TNAIA-枸杞中乙基多殺菌素及其代謝物檢測方法

NY/T××××—××××NY/T××××—××××PAGE2TB寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會發(fā)布發(fā)布××××-××TB寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會發(fā)布發(fā)布××××-××-××實施××××-××-××發(fā)布枸杞中乙基多殺菌素及其代謝物殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法DeterminationofspinetoramanditsmetabolitesresiduesinwolfberryLiquidchromatography-massspectrometry(征求意見稿)T/NAIA×××-××××團體標(biāo)準(zhǔn)T/NAIA026—2021ICS67.160.10X62NY/T×××—2001PAGE2前言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定編寫。本文件由寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會提出并歸口。本文件起草單位：寧夏農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所、寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會。本文件主要起草人：牛艷、楊靜、趙子丹、吳燕、王曉菁、劉霞、張鋒鋒、陳翔、石欣、開建榮、楊春霞、王彩艷、張艷、王曉靜、李冬、張小飛。枸杞中乙基多殺菌素及其代謝物殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法1范圍本文件規(guī)定了枸杞中乙基多殺菌素及其代謝物殘留量的測定方法。本文件適用于枸杞中乙基多殺菌素及其代謝物的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。3術(shù)語和定義本文件沒有界定的術(shù)語和定義。4原理試樣用乙腈提取，用石墨碳和N-丙基乙二胺固相萃?。≒SA）分散凈化，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測和確證，外標(biāo)法定量。5試劑與材料除非另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。5.1乙腈（CH3CN）：色譜純。5.2甲醇（CH4O）：色譜純。5.3氯化鈉（NaCl）：分析純。5.4N-丙基-乙二胺吸附劑（PSA）：5.5石墨化碳（GCB）：5.6農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：N-formyl-XDE-175-J（批號TSN105647）、N-demethyl-XDE-175-J（批號TSN030175-0002）、XDE-175-J（CAS號187166-40-1，純度98.1%）、XDE-175-L（批號ZZS-20-065-A8，純度95.0%）。。5.7標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.7.1乙基多殺菌素及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：分別準(zhǔn)確稱取適量的乙基多殺菌素及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.01mg），用甲醇溶解，分別配制成1000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，-18℃下保存。5.7.2乙基多殺菌素及其代謝物混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：根據(jù)需要分別取適量乙基多殺菌素及其代謝物的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用乙腈稀釋成10μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，-18℃下保存。6儀器與設(shè)備6.1高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。6.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。6.3組織搗碎機。6.4高速萬能粉碎機：10000r/min。6.5振蕩器。6.6離心機：4000r/min。6.7渦旋混合器。6.8離心管：50mL，塑料。6.9濾膜：0.22μm，有機相。7分析步驟7.1試樣的制備鮮、干枸杞樣品于-18℃冷凍冰箱中保存。試驗時將鮮、干枸杞樣品取出，鮮樣用高速組織搗碎機打漿，干樣用高速萬能粉碎機（可加少量的液氮）粉碎（30g樣品粉碎時間為30s），分別置于樣品瓶中，-18℃冷凍備用。7.2樣品提取與凈化稱取枸杞鮮果10.00g、干果5.00g（精確至0.01g）于50mL離心管，加入20mL乙腈，在水浴恒溫振蕩器上震蕩40min，加入5.0g氯化鈉，蓋上蓋子，振搖約1min，放入離心機，4000r/min離心5min，吸取2mL上清液過(50mgPSA+10mgGCB)凈化后過0.22μm濾膜，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。7.3測定7.3.1液相色譜參考條件a）色譜柱：InertsilC8-3柱，150mm×2.1mm（i.d），5.0μm，或性能相當(dāng)者。b）柱溫：35℃。c）流速：0.4mL/min。d）流動相梯度：見表1。表1流動相洗脫條件時間，min水，%乙腈，%0.0010900.0010906.001090e）進樣量：1.0μL。