DB15T+3609-2024黑土地土壤微生物肥力評(píng)價(jià)規(guī)范

ICS65.020.01CCSICS65.020.01CCSB10內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)DB15/T3609—2024黑土地土壤微生物肥力評(píng)價(jià)規(guī)范Specificationforevaluationofsoilmicrobialfertilityinblacksoil2024-07-222024-07-222024-08-22內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧廳提出。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAM/TC20)歸口。黑土地土壤微生物肥力評(píng)價(jià)規(guī)范范圍本文件適用于黑土地土壤微生物肥力高低的評(píng)價(jià)。（GB/T601化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備GB20287-2006GB/T33469-2016LY/T1220森林土壤呼吸強(qiáng)度的測(cè)定NY/T1121.1土壤檢測(cè)第1部分：土壤樣品的采集、處理和貯存3術(shù)語(yǔ)和定義LY/T1220森林土壤呼吸強(qiáng)度的測(cè)定NY/T1121.1土壤檢測(cè)第1部分：土壤樣品的采集、處理和貯存3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。土壤微生物肥力soilmicrobialfertility能對(duì)土壤的物理和化學(xué)特性起到促進(jìn)和維持作用的微生物，在生物過程中為植物生長(zhǎng)發(fā)育提供所需養(yǎng)分的能力。土壤微生物生物量soilmicrobialbiomass單位土壤中體積小于5μm3×103μm3微生物的總重量。微生物生物量表示方法即微生物量碳和氮。土壤呼吸強(qiáng)度soilrespirationintensity單位時(shí)間內(nèi)從單位面積土壤中釋放出來的二氧化碳量。4土壤樣品的采集、制備及基礎(chǔ)指標(biāo)測(cè)定采樣時(shí)間7～8采樣方法）＞1hm2100m×100m50m×200m315～200cm～20cm1kgNY/T1121.1）1kg3樣品處理樣品處理4448h4100土壤含水量和有機(jī)碳的測(cè)定HJ613GB/T33469-2016C5土壤微生物肥力評(píng)價(jià)指標(biāo)及測(cè)定（(1)：qSMBC=Cmic/Corg (1)式中：qSMBC——微生物熵；Cmic——微生物生物量碳；Corg——土壤有機(jī)碳。GB20287-20066.3.2GB20287-2006中A.1A.6土壤微生物生物量碳測(cè)定具體方法見附錄A中的A.1。土壤微生物生物量氮測(cè)定具體方法見附錄A中的A.2。纖維素酶活性測(cè)定按照GB20287-2006的附錄D中D.1的規(guī)定執(zhí)行。蔗糖酶活性以蔗糖為底物，采用3,5-二硝基水楊酸比色法測(cè)定，具體方法見附錄B中的B.1。脲酶活性以尿素為底物，采用苯酚鈉?次氯酸鈉比色法測(cè)定，具體方法見附錄B中的B.2。磷酸酶活性測(cè)定采用磷酸苯二鈉比色法，具體方法見附錄B中的B.3。過氧化氫酶活性采用高錳酸鉀滴定法測(cè)定，具體方法見附錄B中的B.4。硝酸還原酶活性采用酚二磺酸比色法測(cè)定，具體方法見附錄B中的B.5。多酚氧化酶活性采用底物（左旋多巴（L-DOPA））分光光度法測(cè)定，具體方法見附錄B中的B.6。5.2.4土壤呼吸強(qiáng)度的測(cè)定土壤呼吸強(qiáng)度測(cè)定按照LY/T1220的規(guī)定執(zhí)行。6土壤微生物肥力評(píng)價(jià)方法參照表GB/T33469表1黑土地土壤微生物肥力評(píng)價(jià)因子總集目標(biāo)層黑土地土壤微生物肥力評(píng)價(jià)指標(biāo)準(zhǔn)則層指標(biāo)層準(zhǔn)則層指標(biāo)層微生物數(shù)量指標(biāo)可培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量土壤酶活性指標(biāo)脲酶活性可培養(yǎng)真菌數(shù)量磷酸酶活性過氧化氫酶活性微生物生物量指標(biāo)微生物生物量碳蔗糖酶活性微生物生物量氮纖維素酶活性微生物活性指標(biāo)微生物熵硝酸還原酶活性土壤呼吸強(qiáng)度多酚氧化酶活性土壤微生物數(shù)量、微生物生物量碳氮、微生物熵及酶活性均屬于S型隸屬函數(shù)，各評(píng)價(jià)因素的隸屬函數(shù)可簡(jiǎn)化為公式(2)：式中：??(??)——隸屬函數(shù)；??——評(píng)價(jià)指標(biāo)；??0——評(píng)價(jià)指標(biāo)的閾值上限值。

