2018-2019學(xué)年人教版選修1-專題2-第5課時(shí)-微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(二)-學(xué)案

第5課時(shí)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(二)[學(xué)習(xí)導(dǎo)航]1.通過閱讀教材P16～17“(一)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基”，掌握配制培養(yǎng)基的步驟和倒平板操作的過程。2.結(jié)合教材P18～19“(二)純化大腸桿菌”，理解并掌握利用平板劃線法和稀釋涂布平板法來純化微生物的方法。[重難點(diǎn)擊]1.掌握制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法。2.學(xué)會(huì)用平板劃線法和稀釋涂布平板法純化微生物。一、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基是細(xì)菌培養(yǎng)中常用的一種培養(yǎng)基，大腸桿菌的純化就是用的該培養(yǎng)基。1.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的成分及各成分提供的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)牛肉膏5.0g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10.0g碳源、氮源和維生素NaCl5.0g無機(jī)鹽蒸餾水定容至1000mL氫元素、氧元素2.制備步驟(1)培養(yǎng)基的配制計(jì)算：根據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方的比例，計(jì)算配制100mL培養(yǎng)基時(shí)各成分的用量↓稱量eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(0.5g牛肉膏：比較黏稠，用稱量紙稱取,1g蛋白胨：易吸潮，要迅速稱取牛肉膏也是,0.5gNaCl,2g瓊脂))↓溶化eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(牛肉膏和稱量紙＋水,↓加熱溶化后取出稱量紙,加蛋白胨和NaCl,↓微火加熱、不斷攪拌,溶解后加瓊脂需不斷用玻棒攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂,↓,熔化后，補(bǔ)加蒸餾水至100mL))↓調(diào)節(jié)pH：1moL的NaOH、pH試紙，將pH調(diào)為7.4～7.6↓分裝：趁熱分裝到潔凈錐形瓶中↓加棉塞：用棉花不用脫脂棉，脫脂棉吸水↓包扎：外包牛皮紙，且掛標(biāo)簽(2)滅菌eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(①培養(yǎng)基：高壓蒸汽滅菌,②培養(yǎng)皿：干熱滅菌))(3)倒平板①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。③用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置。1.填表比較溶化時(shí)兩次使用玻棒攪拌的目的操作攪拌的目的往燒杯中加入蛋白胨和氯化鈉后用玻棒攪拌促使蛋白胨和氯化鈉溶解加入瓊脂，加熱使其熔化的過程中使用玻棒攪拌防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂2.倒平板時(shí)的注意事項(xiàng)(1)培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻至50℃左右時(shí)，才能倒平板的原因是什么？你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？答案瓊脂是一種多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板時(shí)高于50℃則會(huì)燙手，低于50℃時(shí)若不及時(shí)操作，瓊脂會(huì)凝固?？梢杂檬钟|摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。(2)分析下圖，回答①、②問題：①為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答案通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。②從防止雜菌污染的角度思考，平板冷凝后將平板倒置的原因是什么？答案平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。(3)怎樣判斷制備的培養(yǎng)基是否合格、成功，是否受到污染？答案未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫一段時(shí)間后，如果無菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基制備成功、合格，未受到污染。1.某學(xué)校開展大腸桿菌培養(yǎng)活動(dòng)，首先對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清掃和消毒處理，然后準(zhǔn)備各種原料和用具。請(qǐng)回答下列問題：(1)對(duì)買回來的菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，首先制備試管培養(yǎng)基，寫出制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基所需的原料：______________________________________________________________。