T-YNZYC 0108-2023 綠色藥材 烏天麻種植用蜜環(huán)菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

CCS65.020B00/09T/YNZYC云南省中藥材種植養(yǎng)殖行業(yè)協(xié)會團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)GreenMedicinalMaterialsTechniqueRegulationsofClostridiumProductiononT/YNZYC0108-2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由云南省中藥材種植養(yǎng)殖行業(yè)協(xié)會提出并歸口。本文件起草單位：昭通學(xué)院、昆明理工大學(xué)、云南省中藥材種植養(yǎng)殖行業(yè)協(xié)會、云南森浩菌業(yè)有限責(zé)任公司、昭通市天麻研究院。本文件主要起草人：楊順強、程立君、崔秀明、楊野、蘇豹、陳曉虹、申開澤、唐鵬、何海艷、楊成翠、韓多、張永至、段明政、李世波、繆家云。1T/YNZYC0108-2023綠色藥材烏天麻種植用蜜環(huán)菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了適用于昭通烏天麻種植的蜜環(huán)菌的技術(shù)要求、生產(chǎn)規(guī)范、標(biāo)簽、包裝、運輸和貯存。本文件適用于昭通烏天麻種植用蜜環(huán)菌的綠色規(guī)范化生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4789.28食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求GB4806.1食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品接觸材料及制品通用安全要求GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T191包裝儲運圖示標(biāo)志GB/T6543運輸包裝用單瓦楞紙箱和雙瓦楞紙箱GB/T12728食用菌術(shù)語GB/T41220食品包裝用復(fù)合塑料蓋膜NY/T1935食用菌栽培基質(zhì)質(zhì)量安全要求NY/T2375食用菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1烏天麻蘭科天麻屬植物GastrodiaelataBl.f.glaucaS.Chow，其花葶、鱗片、花均呈灰烏色；塊莖多呈寬卵形、卵形、橢圓形；含水量60%～70%。3.2蜜環(huán)菌保證天麻正常生長的共生真菌，傘菌目小皮傘科蜜環(huán)菌屬的優(yōu)良蜜環(huán)菌Armillariellamellea(Vahl.exfr.)Karst。3.3鎖狀聯(lián)合為雙核細(xì)胞形成分裂產(chǎn)生雙核菌絲體的一種特有形式，常發(fā)生在菌絲頂端，開始時在細(xì)胞上產(chǎn)生突起，并向下彎曲，與下部細(xì)胞連接，形如鎖狀。鎖狀聯(lián)合是雙核菌絲的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，凡是產(chǎn)生鎖狀聯(lián)合的菌絲均可斷定為雙核菌絲。形成鎖狀聯(lián)合的過程保證了雙核菌絲在進(jìn)行細(xì)胞分裂時，每節(jié)（每個細(xì)胞）都能含有兩個異質(zhì)（遺傳型不同）的核，為進(jìn)行有性生殖、通過核配形成擔(dān)子打下基礎(chǔ)。2T/YNZYC0108-20234技術(shù)要求4.1菌種質(zhì)量要求4.1.1母種應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1蜜環(huán)菌母種的質(zhì)量要求硅膠塞或棉塞，干燥、潔凈，松緊適度，能滿培養(yǎng)基外部有菌絲扭結(jié)形成的棕紅色菌索，無有無4.1.2原種應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2蜜環(huán)菌原種的質(zhì)量要求無色、瓶口直徑＜4cm；容器蓋使用棉塞或無棉塑料塞；容培養(yǎng)基外部有菌絲扭結(jié)形成的棕紅色菌索，培養(yǎng)基內(nèi)有白色3T/YNZYC0108-2023表2蜜環(huán)菌原種的質(zhì)量要求（續(xù)）無無微生物學(xué)有無4.1.3栽培種應(yīng)符合表3的規(guī)定。表3蜜環(huán)菌原種的質(zhì)量要求容器使用不小于14cm×28cm塑料袋，中間打一通氣孔，無無有無4.2培育場地布局與設(shè)施設(shè)備4.2.1廠房布局與建造應(yīng)根據(jù)場地特點和生產(chǎn)要求合理布局，生產(chǎn)區(qū)與原料庫、成品庫、生活區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開。