【幽門螺旋桿菌疫苗研發(fā)的探究進展綜述8200字（論文）】

幽門螺旋桿菌疫苗研發(fā)的研究進展綜述目錄TOC\o"1-2"\h\u7671幽門螺旋桿菌疫苗研發(fā)的研究進展綜述 1230961.H.pylori全菌疫苗 2221712．以Urease為抗原的疫苗 2281393以Flagellum為抗原的疫苗 3252763.1H.pyloriadhesinA（HpaA） 4295593.2FlagellinA（FlaA） 4218734以毒力因子為抗原的疫苗 435734.1Cytotoxin-associatedgeneA（CagA） 4144034.2Cytotoxin-associatedgeneW（CagW） 5123484.3Cytotoxin-associatedgeneL（CagL） 5195444.4Neutrophil-activatingprotein（NAP） 6291464.5HeatShockProtein（Hsp） 6168995Outermembraneproteins（OMPs） 7176435.1OuterinflammatoryproteinA(OipA) 74385.3Lipoproteins20（Lpp20） 8234836以O(shè)utermembranevesicle（OMV）為抗原的疫苗 8147647總結(jié)和展望 9[摘要]幽門螺桿菌（Helicobacterpylori，H.pylori）是引起胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌等消化道疾病的主要致病菌，已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織（WorldHealthOrganization，WHO）列為Ⅰ類致癌因子。目前治療H.pylori主要是應(yīng)用抗生素，但隨著H.pylori耐藥性的增加，H.pylori疫苗可能成為克服H.pylori的最終解決辦法。尿素酶、毒力因子、外膜蛋白和鞭毛等成分在H.pylori感染過程中發(fā)揮著重要的作用，也成為H.pylori疫苗開發(fā)中潛在的候選抗原，以這些抗原為基礎(chǔ)設(shè)計的疫苗在動物模型上取得了階段性研究成果。本文對H.pylori疫苗的研究現(xiàn)狀進行綜述，為本領(lǐng)域研究提供參考。[關(guān)鍵詞]幽門螺桿菌；尿素酶；粘附因子；毒力因子；鞭毛；外膜蛋白；疫苗ResearchprogressofHelicobacterpylorivaccine全球有超過50%的人感染了幽門螺桿菌（Helicobacterpylori,H.pylori），在一些社會經(jīng)濟不發(fā)達的地區(qū)，感染率已超過總?cè)藬?shù)的一半ADDINNE.Ref.{3EDD8628-D001-4822-8878-5DEAFB0433DA}[1,2]。胃內(nèi)局部PH值可達到0.9-1.8，但H.pylori依然可存活、定殖和繁殖。主要原因如下：H.pylori產(chǎn)生尿素酶（Urease），分解尿素產(chǎn)生氨氣能夠中和胃的酸性環(huán)境；H.pylori借助鞭毛在胃中自由游走逃避宿主的免疫攻擊,或者阻礙了先天性免疫功能和適應(yīng)性免疫應(yīng)答ADDINNE.Ref.{1DD2C763-1358-4962-B3E6-70DE44E54EBB}[3,4]NE.Cms_Insert；另外，細胞毒素相關(guān)蛋白A(cytotoxin-associatedgeneA,CagA)、空泡毒素A(vacuolationassociatedgeneA,VacA)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-glutamyltranspeptidase，GGT）還可以誘導(dǎo)樹突狀細胞發(fā)生免疫耐受,抑制T細胞的增殖和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致細胞凋亡，使H.pylori免受T細胞的攻擊ADDINNE.Ref.{94BBC543-F01A-4386-B34C-DCA9B3662B3A}[5]。H.pylori感染導(dǎo)致人體胃消化不良，患萎縮性胃炎、腸化生、消化性潰瘍，甚至胃癌等疾病ADDINNE.Ref.{A26EBA53-0044-44CB-8D7F-32EC9FC5AF14}[6,7]。除了胃內(nèi)消化性疾病之外，H.pylori還會導(dǎo)致一些胃外疾病，比如神經(jīng)疾病阿爾茨海默癥ADDINNE.Ref.{8C45201D-84AD-4F8E-A865-C70256D941BF}[8]、肝膽疾病酒精性脂肪肝ADDINNE.Ref.