(2)微生物在生長(zhǎng)過程中對(duì)各種成分需求量不同，配制培養(yǎng)基時(shí)各成分要有合適的________。在燒杯中加入瓊脂后要不停________，防止______________________。(3)將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，加棉塞后若干支試管一捆，包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入____________中滅菌。滅菌完畢后拔掉電源，待壓力表的壓力自然降到0時(shí)，將試管取出。如果棉塞上沾有培養(yǎng)基，此試管應(yīng)____________。答案(1)牛肉膏、蛋白胨、蒸餾水、NaCl、瓊脂(2)比例攪拌瓊脂糊底引起燒杯破裂(3)高壓蒸汽滅菌鍋廢棄2.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的過程中，關(guān)于倒平板的具體描述正確的是()①待培養(yǎng)基冷卻至40℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板②將滅過菌的培養(yǎng)皿放在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰④用左手的拇指和食指完全打開皿蓋⑤右手將錐形瓶中培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋⑥等待平板冷卻5～10s，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上A.①③④⑤B.④⑤⑥C.③⑤D.①②④⑥問題導(dǎo)析(1)培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至50℃左右時(shí)倒平板，原因是瓊脂在44℃以下凝固。(2)倒平板的過程要在酒精燈火焰附近進(jìn)行。答案C解析瓊脂是一種多糖，在98℃以上可溶解于水，在44℃以下凝固，倒平板時(shí)高于50℃則會(huì)燙手，低于50℃時(shí)若不能及時(shí)操作，瓊脂會(huì)凝固。無菌操作應(yīng)貫穿于操作的全過程，皿蓋全打開則空氣中的微生物會(huì)進(jìn)入培養(yǎng)基。等待平板冷卻凝固(大約需5～10min)后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。一題多變倒平板的過程需要進(jìn)行無菌操作，在培養(yǎng)基的制備過程中，還有哪些環(huán)節(jié)需要進(jìn)行無菌操作？答案要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行干熱滅菌，酒精燈火焰旁屬于灼燒滅菌。二、微生物的分離與純化技術(shù)1.純化大腸桿菌(1)平板劃線法①原理：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。②步驟接種環(huán)滅菌：將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒直至燒紅↓取菌種eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(a.在酒精燈火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的棉塞,b.將試管口通過火焰達(dá)到消滅試管口雜菌的目的,c.將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液,d.將試管口通過火焰，并塞上棉塞))↓eq\a\vs4\al\co1(平板,劃線)eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(a.左手將皿蓋打開一條縫隙，右手把沾有菌種的接種環(huán)迅速,伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要,劃破培養(yǎng)基。,b.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往,第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，完成三、四、五區(qū)域,內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連))↓培養(yǎng)：將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2稀釋涂布平板法①原理：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。②步驟Ⅰ.系列稀釋操作a.編號(hào)為101～106試管中分別盛有9mL水。b.用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中，得到稀釋菌液。c.從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中。依次類推，完成菌液的稀釋。注意移液管要經(jīng)過滅菌，并且操作應(yīng)在酒精燈火焰附近完成。Ⅱ.涂布平板操作涂布器消毒：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中↓取菌液：取少量菌液滴加到培養(yǎng)基表面↓涂布器滅菌：將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s↓涂布平板：用涂布器將菌液均勻涂布在培養(yǎng)基表面，涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻2.