生產(chǎn)區(qū)具有獨立隔離的攤曬場、配料分裝室、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、貯存室、菌種檢驗室等，并合理安排布局，滿足蜜環(huán)菌不同生長階段對環(huán)境條件的需求。人流與物流分開、有菌區(qū)與無菌區(qū)隔離。4T/YNZYC0108-2023攤曬場應(yīng)地面平整，無遮擋物，遠(yuǎn)離火源。配料分裝室應(yīng)空間充足，確保水電方便。滅菌室應(yīng)確保水電安裝合理，排期氣通暢，進(jìn)出料方便。冷卻室應(yīng)潔凈防塵，易散熱。接種室應(yīng)設(shè)置緩沖間，配備換氣設(shè)備，室內(nèi)壁和屋頂光滑，并經(jīng)常清洗消毒。4.2.2設(shè)施設(shè)備生產(chǎn)各環(huán)節(jié)的設(shè)施規(guī)模要配套。冷卻室、接種室、培養(yǎng)室和貯存室都要有調(diào)溫設(shè)施。應(yīng)配備攪拌機、裝瓶（袋）機、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、磅秤、天平、調(diào)溫設(shè)備、除濕機、培養(yǎng)架、恒溫箱、冰箱、顯微鏡等及常規(guī)用具。高壓滅菌及計量設(shè)備應(yīng)每年通過有關(guān)部門安全檢驗。4.3基本生產(chǎn)工藝4.3.1栽培基質(zhì)人工配制用于為各級蜜環(huán)菌菌種提供營養(yǎng)要素的的培養(yǎng)原料。栽培基質(zhì)所用原輔料應(yīng)符合NY/T1935的規(guī)定。用水應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。化學(xué)添加劑如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等應(yīng)至少為化學(xué)純。各級菌種培養(yǎng)推薦的栽培基質(zhì)配方級基本配制方法見表4。表4蜜環(huán)菌菌種栽培基質(zhì)推薦配方4.3.2基本工藝流程基本工藝流程為：栽培基質(zhì)制備（配制、分裝、滅菌、冷卻）→接種→培養(yǎng)（檢查）→成品。4.3.3母種的生產(chǎn)生產(chǎn)時間：每年10月至11月生產(chǎn)，一般在原種生產(chǎn)前1~2個月。栽培基質(zhì)制備：參照表1推薦配方進(jìn)行配制，可適度增減；基質(zhì)裝入玻璃試管內(nèi)，每只試管的分裝量為試管長度的1/4至2/3，塞上棉塞或硅膠塞；高壓蒸汽滅菌30min（0.12MPa～0.15MPa，121℃~122℃),滅菌結(jié)束后趁熱擺放斜面，斜面的長度為試管長度的1/3至1/2，冷卻備用。接種：采用無菌操作法，在超凈工作臺上或接種箱內(nèi)，用接菌鏟挑取0.5cm大小的純菌種，轉(zhuǎn)接于試管斜面培養(yǎng)基上。培養(yǎng)（檢查）：接種后，放置在18℃~20℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌絲長滿培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)過程中及時剔出菌絲生長緩慢，稀疏、不勻、發(fā)黑、污染者。母種轉(zhuǎn)管次數(shù)控制在5次以內(nèi)。4.3.4原種的生產(chǎn)生產(chǎn)時間：每年12月至次年1月生產(chǎn)，一般在栽培種生產(chǎn)前2~3個月。5T/YNZYC0108-2023栽培基質(zhì)制備：參照表1推薦配方進(jìn)行配制，可適度增減；基質(zhì)裝入瓶內(nèi)至瓶肩處，中間打一通氣孔，蓋塞；高壓蒸汽滅菌90min（0.12MPa～0.15MPa，121℃~125℃),冷卻后備用。接種：采用無菌操作法，在超凈工作臺上或接種箱內(nèi)，挑取直徑1.5cm～3.0cm的優(yōu)質(zhì)母種塊（連同栽培基質(zhì)），移植接種于原種培養(yǎng)基上端中央，隨即蓋塞或扎口。培養(yǎng)（檢查）：接種后，放置在18℃~20℃的恒溫培養(yǎng)室中培養(yǎng)30d～60d。培養(yǎng)過程中及時剔出菌絲長速慢，稀疏、不勻、發(fā)黑、污染者。4.3.5栽培種的生產(chǎn)生產(chǎn)時間：每年2月至4月，一般在生產(chǎn)用前2～3個月。栽培基質(zhì)制備：參照表1推薦配方進(jìn)行配制，可適度增減；分裝至瓶肩處或距離袋口為5cm左右，蓋塞；高壓蒸汽滅菌120min（0.12MPa～0.15MPa，121℃~125℃),冷卻后備用。接種：采用無菌操作法，在無菌室內(nèi)，挑取直徑3.0cm～4.0cm左右的優(yōu)質(zhì)原種塊（連同栽培基質(zhì)），移植接種于原種栽培基質(zhì)上端中央，隨即蓋塞或扎口。培養(yǎng)（檢查）：接種后，放置在18℃~20℃的恒溫培養(yǎng)室中培養(yǎng)60d～75d，培養(yǎng)過程中及時剔出菌絲長速慢，稀疏、不勻、發(fā)黑、污染者。