{B21A0DD8-8B08-494B-99F0-1BCDB4B19394}[9]等。因此，根除H.pylori對于治療胃部疾病和其他與H.pylori相關(guān)疾病十分重要。目前臨床治療中H.pylori抗生素耐藥性不斷提高，甲硝唑、克拉霉素的耐藥性在亞洲高達99.5%、85.5%ADDINNE.Ref.{1AEB3BB1-F7F4-4396-82E2-1DFF71C917AA}[10,11]。另一方面，抗生素使用易發(fā)生惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等不良反應(yīng)，因此尋找具有預(yù)防和治療功能的H.pylori疫苗具有重要意義。疫苗是一種成本低效益高的方法。預(yù)防性疫苗可在兒童出生后的幾年注射接種預(yù)防性疫苗，預(yù)防H.pylori感染。治療性疫苗可以在任何時期接種，通過增強機體的免疫應(yīng)答消除H.pylori，預(yù)防胃癌等疾病的發(fā)生。但至今尚無安全、有效、成熟的H.pylori疫苗上市。1.H.pylori全菌疫苗H.pylori全菌抗原可通過超聲破碎或福爾馬林滅活菌體獲得。研究發(fā)現(xiàn)，用全菌疫苗免疫接種小鼠可以引起高效的局部黏膜反應(yīng)，降低H.pylori在胃內(nèi)的定殖。SuganyaADDINNE.Ref.{A9567C96-2A17-40B7-B9B6-24ACF410DC8D}[12]等人以標(biāo)準(zhǔn)菌株H.pylori-SS1和26695全菌疫苗作為抗原，磷酸鋁（AlPO4）作為佐劑免疫小鼠，發(fā)現(xiàn)隨著時間的延長，抗體顯示出更高的滴度值。HolmgrenADDINNE.Ref.{CA8CA1CD-2CE5-454D-AC1B-E1D876EA0584}[13]等人用新開發(fā)的佐劑多重突變霍亂毒素（choleratoxin,CT）和福爾馬林滅活的H.pylori全菌疫苗接種小鼠，發(fā)現(xiàn)小鼠胃內(nèi)H.pylori定植數(shù)量減少，血清IgG和黏膜IgA升高，IFN-γ和IL-17顯著升高。雖然全菌疫苗能顯著引起黏膜免疫和體液免疫，但是其抗原成分復(fù)雜，容易導(dǎo)致免疫性疾病，限制了其大范圍應(yīng)用。2．以Urease為抗原的疫苗pylori的尿素酶（Urease）曾被認為是研究H.pylori疫苗的最佳抗原，因其氨基酸序列相對保守，廣泛分布在H.pylori表面，還能分解胃內(nèi)尿素產(chǎn)生二氧化碳和氨氣，中和胃的酸性環(huán)境，有利于H.pylori定植。有研究者將尿素酶與H.pylori的其他抗原分子結(jié)合在一起制備成混合抗原免疫小鼠，發(fā)現(xiàn)免疫效率高于單個組分。ZhongADDINNE.Ref.{C831B1F4-B82E-4410-B09D-85F06BDE7112}[14]等人設(shè)計了一種多價疫苗，抗原包括UreA、UreB和中性粒細胞激活蛋白（neutrophil-activatingprotein,NAP），與佐劑大腸桿菌雙突變不耐熱毒素（doublemutantheat-labiletoxin,dmLT）混合后免疫小鼠，免疫組小鼠脾臟和腸系膜淋巴結(jié)CD4+IL-17+T細胞比例增加，血清IgG和黏膜IgA反應(yīng)增強，H.pylori定植數(shù)量減少,且UreA-UreB-NAP預(yù)防效果更佳ADDINNE.Ref.{1C276C07-A00C-4D81-BED8-0A4D484B2E88}[15]。另一種H.pylori尿素酶疫苗是用細菌或者病毒作為載體，將其呈遞給抗原提成細胞，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。ZhouADDINNE.Ref.{5531AE07-D734-44D0-9738-E5A0093149CF}[16]等人以枯草芽孢桿菌為載體建立了H.pylori尿素酶疫苗，發(fā)現(xiàn)免疫小鼠糞便中IgA和血清IgG顯著升高，H.pylori定植量減少，表明枯草芽孢桿菌表達的UreB具有免疫原性，誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生了黏膜免疫和體液免疫。隨后，ZhouADDINNE.Ref.{468CD7AF-F117-47F1-8855-CD9C2B025E0D}[17]又將外殼蛋白CotC和佐劑霍亂毒素B亞單位（choleratoxinBsubunit，CTB）與UreB結(jié)合形成CotC-CTB-UreB疫苗，臨床實驗證實其顯著降低了H.pylori在胃內(nèi)定植的數(shù)量?？