菌種保藏比較項(xiàng)目臨時(shí)保藏甘油管藏適用范圍頻繁使用的菌種長(zhǎng)期保存的菌種培養(yǎng)基固體斜面培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基保藏溫度4℃－20℃具體方法接種到固體斜面培養(yǎng)基上→適宜溫度下培養(yǎng)→4℃冰箱中保藏甘油瓶中裝入甘油后滅菌→將菌液轉(zhuǎn)移至甘油瓶中→混勻后冷凍箱中保存1.平板劃線操作的注意事項(xiàng)(1)平板劃線法接種菌種時(shí)，哪些操作可防止雜菌污染？答案①接種前將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒。②劃完一個(gè)區(qū)域后，將接種環(huán)灼燒，冷卻后再劃下一區(qū)域。③接種環(huán)沾取菌液時(shí)，要將試管口、棉塞等通過火焰。④劃線時(shí)將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)。(2)在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答案避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。(3)為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？答案操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物。每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。(4)在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答案需要。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。(5)在做第二次劃線以及其后的操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答案劃線后末端含有的細(xì)菌數(shù)目較少，每次從上一次的末端開始劃線能夠使細(xì)菌的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終分散成單個(gè)的細(xì)菌。(6)為何最后一次劃線不能與第一次劃線相連？答案最后一次劃線已經(jīng)將細(xì)菌稀釋成單個(gè)的細(xì)胞，如果與第一次劃線相連則增加了細(xì)菌的數(shù)目，得不到純化的效果。2.稀釋涂布平板操作注意事項(xiàng)(1)涂布平板的所有操作都應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想將菌液滴加到培養(yǎng)基上時(shí)應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？答案應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適，吸管頭不要接觸任何其他物體，吸管要在酒精燈火焰附近等。(2)操作結(jié)束后，為什么要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和一個(gè)接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)？未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng)很關(guān)鍵。如果有菌落生長(zhǎng)，說明了什么？答案培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對(duì)照。未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基的制備是成功的；若有菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底，或培養(yǎng)基被污染，需要重新制備。歸納總結(jié)兩種接種方法比較平板劃線法稀釋涂布平板法用途一般用于菌種的純化一般用于篩選菌株優(yōu)點(diǎn)可對(duì)混合菌進(jìn)行分離可以計(jì)數(shù)缺點(diǎn)不能計(jì)數(shù)較麻煩，平板不干燥，效果不好；若菌液濃度大則長(zhǎng)不出單菌落培養(yǎng)結(jié)果3.稀釋涂布平板法是微生物培養(yǎng)中常用的一種接種方法。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.操作中需要將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B.需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面C.不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落D.操作過程中對(duì)培養(yǎng)基和涂布器等均需進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理答案C解析稀釋涂布平板法要先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，A項(xiàng)正確；只有在稀釋度足夠高的菌液中，聚集在一起的微生物才被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落，故而要將不同稀釋度的菌液分別涂布平板，B項(xiàng)正確，C項(xiàng)錯(cuò)誤；在稀釋涂布過程中，為防止雜菌污染，要對(duì)培養(yǎng)基和涂布器等進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理，D項(xiàng)正確。一題多變(1)B項(xiàng)中不同稀釋度的菌液一般涂布幾個(gè)平板為宜？