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文檔簡介

GB/T35904—2018旋毛蟲實(shí)時熒光PCR檢測方法中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局IGB/T35904—2018本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC181)歸口。1GB/T35904—2018旋毛蟲實(shí)時熒光PCR檢測方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了旋毛蟲實(shí)時熒光PCR檢測的操作方法。2規(guī)范應(yīng)引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3儀器3.1熒光PCR儀。3.2高速冷凍離心機(jī)。3.10無菌離心管。4試劑4.2本方法試驗(yàn)用水符合GB/T6682規(guī)定的一級水。5對照樣品含有5條/g以上的國際標(biāo)準(zhǔn)種Trichinellaspiralis(T1)或Trichinellanativa(T2)旋毛蟲的大鼠經(jīng)檢測不含有旋毛蟲的大鼠肉樣。2GB/T35904—2018肉上剪取約0.5g肉樣10粒，合并成一個45s～60s,使其徹底勻漿，然后放入含有液氮的研缽中充分研磨，繼續(xù)進(jìn)行核酸提取，或置-20℃貯存8熒光PCR操作程序可使用經(jīng)驗(yàn)證的商品化組織DNA提取試劑盒提取DNA。8.2熒光PCR檢測8.2.2熒光PCR反應(yīng)體系25μL熒光PCR反應(yīng)體系包括：GB/T35904—2018Mg2+(25mmol/L)2.4μLDNA模板5.0μL熒光素設(shè)定：報(bào)告熒光(reportdye)設(shè)定為FAM,淬滅熒光(quenchdye)設(shè)定為None,校準(zhǔn)熒光讀取每個樣品Ct值。標(biāo)準(zhǔn)陽性對照有特異性擴(kuò)增曲線而且Ct值≤30,標(biāo)準(zhǔn)陰性對照和空白對照9.2.3

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