诜蛩孛敢呙缰苯咏?jīng)腸粘膜接種具有免疫學(xué)和實用價值，但是也會受到胃蛋白酶和PH的影響降低其免疫原性。TanADDINNE.Ref.{5779FAF5-6CD0-4CAA-9298-994BCF3DC71A}[18]等人開發(fā)了一種耐酸性HP55/PLGA納米顆粒保護H.pylori多價疫苗CTB-UE和新型嵌合鞭毛（chimericflagellum，CF）（以下稱為CCF），包被HP55/PLGA的多表位疫苗誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生高水平的尿素酶抗體和記憶T細胞，43%的小鼠體內(nèi)產(chǎn)生顯著的Th1/Th17免疫應(yīng)答。這些數(shù)據(jù)表明HP55/PLGA納米顆粒不僅是一種有效的免疫調(diào)節(jié)劑，還能作為一種載體增強亞單位疫苗的效力。鄒全明教授研發(fā)的H.pylori尿素酶疫苗在2015年公布了其III期臨床實驗結(jié)果，其免疫效率達到了71.8%，疫苗對H.pylori的持續(xù)保護可達3年，且并未觀察到不良反應(yīng)ADDINNE.Ref.{6AE3132B-178B-4551-BFD8-9BB62DD041B7}[19]。載體尿素酶疫苗雖然誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生免疫應(yīng)答，但是其產(chǎn)生的保護力較低；因此，選擇哪種抗原和尿素酶組成多價疫苗將免疫效率達到最優(yōu)仍需深入的研究。3以Flagellum為抗原的疫苗H.pylori的鞭毛主要由鞭毛基體、鞭毛鉤、鞭毛絲和鞭毛鞘組成，主要結(jié)構(gòu)蛋白包括FlaA、FlaB、FliD、FlgK和HpaA，在H.pylori的定植、炎癥和免疫逃逸中起重大作用。3.1H.pyloriadhesinA（HpaA）HpaA是一種保護性抗原，編碼H.pylori鞭毛鞘蛋白，參與H.pylori和人胃上皮細胞粘附過程ADDINNE.Ref.{4897718E-CAAC-47A0-87AA-09B180B17BFC}[20]。ZhangADDINNE.Ref.{5BAE4961-46A5-4806-99EF-2F7347729DAA}[21]等人構(gòu)建了一株乳酸球菌表達HpaA和Omp22，在小鼠體內(nèi)檢測到IgG抗體水平上升，激發(fā)了小鼠體液免疫，這是在乳酸球菌中同時有效表達兩種H.pylori抗原融合蛋白的首次報道。為了弄清楚乳酸球菌對HpaA的免疫作用，ZhangADDINNE.Ref.{18F09F8E-FACC-4769-8E33-D3248FEB019D}[22]等人又利用乳酸球菌單獨表達HpaA蛋白免疫BALB/c小鼠，小鼠口服疫苗后血清IgG水平升高，說明HpaA有效地傳遞到免疫部位，激發(fā)體液免疫。TobiasADDINNE.Ref.{854C31BB-4F64-4580-96F0-5A866A2079CE}[23]等人研發(fā)了一種非毒性霍亂弧菌O1作為載體提呈HpaA抗原，新開發(fā)的非毒性霍亂弧菌O1能顯著增強HpaA的表達，免疫小鼠產(chǎn)生的血清HpaA抗體應(yīng)答顯著高于同樣表達HpaA滅活的H.pylori疫苗，這種載體還有望表達H.pylori其他抗原，具有成為H.pylori候選疫苗的潛力。GuoADDINNE.Ref.{89188B67-7E02-41C7-A359-BFE5881B749B}[24]等人將HpaA和尿素酶、NAP、Hsp60連接在一起構(gòu)成多組分疫苗，不僅誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生了抗Hsp60、HpaA、NAP和尿素酶抗體，還降低其胃內(nèi)H.pylori的數(shù)量，是一種有希望對抗H.pylori感染的候選疫苗。3.2FlagellinA（FlaA）FlaA是鞭毛結(jié)構(gòu)中的主要蛋白，表達FlaA的H.pylori菌株具有較強的運動能力，誘導(dǎo)IL-8分泌，促進胃組織炎癥ADDINNE.Ref.{388896AD-4ED0-489B-9D8B-31840E773B1B}[25]。ZareiADDINNE.Ref.{D6A93705-AEB4-4D9F-95FB-AE105F36FF26}[26]等人利用IEDB和IgPred軟件鑒定出FlaA214-353的抗原部分制成疫苗免疫小鼠，在小鼠體內(nèi)檢測到了IgG1、IgG2a、IgA和IFN-γ、IL-5，另外重組FlaA蛋白具有抗原性和免疫原性，可以用于設(shè)計針對H.pylori的特異性診斷試劑盒和重組疫苗。