答案為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每個(gè)稀釋度的菌液一般涂布3個(gè)平板，并對(duì)結(jié)果取平均值。(2)如何證明該接種過程是成功的？答案將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入適宜溫度的恒溫箱中，培養(yǎng)12h和24h后，觀察培養(yǎng)基上的菌落情況，若未接種的培養(yǎng)基上無菌落生長(zhǎng)，則證明操作是成功的；否則不成功。(3)題中如果不同稀釋度的菌液接種后都不能得到單細(xì)胞菌落，原因可能是什么？答案可能是稀釋度不夠，聚集在一起的微生物沒能被分散成單個(gè)細(xì)胞。(4)如果不進(jìn)行D項(xiàng)操作，培養(yǎng)基上的菌落可能有哪些變化？答案菌落種類和數(shù)目增多。4.圖甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，圖乙是平板劃線法操作結(jié)果。下列敘述中，錯(cuò)誤的是()A.甲中涂布前要將涂布器灼燒，冷卻后才能取菌液B.對(duì)于濃度較高的菌液，如果甲中的稀釋倍數(shù)僅為102，則所得的菌落不是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成C.乙中培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求D.乙中的連續(xù)劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端問題導(dǎo)析(1)對(duì)菌液進(jìn)行稀釋時(shí)，菌液中菌體的濃度越高，則稀釋的倍數(shù)也要越高，菌體的濃度低時(shí)，則稀釋的倍數(shù)不必太高。(2)高溫會(huì)殺死菌體，所以一些經(jīng)過高溫或灼燒滅菌的器材需要冷卻后才能接觸菌種。(3)平板劃線法的多次劃線中，菌體越來越少，即不同劃線處的菌體數(shù)目不同，所以形成的菌落并非全部是由單個(gè)菌體繁殖而成的。答案C解析灼燒后的接種環(huán)如果沒有冷卻就接觸菌種，會(huì)將菌體殺死，A正確；稀釋倍數(shù)過低，會(huì)導(dǎo)致多個(gè)菌體聚集在一起繁殖成菌落，B正確；平板劃線法中一般最后一次劃線的末端處形成的菌落才是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成的，這種菌落才符合要求，C錯(cuò)誤；連續(xù)劃線中，除了第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端，目的是使得菌體密度越來越小，保證最后劃線末端處的菌落是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成。一題多變稀釋倍數(shù)和劃線次數(shù)是兩種接種方法的關(guān)鍵，決定稀釋倍數(shù)和劃線次數(shù)的因素是什么？答案決定稀釋倍數(shù)及劃線次數(shù)的因素是菌液的濃度，如果菌液的濃度較高則需要高倍數(shù)的稀釋，所劃線次數(shù)也要較多，否則就可以低倍稀釋或減少劃線次數(shù)。拓展提升兩種接種方法中，只有稀釋涂布平板法才適合對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)的原因只要稀釋倍數(shù)足夠高，則稀釋涂布平板法中形成的每個(gè)菌落都是由單一菌體繁殖而成的，即一個(gè)肉眼看不見的細(xì)菌對(duì)應(yīng)著一個(gè)可以看見的菌落，可以通過統(tǒng)計(jì)菌落的數(shù)目推測(cè)出細(xì)菌的數(shù)目。而平板劃線法中除了最后一次劃線末端處的菌落是由單一的細(xì)菌繁殖而成的，其他每個(gè)菌落往往是由多個(gè)細(xì)菌一起繁殖而成，即一個(gè)菌落并非對(duì)應(yīng)著一個(gè)細(xì)菌，所以不適合用于細(xì)菌的計(jì)數(shù)。1.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是()A.計(jì)算、稱量、倒平板、溶化、滅菌B.計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C.計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D.計(jì)算、稱量、滅菌、溶化、倒平板答案C解析制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，應(yīng)先根據(jù)需要計(jì)算各成分用量，然后稱量、溶化、滅菌、倒平板。2.平板冷凝后，要將平板倒置，其原因是()A.接種時(shí)再拿起來方便B.在皿底上標(biāo)記日期等方便C.正著放置容易破碎D.防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染答案D解析平板倒置主要是防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。3.如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?→2→3→4→5。下列操作方法正確的是()A.操作前不用進(jìn)行任何處理B.劃線操作必須在火焰上進(jìn)行C.在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D.在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌答案D解析劃線之前應(yīng)對(duì)接種環(huán)滅菌；劃線操作在酒精燈火焰旁進(jìn)行；從1區(qū)域至5區(qū)域菌落密度越來越小，可能會(huì)在3、4、5區(qū)域得到所需菌落。