??,??<??0??(??)={??001, ??≥

…………………(2)采用累積頻率曲線確定隸屬函數(shù)閾值上限，一組樣本u1,u2,...un，給定某一閾值u0，不大于u0m/nu075%CiFi3)：MIF=∑（????×????） (3)式中：MIF——土壤微生物肥力綜合指數(shù)；????——第i個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)的組合權(quán)重；????——第i個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)的隸屬度。根據(jù)6.2.22(3MIF0～1MIF附錄A（）24（CC31:21min34℃、黑暗條件下保存。注1molL40（.01g00mL。（0.5mo/74.6（0.12.5L2L（150r/min）0.20mol/12.6（.001g）600mL～800mL1000mL。（005mol/14（0.001g600m～800mL5mL1000mL1.490.00010.70.0001g）1g（0.0001g）100mL注：此指示劑易變質(zhì)，應(yīng)密閉保存于棕色瓶中。電子天平（感量0.0001g和0.01g），真空泵，油浴鍋（可控溫180℃±5℃)，恒溫培養(yǎng)箱（25℃±1℃)，搖床（25℃，150r/min，300r/min）。按照HJ613測(cè)定土壤樣品的干物質(zhì)含量。42mm40%（4025℃±1℃下預(yù)培養(yǎng)7d～151001mol/LNaOH生的CO2。這些過程是為了消除土壤水分限制對(duì)微生物的影響以及植物殘?bào)w對(duì)測(cè)定的干擾。經(jīng)預(yù)培養(yǎng)的土壤應(yīng)立即分析，否則，應(yīng)置于4℃下保存，且分析前需在上述條件下至少再培養(yǎng)24h。熏蒸50.00g共100約2/3）2～3mm），1mol/LNaOH-0.07MPa3min～5min25℃±1℃24（（-0.075～63min在熏蒸的同時(shí)，另稱取等量的土壤3份，置于另一干燥器中，除不加氯仿進(jìn)行熏蒸外，其他操作與熏蒸土壤一樣，作為對(duì)照土壤。浸提200mL100mL0.5mol/Lg，mL）（25℃,300r/min）30min100mL200mL100mL0.5mol/L3測(cè)定取10mL5.00mL0.2500mol/LmL175℃～185175℃～185℃,5min250mL50mL～60mL樣品中有機(jī)碳含量以克每千克（g/kg）表示，按式（A.1）計(jì)算：??=??×(??0???)×0.003×1.10×1000×100

…………………(A.1)式中：

??×??

??1C——樣品中有機(jī)碳的含量，單位為克每千克（g/kg）；C——硫酸亞鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，單位為摩爾每升（moL/L）；V0——空白試驗(yàn)所消耗硫酸亞鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，單位為毫升（mL）；V——試樣試驗(yàn)所消耗硫酸亞鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，單位為毫升（mL）；0.003——1/4碳原子的毫摩爾質(zhì)量，單位為克每毫摩爾（g/mmol）；1.10——氧化校正系數(shù)；m——稱取土壤的質(zhì)量，單位為克（g）；f——表示土壤樣品干物質(zhì)含量，單位為百分含量表示（%）；V1——用于測(cè)定的浸提液體積，單位為毫升（mL）。土壤微生物量碳含量以克每千克（g/kg）表示，按式（A.2）計(jì)算：????=????÷?? (A.2)式中：Bc——土壤中微生物量碳的含量，單位為克每千克（g/kg）；Ec——熏蒸土壤浸提測(cè)定的有機(jī)碳－不熏蒸土壤浸提測(cè)定的有機(jī)碳，單位為克每千克（g/kg）；K——轉(zhuǎn)換系數(shù)，取值0.45。結(jié)果保留三位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。24（CC3：同.1.21molL40（.01g00mL。（0.5mo/74.6（0.12.5L2L（150r/min）400g/400g1。20/L20g1。0.02mol.56L00mL0.1mol/LGB/T6010.02mol/L0.10g0.50g100mL95%乙電子天平（感量0.0001g和0.01g），真空泵，恒溫培養(yǎng)箱（25℃±1℃)，凱氏定氮儀，搖床（25℃，150r/min，300r/min）。同A.1.4。同A.1.5。熏蒸同A.1.6。浸提同A.1.7。消化取10.0mL浸提液（解凍的浸提液在取樣前應(yīng)徹底混勻）于250mL消化管中，加入0.100g硫酸銅，5mL濃硫酸，于電爐上消化，混合液消化變清后再回流3h。測(cè)定15min25mL20g/L35mL400g/L5min（0.02mol/L樣品中氮含量以克每千克（g/kg）表示，按式（A.3）計(jì)算：N=(??1???0)×??×0.014×1000×100

…………………(A.3)式中：

??×??

