0(CK)0.20.40.60.81母液體積(μL)0100200300400500第10頁,共17頁，2024年2月25日，星期天（1）制備含藥培養(yǎng)基：準(zhǔn)確取一定量的藥液加入到熱的培養(yǎng)基中，混勻，倒入滅菌的培養(yǎng)皿中，待冷凝后即為含藥培養(yǎng)基；（2）制備菌餅：用無菌的打孔器在供試菌種邊緣打下菌塊即菌餅（在無菌條件下進(jìn)行）；（3）移植菌餅：用接種針將菌餅（有菌絲的一面向上）移植到含藥培養(yǎng)基平板的中央，一個培養(yǎng)皿接一個菌餅；（4）測定菌落直徑：25℃培養(yǎng)3天，取出培養(yǎng)皿測量菌落直徑。每個菌落十字交叉測兩次直徑，取平均值。操作步驟第11頁,共17頁，2024年2月25日，星期天數(shù)據(jù)處理將抑制率換算成機(jī)率值，作為Y；將藥劑的劑量數(shù)值換算成對數(shù)值，作為X，直線回歸，求出毒力回歸方程Y＝a+bx，計(jì)算EC50。抑制率=對照菌落直徑–處理菌落直徑對照菌落直徑–菌餅直徑×100%注：菌餅直徑為5mm第12頁,共17頁，2024年2月25日，星期天抑制率機(jī)率值80.15.845255.95.148453.75.092938.74.712930.14.478519.44.1367劑量劑量對數(shù)

2.62.32501.7251.412.51.1第13頁,共17頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求藥劑濃度(μg/ml)菌落直徑（mm)IIIIII平均抑制率（%）毒力回歸方程相關(guān)性EC50(μg/ml)

多菌靈對小麥赤霉病菌2021/JT04菌絲生長的抑制效果第14頁,共17頁，2024年2月25日，星期天除草劑的毒力測定第15頁,共17頁，2024年2月25日，星期天幾個概念抑制中濃度：指抑制50%測定指標(biāo)時(shí)除草劑的濃度，需采用毒力回歸方程的方法計(jì)算；最高無影響計(jì)量：不影響作物生長發(fā)育的最高劑量，是除草劑對作物是否有影響的劑量分界線；相對毒力指數(shù)：除