流式常用試劑配制

一、流式細(xì)胞術(shù)常用試劑

1、10％NaN3：將10gNaN3溶解于100ml蒸餾水中，室溫保存；活體實(shí)驗(yàn)或在辣根過(guò)氧化酶反應(yīng)中可不使用NaN3。

2、3％BSA/PBS：100mlPBS中加入3gBSA，使之溶解，再加入0.2ml10％的NaN3。

3、500mmol/LEDTA：將186gEDTA?Na2?2H2O溶解于400ml蒸餾水中，用NaOH將PH調(diào)至8.0，補(bǔ)充蒸餾水至500ml，分裝，高壓滅菌，室溫保存。

4、4％多聚甲醛：在磁力攪拌下，將4g多聚甲醛溶于100mlPBS，加入數(shù)滴NaOH，在通風(fēng)柜中于60度加熱，使其溶解，調(diào)整PH至7.4，使用前新鮮配制。

5、消化液：0.25％胰蛋白酶（用培養(yǎng)液或PBS配制）或0.25％胰蛋白酶與0.02％EDTA的混合液。

6、紅細(xì)胞裂解液：NH4Cl4.16g，KHCO30.5g，EDTA?2Na0.02g，溶于100ml水中，調(diào)PH至7.2，補(bǔ)充蒸餾水至500ml，4度儲(chǔ)存，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫。

7、流式細(xì)胞抗體稀釋劑：0.1mmol/LPBS液（PH7.4）＋1％BSA＋0.1％Na2N3。

8、常用細(xì)胞破膜劑：PBS液（PH7.4）＋1％FBS（或BSA）＋0.1％NaN3＋0.1％saponin（Sigma的效果不錯(cuò)）。

9、流式細(xì)胞染色洗滌液：含2％的BSA、0.1％NaN3的PBS（PH7.4）。

10、PI染液（保存液，10×，用于細(xì)胞周期和凋亡檢測(cè)）：10mgPI溶于10mlPBS，加入2mg無(wú)DNA酶的RNA酶，4度保存?zhèn)溆谩?yīng)用時(shí)，10倍稀釋?zhuān)抗芗?.3ml～0.5mlPI染液。

11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培養(yǎng)液、稀釋劑和細(xì)胞清洗液，不能單獨(dú)作為細(xì)胞、組織培養(yǎng)液）

原液A

NaCl160g

MgSO4?7H2O2g

KCl8g

MgCl?6H2O2g

CaCl22.8g

溶于1000ml雙蒸水

原液B

1）Na2HPO4?12H2O3.04g

KH2PO41.2g

葡萄糖20.0g

溶于800ml雙蒸水

2）0.4％酚紅溶液：取酚紅0.4g置玻璃研缽中，逐滴加入0.1NNaOH并研磨，直至完全溶解，約加入0.1NNaOH10ml。將溶解的酚紅吸入100ml量瓶中，用雙蒸水洗下研缽中殘留的酚紅液，并入量瓶中，最后補(bǔ)加雙蒸水至100ml。

將1）液和2）液混合，補(bǔ)加雙蒸水至1000ml即為原液B。

應(yīng)用液：

原液A1份

原液B1份

雙蒸水18份

混合后，分裝于200ml小瓶中，高壓滅菌。臨用前用無(wú)菌的5.6％NaHCO3調(diào)PH至7.2～7.6。

12、磷酸鹽緩沖液的配制（PB）

A液（0.2mol/LNaH2PO4水溶液）：

NaH2PO4?H2O27.6g，溶于蒸餾水中，稀釋至1000ml。

B液（0.2mol/LNa2HPO4水溶液）：

Na2HPO4?7H2O53.6g加蒸餾水溶解，加水至1000ml。

不同PH值PB的配制：

A液xml（參照下表）中，加入B液yml，為0.2mol/L的PB。若再加蒸餾水至200ml，則成0.1mol/LPB。

PHx/mly/ml

5.793.56.5

5.892.08.0

5.990.010.0

6.087.712.3

6.185.015.0

6.281.518.5

6.377.522.5

6.473.526.5

6.568.531.5

6.662.537.5

6.756.543.5

6.851.049.0

6.945.055.0

7.039.061.0

7.133.067.0

7.228.072.0

7.323.077.0

7.419.081.0

7.516.084.0

7.613.087.0

7.710.090.0

7.88.5091.0

7.97.0093.0

2）光淬滅性很強(qiáng)，要絕對(duì)避光。

12、PE-Cy7：激發(fā)波長(zhǎng)488nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)767nm。

1）在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL4通道檢測(cè)，BD細(xì)胞儀FL3通道檢測(cè)；

2)可適用于大、小功率的流式細(xì)胞儀；

3）光淬滅性很強(qiáng)，要絕對(duì)避光；

4）可與FITC、PE搭配，與FITC無(wú)光譜重疊，與APC搭配熒光干擾小，補(bǔ)償小，是比較理想的搭配。

13、TR：激發(fā)波長(zhǎng)595nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)615nm。

1）其標(biāo)記的抗體適用于配備TexasRed激光器的流式細(xì)胞儀；

2）熒光不易淬滅，可用于熒光顯微鏡。

14、APC：激發(fā)波長(zhǎng)633/635nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)660nm。

1）其標(biāo)記的抗體適用于所有配備氦氖激光器的流式細(xì)胞儀；

2）在BD細(xì)胞儀的FL4通道檢測(cè)，在BeckmanCoulter細(xì)胞儀只有配備雙激光器的FC500才能檢測(cè)到。

15、APC-Cy5.5：激發(fā)波長(zhǎng)633/635nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)668nm。

1）其標(biāo)記的抗體適用于所有配備氦氖激光器的流式細(xì)胞儀；

2）主要用于四色以上的流式細(xì)胞術(shù)。

16：PerCP：激發(fā)波長(zhǎng)488nm