4.分離純化大腸桿菌最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。下列有關(guān)這兩種方法的敘述錯(cuò)誤的是()A.均將大腸桿菌接種在固體培養(yǎng)基的表面B.獲得的每個(gè)菌落均是由一個(gè)細(xì)菌繁殖而來的子細(xì)胞群C.都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行操作，以防止雜菌污染D.稀釋分散菌種的原理不同，均能達(dá)到分離純化大腸桿菌的目的答案B解析用稀釋涂布平板法時(shí)，如果稀釋得當(dāng)，在平板表面就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖形成的。平板劃線中最后一次劃線的末端處形成的菌落才是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成，這種菌落才符合要求。5.請(qǐng)回答與大腸桿菌純化培養(yǎng)有關(guān)的問題：(1)制備培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基時(shí)各種成分在溶化后分裝前必須進(jìn)行____，培養(yǎng)基在接種前要進(jìn)行____滅菌。(2)純化大腸桿菌①通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步分散到培養(yǎng)基的表面，在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這種方法稱為____________。②用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)時(shí)__________(填“是”或“否”)需要設(shè)置對(duì)照組？為什么？__________________________________________________________________________。(3)討論分析①純化大腸桿菌時(shí)，_______(填“可”或“不可”)用加入抗生素的方法防止雜菌感染。②用該方法分離大腸桿菌時(shí)，從第二次劃線操作起，每次總是要從上一次劃線的末端開始劃線，并劃線數(shù)次，其原因是______________________________________________________________________________________________________________________________。③大腸桿菌與酵母菌的最本質(zhì)區(qū)別是______________________________________________________________________________________________________________________。答案(1)調(diào)pH高壓蒸汽(2)①平板劃線法②是需要判斷培養(yǎng)基是否被污染(3)①不可②線條末端的細(xì)菌數(shù)量少，最終可得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而形成的菌落③大腸桿菌無成形的細(xì)胞核解析(1)配制培養(yǎng)基時(shí)各種成分在溶化后分裝前必須進(jìn)行調(diào)節(jié)pH，培養(yǎng)基在接種前要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。(2)①通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步分散到培養(yǎng)基的表面，在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這種方法稱為平板劃線法。②因需要判斷培養(yǎng)基是否被污染，故需要設(shè)置對(duì)照。(3)討論分析①純化大腸桿菌時(shí)，不可用加入抗生素的方法防止雜菌污染，因?yàn)榭股匾部梢詺⑺来竽c桿菌。②線條末端的細(xì)菌數(shù)量少，最終可得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而形成的菌落。③大腸桿菌為原核生物，無成形的細(xì)胞核。[基礎(chǔ)過關(guān)]1.下列關(guān)于倒平板的敘述，錯(cuò)誤的是()A.右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞，為避免污染需放在酒精燈火焰附近B.倒平板整個(gè)過程應(yīng)在火焰旁進(jìn)行C.完全打開培養(yǎng)皿皿蓋，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋D.為避免水滴滴入培養(yǎng)基，平板應(yīng)倒過來放置答案C解析C項(xiàng)應(yīng)是用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全打開，以防雜菌污染。2.下列有關(guān)平板劃線操作的敘述，不正確的是()A.第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物B.每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上的菌種C.在第二區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液D.劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者答案C解析在第二區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種來源于第一次劃線的末端。3.下列依次表示倒平板、接種的位置以及平板劃線法接種的路徑的示意圖，其中錯(cuò)誤的是()答案D解析平板劃線法除第一次劃線外，以后的每一次劃線都從上一次劃線的末端開始。