以H.pylori的鞭毛為抗原的疫苗激活TLRs4、5的能力較差，因此我們重點是建設(shè)重組的鞭毛融合蛋白，將鞭毛融合蛋白和特定的抗原融合能強烈的激活TLR5受體并引起體液免疫應(yīng)答和細胞免疫應(yīng)答。4以毒力因子為抗原的疫苗4.1Cytotoxin-associatedgeneA（CagA）CagA是H.pylori的主要毒力因子之一，通過激活細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellularsignal-regulatedkinase,ERK)和干擾兩種主要的抑癌蛋白P53(ASPP2)、RUNX3導(dǎo)致宿主細胞發(fā)生癌變，還能作為IL-8誘導(dǎo)劑，吸引中性粒細胞到達感染部位，加重胃炎癥ADDINNE.Ref.{68F05B49-FD8B-4BCD-89E1-2E1CCBC52503}[27-29]。PaydarniaADDINNE.Ref.{AC6E02AC-F1C1-4F93-B7AE-7F3A6C9A17E1}[30]設(shè)計了一種CagA疫苗，與佐劑CpG結(jié)合混合免疫小鼠，發(fā)現(xiàn)CpG佐劑攜帶的rCagA在整個實驗過程中保持了抗原性，而且誘導(dǎo)了強烈的Th1免疫應(yīng)答，有望成為抗H.pylori感染的有效疫苗。PanADDINNE.Ref.{5DC3EA3D-B215-4E9A-8A11-9AD53BF523D0}[31]則是將CagA與Urease、HpaA串聯(lián)在一起制成多表位疫苗HUUC,然后與佐劑CTB一起口服免疫BALB/c小鼠，接種后小鼠血清IgG、胃和腸粘膜sIgA在體外中和了尿素酶活性，有效降低了小鼠H.pylori感染率。MalfertheinerADDINNE.Ref.{35038CA8-9F67-47CF-A503-B4BB471D4129}[32]等人研究了一種重組的CagA-VacA-NAP疫苗，進行隨機的I/II期臨床試驗，發(fā)現(xiàn)該疫苗并不能提供預(yù)防H.pylori感染的功能，表明該疫苗研究失敗。雖然研究者表示失敗的原因可能是選取研究對象不當(dāng)，但尚沒有定論。CagA基因并不在所有的菌株中表達，而且保守性較差，抗CagA抗體還與血管壁抗原發(fā)生交叉反應(yīng)，增加動脈粥樣硬化和中風(fēng)等危險ADDINNE.Ref.{E311EFD3-3F47-4BFE-93DC-1F00F5DCF639}[33]，這些因素影響了CagA疫苗的應(yīng)用。4.2Cytotoxin-associatedgeneW（CagW）CagW在Cag-T4SS中起著重要的作用，CagW缺失影響菌毛細胞毒素相關(guān)蛋白L（cytotoxin-associatedgeneL,CagL）、CagI和CagH的水平，而且CagW對于CagA穿過細菌膜屏障是必不可少的ADDINNE.Ref.{547BB999-5B1A-4283-AA74-C37D71C040F0}[34]。ChehelgerdiADDINNE.Ref.{04EFBBE0-3A7B-43B6-ADDA-056B7888F430}[35]等人以CagW為靶點設(shè)計了關(guān)于H.pylori的DNA疫苗，并將其包被在殼聚糖中。結(jié)果顯示無論有無殼聚糖包被，CagWDNA疫苗均可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生高滴度的血清抗體IgG，觀察到更高水平IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-12，且脾臟中CD4+和CD8+T淋巴細胞的百分比增加。這些結(jié)果表明殼聚糖CagWDNA疫苗可在小鼠模型中誘導(dǎo)更高的粘膜和體液免疫反應(yīng)，并具有抵抗H.pylori感染的保護作用

。此外，該實驗還證明了殼聚糖能夠增強DNA疫苗的穩(wěn)定性，保護其免受脫氧核糖核酸酶的水解，可作為一種佐劑增強免疫應(yīng)答，為進一步開發(fā)新型殼聚糖納米顆粒疫苗提供了參考。4.3Cytotoxin-associatedgeneL（CagL）CagL參與CagA向宿主細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運，有研究發(fā)現(xiàn)抗CagL多克隆抗體可抑制CagA蛋白的易位，因此，CagL是一種適合于H.pylori疫苗接種的候選抗原ADDINNE.Ref.{729C67B4-AFDE-42AD-93D5-D7568D6E5712}[36,37]。MohammadADDINNE.Ref.