7.3.2質(zhì)譜參考條件見附錄A。7.3.3色譜測定與確證根據(jù)試樣中被測物的含量情況，選取響應(yīng)值適宜的標(biāo)準(zhǔn)工作液進行色譜分析。標(biāo)準(zhǔn)工作液和待測樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。在上述儀器條件下，N-formyl-XDE-175-J、N-demethyl-XDE-175-J、XDE-175-J、XDE-175-L的保留時間分別約為1.74、2.84、3.39、3.69min，多反應(yīng)離子監(jiān)測色譜圖參加附錄B中B.1。按照上述條件進行樣品測定，若檢測樣品的色譜峰保留時間與標(biāo)準(zhǔn)品一致，且與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的相對豐度一致，相對豐度允許偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對應(yīng)的被測物。表2定性確證相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度>50%>20%至50%>10%至20%≤10%允許的相對偏差±20%±25%±30%±50%7.4空白試驗除不加試樣外，均按上述操作步驟進行。8結(jié)果計算和表達用色譜數(shù)據(jù)處理或按式（1）計算試樣中各農(nóng)藥的含量，計算結(jié)果需將空白值扣除。……（1）式中：X——試樣中農(nóng)藥的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；A——試樣中農(nóng)藥的峰面積；V——試樣中加入的提取溶液體積，單位為毫升（mL）；CS——標(biāo)準(zhǔn)工作液中農(nóng)藥的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；AS——標(biāo)準(zhǔn)工作液中農(nóng)藥的峰面積；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。注：測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。9精密度9.1在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值與其算術(shù)平均值的比值（百分率），應(yīng)符合附錄D的要求。9.2在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值與其算術(shù)平均值的比值（百分率），應(yīng)符合附錄E的要求。10定量限和回收率10.1定量限本方法對N-formyl-XDE-175-J為0.02mg/kg外，其余均在0.01mg/kg。10.2回收率本方法的添加濃度和回收率范圍見附錄C。附錄A（資料性）質(zhì)譜分析參考條件電離方式：ESI+；檢測方式：MRM；電噴霧電壓：3.5kV；毛細(xì)管傳輸溫度：300℃；碰撞壓力：1.5mTorr；鞘氣：30arb；輔氣：10arb。表A.1乙基多殺菌素及其代謝物的多反應(yīng)離子監(jiān)測分析參數(shù)名稱保留時間/min定性離子對/m/z定量離子對/m/z滯留時間/s碰撞能量/eVXDE-175-J3.39748.4/142.0748.4/203.0748.1/142.00.10.13240N-demethyl-XDE-175-J2.64734.5/128.1734.5/128.1734.5/128.10.10.12222formyl-XDE-175-J1.74762.5/156.1762.5/156.1762.5/156.10.10.11212XDE-175-L3.69760.4/142.0760.4/203.1760.4/142.00.10.13434以上所列參數(shù)是在ThermoTSQQUANTUMACCESSMAX質(zhì)譜儀上完成的，列出試驗用儀器型號僅是為了提供參考，并不涉及商業(yè)目的，鼓勵標(biāo)準(zhǔn)使用者嘗試不同廠家及型號的儀器。附錄B（資料性）乙基多殺菌素及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖圖B.1乙基多殺菌素及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為0.1μg/mL）LC-MS/MS的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖附錄C（資料性）乙基多殺菌素及其代謝物回收率范圍表C.1乙基多殺菌素及其代謝物在枸杞鮮、干果中的添加濃度及回收率范圍（%）名稱添加濃度（mg/kg）枸杞鮮果回收率范圍（%）枸杞干果回收率范圍（%）XDE-175-J0.0182.0～89.8106.3～116.50.180.7～89.1100.3～110.80.584.5～91.282.2～102.6283.4～91.084.4～101.5N-demethyl-XDE-175-J0.0181.9～86.4106.1～116.80.185.8～89.892.8～116.00.580.1～84.283.7～92.1280.1～80.981.1～89.5N-formyl-XDE-175-J0.0281.5～103.0102.9～118.10.180.4～88.689.2～104.60.580.0～82.084.5～97.3280.1～82.382.2～95.3XDE-175-L0.0180.7～88.496.4～101.40.180.6～87.292.0～113.00.582.2～96.988.2～95.4282.5～92.582.2～95.0附錄D（規(guī)范性）實驗室內(nèi)重復(fù)性要求表D.1實驗室內(nèi)重復(fù)性要求被