4.涂布平板操作需要用到()A.接種環(huán)、滴管、酒精燈B.接種環(huán)、移液管、酒精燈C.涂布器、移液管、酒精燈D.涂布器、接種環(huán)、酒精燈答案C5.將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37℃恒溫箱的目的是()A.對(duì)比觀察培養(yǎng)基有沒有被微生物利用B.對(duì)比分析培養(yǎng)基上是否生有雜菌C.沒必要放入未接種的培養(yǎng)基D.為了下次接種時(shí)再使用答案B6.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是()A.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌B.接種純種細(xì)菌C.適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D.防止外來雜菌的入侵答案D[能力提升]7.利用稀釋涂布平板法純化的大腸桿菌，經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上出現(xiàn)了多種菌落，不可能的原因是()A.培養(yǎng)基制備過程中被雜菌污染B.接種過程中，無菌操作不符合要求C.系列稀釋時(shí)，無菌操作不符合要求D.由大腸桿菌的種類不同造成的答案D解析大腸桿菌培養(yǎng)基中出現(xiàn)了多種菌落，說明培養(yǎng)基中污染了雜菌，雜菌可能來自培養(yǎng)基，也可能是因?yàn)椴僮鬟^程中無菌操作不符合要求。8.做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是()A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上答案D解析A項(xiàng)錯(cuò)，高壓滅菌加熱結(jié)束后，自然冷卻至壓力表指針回到零后再慢慢打開排氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物；B項(xiàng)錯(cuò)，倒平板時(shí)左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶，左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋；C項(xiàng)錯(cuò)，灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；D項(xiàng)對(duì)，在微生物的培養(yǎng)中，一般將培養(yǎng)皿倒置，應(yīng)在皿底上用記號(hào)筆做標(biāo)記。9.為了保持菌種的純凈，需要進(jìn)行菌種的保藏，下列有關(guān)敘述不正確的是()A.對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法B.臨時(shí)保藏的菌種一般是接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上C.臨時(shí)保藏的菌種容易被污染或產(chǎn)生變異D.對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用低溫－4℃保藏的方法答案D解析對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可采用甘油管藏法，即在3mL的甘油瓶中加入1mL甘油后滅菌，將1mL菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。10.平板劃線法和稀釋涂布平板法是常用的兩種接種方法。下列相關(guān)敘述中錯(cuò)誤的是()A.平板劃線法要求要連續(xù)多次劃線，且除了第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)都是上一次劃線的終點(diǎn)B.除了第一次劃線需要將接種環(huán)灼燒滅菌外，以后的劃線可以不用滅菌C.如果菌液本來濃度不高，則可以適當(dāng)降低稀釋倍數(shù)D.充分稀釋和連續(xù)劃線的目的都是為了使形成的菌落是由單一的細(xì)菌細(xì)胞繁殖而成答案B解析平板劃線法需要連續(xù)劃線的目的就是使得細(xì)菌的濃度降低，所以除了第一次劃線外，以后的每次劃線的起點(diǎn)都是上一次劃線的終點(diǎn)，A正確；除了第一次劃線需要將接種環(huán)灼燒滅菌外，以后的每一次劃線前也要將接種環(huán)進(jìn)行灼燒，將上次劃線結(jié)束后殘留的細(xì)菌殺死，使細(xì)菌盡快分散成單個(gè)，B錯(cuò)誤；稀釋倍數(shù)要隨菌液的濃度而定，如果菌液的濃度太大，則需要更高的稀釋倍數(shù)，否則就可以適當(dāng)降低稀釋的倍數(shù)，C正確；稀釋涂布平板法中的充分稀釋及平板劃線法中的連續(xù)劃線，目的都是為了保證菌落是由單一的細(xì)菌細(xì)胞繁殖而成的，D正確。11.回答以下關(guān)于微生物的培養(yǎng)和發(fā)酵的問題：(1)某中學(xué)生物興趣小組在進(jìn)行A細(xì)菌的培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)了另一種B細(xì)菌，在B細(xì)菌周圍A細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖受到抑制，這有可能是B細(xì)菌產(chǎn)生了不利于(抑制)A細(xì)菌生存的物質(zhì)?，F(xiàn)在請(qǐng)你在以下實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，繼續(xù)完成驗(yàn)證A細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖受到抑制的原因的實(shí)驗(yàn)過程：__________________________________________________(用序號(hào)、文字和箭頭作答)。