{51C5EBB2-C5D5-4697-88AF-6EBEF52E3799}[38]等人設(shè)計了乳酸球菌為載體的CagL可食用疫苗，喂食小鼠后，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了CagL抗體，檢測到了細胞因子IL-17和IFN-γ；在小鼠糞便中檢測到特異性IgA反應(yīng)，這些數(shù)據(jù)表示重組乳酸球菌CagL疫苗可作為抗H.pylori感染的食用疫苗。GhasemiADDINNE.Ref.{C7B5AE26-2E9C-4335-B199-469C57B22FEE}[39]將CagL和鞭毛鉤相關(guān)蛋白（FliD），VacA和UreB的部分抗原表位嵌合在一起，形成融合蛋白rFUVL，與三種不同的佐劑CpG寡核苷酸（CpG

motifs,CpGODN）、Addavax、CTB免疫小鼠，接種疫苗的小鼠檢測到了特異性IgG2a、IgG1和胃IgA抗體，細菌負荷量減少了約三個數(shù)量級,特別是rFUVL與佐劑CpGODN結(jié)合時，能夠引起復(fù)雜的Th1、Th2、Th17反應(yīng)。但是本研究中細菌負荷的減少是由單一免疫反應(yīng)介導(dǎo)的，還是由不同類型免疫反應(yīng)的相互作用介導(dǎo)的尚不清楚；是否可以通過加入額外的H.pylori抗原來提高免疫力尚待研究。4.4Neutrophil-activatingprotein（NAP）H.pylori-NAP是由NapA基因編碼的一種保守蛋白質(zhì)，具有刺激嗜中性粒細胞產(chǎn)生活性氧（ROS）和粘附于內(nèi)皮細胞的能力，還能誘導(dǎo)合成IL-8、MIP-1α等炎性因子加重胃粘膜的損傷ADDINNE.Ref.{590E3B57-418A-4DC9-8CB9-EA0551588FDE}[40]。PengADDINNE.Ref.{11BED18C-E068-44AF-9375-FA22414B6B96}[41]等人利用重組的乳酸球菌表達H.pylori的NapA基因，將NZ3900-NapA免疫BALB/c小鼠，不僅誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生了體液免疫應(yīng)答，還促進其產(chǎn)生極化的Th17、Th1反應(yīng)；小鼠胃中H.pylori載量降低。首次證明了NapA促進Th17和Th1細胞極化的能力，并提供了一株工程乳酸球菌，有望成為一種抗H.pylori口服疫苗候選株。GuoADDINNE.Ref.{942EBDD2-8429-4121-AB43-5420345850B3}[42]等人將NAP、UE、CagA和VacA連接到一起組成融合蛋白FVpE，在小鼠體內(nèi)，ELISA檢測到了高水平的抗Urease、CagA、VacA和NAP特異性抗體。當(dāng)FVpE疫苗和佐劑多糖（polysaccharides，PA）口服免疫小鼠時，可以誘導(dǎo)更高水平的血清IgG和IgA抗體，小鼠脾臟淋巴細胞產(chǎn)生的IL-4，IFN-γ和IL-17水平升高，胃中的H.pylori菌落數(shù)量減少。但是，H.pylori-NAP疫苗存在潛在弊端，其與神經(jīng)組織存在交叉模擬，可能與多發(fā)性硬化（MS）或者視神經(jīng)脊髓炎（NMO）患者抗AQP-4抗體相關(guān)的神經(jīng)損傷有關(guān)，限制其推廣應(yīng)用。4.5HeatShockProtein（Hsp）Hsp是一種極其保守的分子，位于H.pylori的表面，具有高度的免疫原性，參與粘附宿主細胞，還能聚集尿素酶、穩(wěn)定膜蛋白，這種作用使Hsp成為潛在疫苗的候選成分之一,用于治療癌癥和誘導(dǎo)保護性免疫ADDINNE.Ref.{F902D24A-05D3-4103-B8F0-0A9136C3D74D}[43,44]。IankovADDINNE.Ref.{15EA0E19-BECA-4B98-8D6D-13D6EDE1FC19}[45]等人建立了重組的麻疹病毒(MeaslesVirus,MV)HspA疫苗，免疫小鼠，發(fā)現(xiàn)8/9小鼠產(chǎn)生了長期抗HspA抗體應(yīng)答，而且對抗MV的保護性免疫記憶發(fā)育無任何負面影響。表明MV-HspA是一種有效的用于癌癥治療和對H.pylori的免疫預(yù)防的候選疫苗。LuoADDINNE.Ref.{725D5107-DA00-4B4D-AED9-73CBB18485B6}[46]用了一種耐酸的HP55/PLGA納米粒子（NPs）將H.pylori三種抗原Hsp、NAP和脂蛋白20（Lipoproteins20，Lpp20）包裹起來和3種不同的佐劑LPS、CpG和CF制成口服疫苗免疫小鼠,不僅誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生抗原特異性抗體反應(yīng)和Th1、Th17細胞反應(yīng)，而且其胃內(nèi)H.pylori的數(shù)量也顯著減少。