??2N——樣品中氮的含量，單位為克每千克（g/kg）；V1——（mL）；V0——（mL）；c——（moL/L）；0.014——氮原子的毫摩爾質(zhì)量，單位為克每毫摩爾（g/mmol）；m——表示稱取土壤質(zhì)量，單位為克（g）；f——表示土壤樣品干物質(zhì)含量，單位為百分含量表示（%）；V2——用于測(cè)定的浸提液體積，單位為毫升（mL）。土壤微生物量氮含量以克每千克（g/kg）表示，按式（A.4）計(jì)算：????=????÷?? (A.4)式中：Bc——土壤中微生物量氮的含量，單位為克每千克（g/kg）；Ec——熏蒸土壤浸提測(cè)定的氮含量－不熏蒸土壤浸提測(cè)定的氮含量，單位為克每千克（g/kg）；K——轉(zhuǎn)換系數(shù)，取值0.45。結(jié)果保留三位有效數(shù)字。精密度同A.1.10。附錄B（）土壤蔗糖酶將蔗糖酶促水解為還原糖，還原糖與3,5-二硝基水楊酸在沸水浴中反應(yīng)而生成橙色的3-氨基-5-硝基水楊酸，顏色深度與還原糖量呈正相關(guān)，因而可用還原糖量來表示蔗糖酶的活性。具體如下：甲苯（C7H8）；b)蔗糖（C12H22O11）；（Na2HPO4）；（KH2PO4）；（C6H12O6）；3,5-（C7H4N2O7）；（KNaC4H4O6·4H2O）；（80g/L）8.00g100mL；（pH5.5）；11.876g19.078g1L（B）；取A0.5mL，B9.5mL混合均勻即可。（198℃～100250mg50mL（47d）3,5-（DNS）0.50g3,520mL2mol/L50mL30g100mL（7d）電子天平（感量0.0001g和0.01g），恒溫培養(yǎng)箱，分光光度計(jì)。1mg/mL0.00、0.100.20、0.30、0.400.50mL50mL1mL，DNS3mL5min（取出50mL540nm按照HJ613測(cè)定土壤樣品的干物質(zhì)含量。稱取5g（00001g（50mL15mL80g/L，5mLpH5.5537℃±124h1.00mL50mL3mLDNS53min3-550mL540nm注意事項(xiàng):（80g/L）蔗糖酶活性以24h，1g風(fēng)干土壤可水解生成葡萄糖毫克數(shù)表示，按式（B.1）計(jì)算：??=(??1???2)×??×????×??×??