(2)上圖所示培養(yǎng)基中加入了凝固劑(或瓊脂)，致使該培養(yǎng)基屬于__________________。培養(yǎng)微生物前，所用培養(yǎng)基一般需采用_________________________法進(jìn)行滅菌，接種微生物常用的方法有______________和____________________，其中后者也可用于微生物的計(jì)數(shù)。答案(1)④去除步驟③中培養(yǎng)皿里的B細(xì)菌并保留培養(yǎng)基→⑤再接種A細(xì)菌→⑥培養(yǎng)一段時(shí)間→⑦觀察A細(xì)菌的生長(zhǎng)情況(答案合理即可)(2)固體培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌平板劃線法稀釋涂布平板法(后兩空答案順序不可顛倒)解析(1)在去除B細(xì)菌的培養(yǎng)基上再接種A細(xì)菌，可根據(jù)A細(xì)菌的生長(zhǎng)情況來驗(yàn)證是否是B細(xì)菌產(chǎn)生了不利于A細(xì)菌生存的物質(zhì)。(2)固體培養(yǎng)基中一般需加入瓊脂。一般培養(yǎng)基的滅菌方法為高壓蒸汽滅菌法，接種微生物的常用方法為平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中只有稀釋涂布平板法可用于微生物的計(jì)數(shù)。12.在生物技術(shù)上常利用大腸桿菌制成“工程菌”。某生物小組的同學(xué)，利用實(shí)驗(yàn)室提供的大腸桿菌品系及其他必要材料，對(duì)該品系大腸桿菌進(jìn)行了培養(yǎng)。請(qǐng)分析回答下列問題：(1)微生物在生長(zhǎng)過程中對(duì)各種成分的需求量不同，故制備培養(yǎng)基時(shí)各成分要有合適的__________。培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉可分別為微生物提供__________________。(2)配制培養(yǎng)基時(shí)，各種成分在溶化后分裝前必須調(diào)節(jié)_____，接種前要進(jìn)行_____處理。(3)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的方法是______________________________________。(4)在制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的倒平板操作時(shí)，平板冷凝后，應(yīng)將平板_________放置，這樣做的目的是防止皿蓋上的水珠落入__________而造成污染。(5)甲同學(xué)采用平板劃線法接種，獲得單個(gè)菌落后繼續(xù)篩選，在每次劃線之前都要灼燒__________，他這樣做的目的是__________________________________________________。在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？_________，為什么？________________。(6)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行滅菌處理后才能倒掉，這樣做的目的是_______。答案(1)濃度和比例氮源和碳源、碳源(2)pH滅菌(3)高壓蒸汽滅菌(4)倒過來培養(yǎng)基(5)接種環(huán)殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種需要防止接種環(huán)上殘留的菌種對(duì)環(huán)境造成污染或感染操作者(6)防止污染環(huán)境解析(1)培養(yǎng)基中各成分要有合適的濃度和比例，保證微生物有充足的營(yíng)養(yǎng)，又不會(huì)因外界濃度過大而失水。淀粉提供碳源，而蛋白胨含C、N等元素，既能提供碳源，又能提供氮源。(2)各種成分溶化后分裝前要調(diào)節(jié)pH，接種前對(duì)培養(yǎng)基滅菌，防止雜菌污染。(3)培養(yǎng)基滅菌用高壓蒸汽滅菌法。(4)倒平板時(shí)，平板冷凝后應(yīng)倒置，否則皿蓋上的水珠會(huì)落入培養(yǎng)基造成污染。(5)每次劃線前都要灼燒接種環(huán)，將上次劃線殘留的菌種殺死，使細(xì)菌盡快分散成單個(gè)。操作結(jié)束后灼燒接種環(huán)是為了防止殘留的菌種污染環(huán)境或感染操作者。(6)使用過的培養(yǎng)基要徹底滅菌后再倒掉，否則培養(yǎng)基中的微生物會(huì)污染環(huán)境。13.大腸桿菌是與我們?nèi)粘Ｉ盥?lián)系非常密切的細(xì)菌，請(qǐng)回答有關(guān)檢測(cè)飲用水中大腸桿菌的問題：(1)檢測(cè)飲用水中大腸桿菌的含量時(shí)，通常將樣品進(jìn)行一系列的梯度稀釋，將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，然后記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為__________________。判斷下面所示的4個(gè)菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是__________________。(2)用上述方法統(tǒng)計(jì)樣本中菌落數(shù)時(shí)是否需要設(shè)置對(duì)照組？_____________(填“需要”或“不需要”)，其原因是需要判斷培養(yǎng)基_________________________，對(duì)于固體培養(yǎng)