雖然重組的HspAMV病毒疫苗免疫原性較好，但是其安全性值的關(guān)注；Hsp亞單位疫苗免疫原性低，放大炎癥信號的能力不夠，佐劑LPS、CpG和CF有助于增強口服H.pylori疫苗的作用，但安全性有待提高，而且口服疫苗的精準(zhǔn)機制也有待研究。5Outermembraneproteins（OMPs）H.pylori感染的第一步是粘附于胃粘膜上，其外膜蛋白OMPs被認為是細菌與上皮細胞結(jié)合的主要黏附因子。最具表征的外膜蛋白為血型抗原結(jié)合黏附素（bloodgroupantigen‐bindingadhesin,BabA/HopS）、SabA/HopP，外膜炎性蛋白A(OuterinflammatoryproteinA,OipA/HopH)、HopQ和HopZ，不僅在H.pylori定植、粘附、免疫逃避中起著重要的作用，還能聯(lián)合其他毒力因子CagA和VacA促進促炎癥細胞因子釋放ADDINNE.Ref.{348E8B01-9268-4129-80C7-8712190BF3BF}[47]。因此建立針對OMPs的疫苗具有重要意義,其產(chǎn)生的針對OMPs的抗體能使H.pylori喪失定植在胃粘膜的能力。5.1OuterinflammatoryproteinA(OipA)OipA編碼炎癥蛋白，是H.pylori感染過程中一種較強的致病因子，能夠粘附到胃粘膜上與受體發(fā)揮作用增加IL-8的分泌，引起中性粒細胞浸潤，加重胃的炎癥；還能誘導(dǎo)宿主細胞凋亡，因此建立oipA疫苗具有重要的意義ADDINNE.Ref.{343D10E4-8541-4CF2-B08B-4D1255AAE04C}[48,49]。MahboubiADDINNE.Ref.{9BF95C75-F518-46F6-9B0E-BF75FB52AFED}[50]建立了關(guān)于OipA的亞單位疫苗，然后和佐劑蜂膠一起免疫小鼠，3周后進行檢測發(fā)現(xiàn)接種OipA疫苗的小鼠胃內(nèi)H.pylori數(shù)量減少，胃炎癥減弱，,表明OipA疫苗可作為一種適合口服H.pylori疫苗，但是蜂膠沒有起到佐劑的作用。NezafatADDINNE.Ref.{260ACCFE-EB19-4186-B4F0-FA9B7B25351F}[51]通過免疫學(xué)信息方法設(shè)計OipA的疫苗。他篩選了兩種假設(shè)的保護性抗原H.pylori0487107-170、206-275和H.pylori090676-117、297-333、393-426，和佐劑不耐熱腸毒素IIcB（labileenterotoxinIIcB，LTIIcB）、軟骨寡聚基質(zhì)蛋白（

cartilageoligomericmatrixprotein

，COMP）、OipA保護抗原、C端M細胞配體肽組成OipA候選疫苗，通過計算分析得到該疫苗會引起粘膜免疫和Th1、Th2、Th17混合免疫反應(yīng)，但是具體效果有待研究。5.2Bloodgroupantigen‐bindingadhesin（BabA）BabA是H.pylori首次被鑒定黏附分子，能選擇性地粘附于胃上皮細胞巖藻糖基的Lewisb(Leb)ADDINNE.Ref.{0B38F5FF-6B34-4682-BD45-19F1490B582A}[52]。BabA與Leb的結(jié)合后又通過增加CagA的易位加重胃炎癥反應(yīng)ADDINNE.Ref.{50BB7482-DD6D-4975-BBF0-556E7C8E26B3}[53]。有研究證明重組BabA在H.pylori感染的受試者中具有刺激體液和細胞免疫應(yīng)答的作用，因此也BabA也被認為是H.pylori疫苗候選者抗原之一ADDINNE.Ref.{C6E49F4C-8032-44F7-89E4-D48768386B53}[54]。XueADDINNE.Ref.{C30B2510-A577-4BE4-8122-ED5C5F73BEDF}[55]設(shè)計了一種關(guān)于BabA的多價DNA疫苗。BabA-CagA-VacA3種抗原結(jié)合在一起免疫小鼠。ELISA檢測到小鼠血清IgG升高，特別是IgG2a；TNF-α、IL-4、IL-10水平升高，但IL-2水平降低，表明BabA-VacA-CagADNA疫苗誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生了Th1、Th2的混合免疫應(yīng)答。