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22TechnicalcodeofpracticefordiagnosisandintegratedmanagenmentoftomatolateblightI本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定喆、屈亞飛、張丹、孫西琳、馬馨悅、龔镕烈、王1番茄晚疫病診斷與防治技術(shù)規(guī)程GB/T8321(所有部分)農(nóng)藥合理使DB22/T3495—2023露地辣椒疫病診斷與防治技術(shù)3.1由致病疫霉菌[Phytophthorainfestans(Mont.)deBary]侵染3.2聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)polymerasechainreacti4診斷與防治流程2整個生育期均可發(fā)病,主要危害成株期的葉、莖和果實。具35.2.1.1徒手制片a)取潔凈的載玻片,在中間滴一滴清水;5.2.1.2鏡檢5.2.2.1病原菌分離培養(yǎng)5.2.2.1.1在超凈工作臺上,將采集的病葉浸于75%酒精中,表面消毒30s,再用3%菌2min~3min,用無菌水漂洗3次,吸水紙吸干水后將5.2.2.1.2取4小塊病葉置于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基上,在25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d~5d,待菌絲形成后,切取單根菌絲頂端移至新的PDA培養(yǎng)基上純化培養(yǎng)。純化以病菌基因組DNA為模板,采用通用引物ITS4/ITS5(ITS4:5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’ 行。經(jīng)檢測得到ITS序列長度為750bp~760bp。檢測結(jié)果5.2.2.4序列比對定為番茄致病疫霉菌,其ITS序列長度為754bp。詳4對土壤采用生石灰消毒,用量80kg/667m2~100kg白天溫度控制在25℃~28℃,夜間溫度保持在13℃~18℃,地溫不低于13℃。其點燃,插掛于大棚內(nèi)適當(dāng)位置,熄滅明火發(fā)煙,封棚一夜,次日放煙。每季最多用藥次數(shù)3次。弱5678C.1.2.3在凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行電泳結(jié)果觀察,判斷是否為預(yù)擴(kuò)增長度的條帶,無非特異性條帶,且濃凝膠成像檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,經(jīng)檢測得到病原菌ITS序列長度為750bp~760bp。9將PCR產(chǎn)物純化后測序,測試結(jié)果顯示番茄晚疫病疫霉菌ITS序列片段長度為1AACCGTTTCAACCCAATAGTACTTGGCGGCATTTTAAACCACTGTGGGGAACGCTGCGAAAGTGAGTCATAACGCATATTAAACTTGGCTACTAAACTGTACTTCTCTTTATGGAGAAATATGGACTGGTATCCATTTGG123456789農(nóng)藥管理b)有農(nóng)藥登
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