5質(zhì)量檢驗5.1組批同一栽培基質(zhì)配方、同--天接種、同一培養(yǎng)條件和質(zhì)量基本一致的符合規(guī)定數(shù)量的菌種為一批。每批次數(shù)量母種≥50支、原種≥200瓶（袋）,栽培種≥2000瓶（袋）。5.2抽樣方法從每一批中隨機抽取樣品，母種、原種、栽培種的抽樣量分別為該批菌種量的10%、5%、1%。但每批抽樣數(shù)量不得少于10支（瓶、袋）；超過100支（瓶、袋）的，可進(jìn)行二級抽樣，具體方法為：先按照該批菌種量的10%、5%、1%分成一級抽樣單位，再把抽中的一級抽樣單位按照菌種量的10%、5%、1%分成若干更小的二級抽樣單位進(jìn)行檢驗。5.3感官檢驗按表5相應(yīng)項目依次進(jìn)行感官檢驗。表5感官要求檢驗方法每支母種接（4～6）錄每瓶原種接（4～6）6T/YNZYC0108-2023表5感官要求檢驗方法（續(xù)）檢驗結(jié)果與判定干燥、潔凈，松緊適度，能滿足透氣和濾培養(yǎng)基上表面距瓶為試管總體積的二分之一至菌絲扭結(jié)形成菌索，菌索長滿培養(yǎng)基，培養(yǎng)基外部菌索棕紅色，培養(yǎng)基內(nèi)菌索白色，菌索生長均勻無老化，菌絲和幼嫩菌索在陰暗處發(fā)出綠白外觀肉眼有蜜環(huán)菌菌種特殊的氣味，無酸、臭、霉5.4微生物學(xué)檢驗5.4.1形貌觀察原種菌絲生長狀態(tài)用放大倍數(shù)不低于10×40倍的光學(xué)顯微鏡對培養(yǎng)物的水封片進(jìn)行觀察，每一檢樣應(yīng)觀察不少于50個視野。5.4.2細(xì)菌檢驗取少量疑有細(xì)菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接入GB4789.28規(guī)定的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中，25℃~28℃振蕩培養(yǎng)1~2天，觀察培養(yǎng)液是否混濁。培養(yǎng)液混濁，為有細(xì)菌污染；培養(yǎng)液澄清，為無細(xì)菌污染。5.4.3霉菌檢驗取少量疑有霉菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接種于表1的母種培養(yǎng)基上，25℃~28℃培養(yǎng)3天~5天，出現(xiàn)非蜜環(huán)菌菌絲形態(tài)菌落的，或有異味者為霉菌污染物，必要時進(jìn)行水封片鏡檢。5.4.4檢驗結(jié)果與判定微生物學(xué)檢驗要求無雜菌。5.5留樣要求各級菌種要留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)每個批號母種3~5支，原種和栽培種5~7瓶（袋），于4~6℃下貯存，母種150天，原種120天，栽培種180天。T/YNZYC0108-20236入庫、記錄、標(biāo)簽、包裝、運輸和貯存6.1入庫與記錄完成培養(yǎng)的菌種及時登記入庫。菌種生產(chǎn)各環(huán)節(jié)應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)記錄。6.2標(biāo)簽6.2.1每支(瓶、袋)菌種應(yīng)有清晰注明以下要素的標(biāo)簽：a)產(chǎn)品名稱；b)品種名稱；c)生產(chǎn)單位；d)接種日期；e)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。6.2.2每箱菌種應(yīng)有清晰注明以下要素的包裝標(biāo)簽：a)產(chǎn)品名稱；b)品種名稱；c)廠名、廠址、聯(lián)系電話；d)出廠日期；e)保質(zhì)期、貯存條件；f)數(shù)量；g)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。6.2.3包裝儲運圖示標(biāo)志還應(yīng)包括：a)小心輕放標(biāo)志；b)防水、防潮、防凍標(biāo)志；c)防曬、防高溫標(biāo)志；d)防止倒置標(biāo)志；e)防止重壓標(biāo)志等。6.3包裝6.3.1母種外包裝采用木盒或有足夠強度的紙材制做的紙箱，內(nèi)部用棉花、碎紙、報紙等具有緩沖作用的輕質(zhì)材料填滿。原種、栽培種外包裝采用有足夠強度的紙材制做的紙箱，菌種間用碎紙、報紙等具有緩沖作用的輕質(zhì)材料填滿。包裝箱內(nèi)應(yīng)附上使用說明。包裝應(yīng)嚴(yán)密、整齊、無破損。6.3.2產(chǎn)品內(nèi)包裝材料的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合GB4806.1的要求。產(chǎn)品運輸用外包裝用瓦楞紙箱應(yīng)符合GB/T6543的規(guī)定，外包裝箱內(nèi)不應(yīng)使用過度的隔板；包裝應(yīng)封口牢固，確保箱內(nèi)產(chǎn)品不受損傷。產(chǎn)品外包裝箱圖示標(biāo)志應(yīng)符合GB/T191的規(guī)定。6.4運輸6.4.1運輸