…………………(B.1)式中：X——樣品中蔗糖酶的含量，單位為毫克每克每24h（mg/g·24h）；c1——（mg/mL）；c2——（mg/mL）；V——（mL）；N——為分取倍數(shù)=浸出液體積（mL）／吸取濾液體積（mL）；m——表示稱取新鮮土壤質(zhì)量，單位為克（g）；f——表示土壤樣品干物質(zhì)含量，單位為百分含量表示（%）；t——表示土壤培養(yǎng)時(shí)間，單位為24小時(shí)（24h）。結(jié)果保留三位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。甲苯C7H8尿素CONH4CH8O7KOHCH5ON0.9%。100g/10g100m。pH6784g14750g1mol/LpH6.71000mL。（135mol/6250g2L185L丙00（A27g0mBAB溶4AB20mL100mL。0.4717g1053h10001mL0.1mg100.01mg/mL0.001g和0.10.00、1.00、3.00、5.00、7.00、9.00、11.00、13.00mL氨的50mL20mL4mL3mL20min0.00.20.61.01.41.82.22.6μg/mL1578nm按照HJ613測(cè)定土壤樣品的干物質(zhì)含量執(zhí)行。稱取5g（00001g（于100L1mL15min10mL100g/L20mLpH6.737℃±124h1.00mL50mL4mL3mL20min50mL。1h578nm（1h。注意事項(xiàng):（100g/L脲酶活性以24h，1g風(fēng)干土壤可水解生成氨量的毫克數(shù)表示，按式（B.2）計(jì)算：??×??×1000×??X=(??1???2)×??×?? (B.2)??×??×1000×??式中：X（mg/，241/m2μg/mV（LNmL（mm（gf%t4（4精密度在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。本方法以磷酸苯二鈉為基質(zhì)，在磷酸酶的作用下，基質(zhì)水解生成酚，使其與氯代二溴對(duì)苯醌亞胺試本方法以磷酸苯二鈉為基質(zhì)，在磷酸酶的作用下，基質(zhì)水解生成酚，使其與氯代二溴對(duì)苯醌亞胺試劑反應(yīng)生成藍(lán)色，顏色深度與酚含量呈正相關(guān)，用比色法測(cè)定游離的酚含量來表示磷酸酶的活性。具體如下：甲苯（C7H8）；（C2H4O2）；（C2H3O2Na）；（C6H8O7）；（Na2HPO4）；（Na2B4O7·10H2O）；（NaOH）；（Al2(SO4)3）；（C6H5Na2PO4）；苯酚（C6H6O）；（C6H2Br2CLNO）；（pH5.0）：（0.2mol/L）11.55mL1L；（0.2mol/L）16.40g1L；14.80mL（0.2mol/L）35.20mL（0.2mol/L）1L。（pH7.0）：（0.1mol/L）19.20g1L；（0.2mol/L）53.63g71.70g1L；6.40mL0.1mol/L43.60mL0.2mol/L100mL。（pH9.6）：（0.05mol/L）19.05g1L；（0.2mol/L）：8.00g1L；50mL（0.05mol/L）23mL（0.2mol/L）200mL。（55.00g1L；0.125g10mL964（3g/L）3.00g1L；（1mg/mL）：10.00011（0.01mg/ml）10.00mL1L。0.001g和0.1準(zhǔn)確吸取0.00、1.00、3.00、5.00、7.00、9.00、11.00、13.00mL酚工作液（0.01mg/ml），置于50mL容量瓶中，每瓶加入5mL緩沖液和4滴氯代二溴對(duì)苯醌亞胺試劑，顯色后用水稀釋定容至刻度，配成濃度為0.0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2、2.6μg/mL的一組標(biāo)準(zhǔn)濃度。30min后，于分光光度計(jì)上660nm處比色。以顯色液中酚濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。按照HJ613測(cè)定土壤樣品的干物質(zhì)含量。準(zhǔn)確稱取5g（精確至0.0001g）土樣（如含量高可適當(dāng)減少稱樣量）置于100mL具塞三角瓶中，加入2.5mL甲苯，輕搖15min后，加入20mL5g/L磷酸苯二鈉溶液，仔細(xì)搖勻后放入恒溫培養(yǎng)箱，37℃±124h100mL3g/L3.00mL50mL660nm注1對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。注2：整個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)置一個(gè)無土對(duì)照，不加土樣，其他操作與樣品實(shí)驗(yàn)相同，以檢驗(yàn)試劑純度和基質(zhì)自身分解。注3：如果樣品吸光值超過標(biāo)曲的最大值，則應(yīng)該增加分取倍數(shù)或減少培養(yǎng)的土樣。磷酸酶活性以24h，1g風(fēng)干土壤可水解生成酚的量（mg）表示，按式（B.3）計(jì)算：X=(??1???2)×??×????×??×1000×??

…………………(B.3)式中：4小時(shí)mg/·24h1(μg2/mV（mNmL（mm（gf%t4（4精密度在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。4甲苯C7H8HSO4H2O2（K2MnO4）0.2ol/.43mL400mL500mL4c（1/5K2MnO4）=0.1mol/L3.30g1050mL15minGB/T601（3%025m50mL3%過氧化氫水溶液，置于4℃冰箱貯存，臨用時(shí)用0.1mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定。準(zhǔn)確吸取1.00mL350mL5mL5mL0.2mol/L0.1mol/L16.51。于16.51mL3%過氧化氫實(shí)際濃度等于3%0.001g和0.1g按照HJ613測(cè)定土壤樣品的干物質(zhì)含量。50.0001用不0.5mL430min25mL4℃341h25mL40.2mol/L1.00mL50mL5mL5mL0.2mol/L0.1mol/L過氧化氫酶活性以1h，1g風(fēng)干土壤所消耗0.1mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積數(shù)來表示，按式（B.4）計(jì)算：X=(??0???)×????×??×??

…………(B.4)式中：XVc——1/5（lmf——表示土壤樣品干物質(zhì)含量，單位為百分含量表示（%t11精密度在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。3 2 2 采用酚二磺酸比色法。在厭氧環(huán)境下，通過與酚二磺酸的藍(lán)色反應(yīng)，求出反應(yīng)前后硝態(tài)氮量差值，用于表示硝酸還原酶活性。其反應(yīng)式如：NO-→NO-→NHOH→NH+3