對DNA疫苗免疫的小鼠淋巴細胞進行檢測發(fā)現(xiàn)CD3+、CD4+、CD8+T細胞亞群比例均升高，體外誘導(dǎo)的CD3+T細胞可抑制人胃癌細胞的生長，體內(nèi)注射CD3+T細胞可抑制胃癌異種移植物的生長，H.pylori疫苗活化的CD3+T細胞對晚期胃癌具有潛在的治療價值。5.3Lipoproteins20（Lpp20）Lpp20是H.pylori的一種高度保守的外膜脂蛋白,早期研究證明將抗Lpp20抗體輸入感染H.pylori小鼠體內(nèi)可以減少細菌定植,而且Lpp20的CD4+T細胞表位(Lpp2058-72、Lpp2083-97）可以刺激小鼠產(chǎn)生Th1型細胞因子。LiADDINNE.Ref.{2D46E157-C7F5-4519-A6B3-80ED1FA44AF8}[56]等人利用RANKPEP、MOE和DNAstar軟件對CTB和LPP203個理論表位（Lpp2058-72、Lpp2083-97、Lpp20108-119）最佳組合在一起進行分析，構(gòu)建CTB-Lpp20融合表位疫苗腹腔免疫小鼠，結(jié)果顯示CTB-Lpp20誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生更多的IFN-γ和IL-17，還產(chǎn)生了特異性的IgG和IgA。SunADDINNE.Ref.{86D48EDB-0960-4DA3-B1DD-A1527454D1DF}[57]等人則是構(gòu)建了一株攜帶H.pyloriLpp20基因的乳酸桿菌，動物實驗表明，經(jīng)口接種該工程菌能顯著提高BALB/c小鼠血清Lpp20特異性IgG抗體水平。然而H.pylori菌株的OMPs高度易變限制了針對這些成分中任何一種的疫苗有效性。因此，尋找不易發(fā)生遺傳變化的OMPs或?qū)MPs與CagA、VacA等抗原重組以獲得更高的免疫保護率是OMPs作為免疫抗原的研究方向。6以O(shè)utermembranevesicle（OMV）為抗原的疫苗OMV是所有革蘭性陰性細菌的正常生長過程中脫落形成的，參與細菌的發(fā)病機制、細菌細胞通訊和生物膜形成，而且具有高度的致炎性，攜帶一系列細菌蛋白和免疫原性表位，所以也被投入到新型疫苗的開發(fā)中ADDINNE.Ref.{A714FEB8-2EDB-4ADC-B69D-4A1F327D9E55}[58,59]。LiuADDINNE.Ref.{CA0071D7-9714-45AF-ADC6-BD668D8B6E0A}[60]等人從H.pylori7.13分離出OMV作為免疫原灌胃免疫小鼠，數(shù)據(jù)表明OMVs口服免疫小鼠可以引起強烈的體液免疫應(yīng)答和黏膜免疫反應(yīng)，而且主要誘導(dǎo)的是偏Th2免疫應(yīng)答，能夠顯著降低H.pylori定植。這些數(shù)據(jù)證明OMVs作為新的候選抗原在疫苗設(shè)計中對控制H.pylori感染具有重要價值。目前對于H.pyloriOMV疫苗的研究比較少，OMV在細菌中的發(fā)病機制還未得到充分研究，成功研發(fā)H.pyloriOMV疫苗還有很長的一段路要走。7總結(jié)和展望預(yù)防及根除H.pylori對降低胃炎、胃癌發(fā)病率和減輕公共衛(wèi)生資源負擔(dān)有著重大意義。分析表明，以抗原分子為靶點的重組疫苗逐漸替代全菌疫苗。我們對近五年研究的疫苗進行總結(jié)，雖然這些疫苗在小鼠模型中獲得了良好的免疫保護性和安全性，但僅有少數(shù)疫苗進入臨床試驗，目前也沒有疫苗上市。主要原因可能是以下幾點：(1)佐劑的安全性有待提高；（2）H.pylori的致病機制和逃避宿主免疫攻擊的機制并未完全說明；（3）未找到抗原最佳組合，遞送系統(tǒng)還存在一定的問題；（4）雖然在小鼠模型上取得令人滿意的效果，但轉(zhuǎn)化到臨床試驗結(jié)果卻不盡如人意。未來H.pylori研發(fā)將盡可能以解決上述存在的問題為主要方向，開發(fā)高效而副作用小或者沒有副作用的幽門螺桿菌預(yù)防性或治療性疫苗仍然任重而道遠。NE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertADDINNE.Bib參考文獻[1]HirukawaS,SagaraH,KanetoS,etal.CharacterizationofmorphologicalconversionofHelicobacterpyloriunderanaerobicconditions[J].MicrobiolImmunol.2018,62(4):221-228.[2]ChristopheB,AnthonyA.EpidemiologyofHelicobacterpyloriinfection[J].Helicobacter.2017,22.[3]GuH.RoleofFlagellainthePathogenesisofHelicobacterpylori[J].CurrMicrobiol.2017,74(7):863-869.[4]KimJH,NamgungB,JeonYJ,etal.Helicobacterpyloriflagellin:TLR5evasionandfusion-basedconversionintoaTLR5agonist[J].BiochemBiophysResCommun.2018,505(3):872-878.[5]RicciV,GiannouliM,RomanoM,etal.Helicobacterpylorigamma-glutamyltranspeptidaseanditspathogenicrole[J].WorldJGastroenterol.2014,20(3):630-638.[6]YeoSH,YangCH.[PepticUlcerDiseaseAssociatedwithHelicobacterpyloriInfection][J].KoreanJGastroenterol.2016,67(6):289-299.[7]SunaN,EtikD,OcalS,etal.Theeffectofhelicobacterpylorieradicationonatrophicgastritisandintestinalmetaplasia:aretrospectivesinglecenterresearch[J].ActaGastroenterolBelg.2020,83(3):381-384.[8]ZendehdelA,RohamM.RoleofHelicobacterpyloriinfectioninthemanifestationofoldage-relateddiseases[J].MolGenetGenomicMed.2020,8(4):e1157.[9]TangDM,KumarS.TheAssociationBetweenHelicobacterpyloriInfectionandNonalcoholicFattyLiverDisease[J].CurrGastroenterolRep.2017,19(2):5.[10]O'ConnorA,LiouJM,GisbertJP,etal.Review:TreatmentofHelicobacterpyloriInfection2019[J].Helicobacter.2019,24Suppl1:e12640.[11]HuY,ZhangM,LuB,etal.HelicobacterpyloriandAntibioticResistance,AContinuingandIntractableProblem[J].Helicobacter.2016,21(5):349-363.[12]SuganyaK,PremKA,SekarB,etal.ProtectionofmiceagainstgastriccolonizationofHelicobacterpyloribytherapeuticimmunizationwithsystemicwholecellinactivatedvaccines[J].Biologicals.2017,45:39-46.[13]HolmgrenJ,NordqvistS,BlomquistM,etal.PreclinicalimmunogenicityandprotectiveefficacyofanoralHelicobacterpyloriinactivatedwholecellvaccineandmultiplemutantcholeratoxin:Anovelandnon-toxicmucosaladjuvant[J].Vaccine.2018,36(41):6223-6230.[14]ZhongY,ChenJ,LiuY,etal.OralimmunizationofBALB/cmicewithrecombinantHelicobacterpyloriantigensanddoublemutantheat-labiletoxin(dmLT)inducesprophylacticprotectiveimmunityagainstH.pyloriinfection[J].MicrobPathog.2020,145:104229.[15]ChenJ,ZhongY,LiuY,etal.Parenteralimmunizationwithacyclicguanosinemonophosphate-adenosinemonophosphate(cGAMP)adjuvantedH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