化學農藥環(huán)境安全評價試驗準則 第10部分：蜜蜂急性毒性試驗 征求意見稿

4化學農藥環(huán)境安全評價試驗準則第10部分：蜜蜂急性毒性試驗警示——使用本標準的人員應有正規(guī)實驗室工作的實踐經驗。本標準并未指出所有可能的安全問題。使用者有責任采取適當?shù)陌踩徒】荡胧?，本文件?guī)定了蜜蜂急性毒性試驗的試驗條件、試劑或材料、儀器設備、樣品、試驗步驟、試驗數(shù)據(jù)處理、質量控制以及試驗報告等的基本本文件適用于為化學農藥登記而進行的蜜蜂急性經口毒性試驗、急性接觸毒性試驗和蜜蜂幼下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格NY/T4195.1農藥登記環(huán)境影響試驗生3.1劑量，用LD50表示.3.253.3成年工蜂Adultforagerhon在蜜蜂種群繁殖期，指蜂群中具備外勤采集能力和行為的蜜3.4將不同劑量的被試物分散在蔗糖溶液中飼喂成年工蜂，藥液消耗完后測定藥液的消耗量，并4.2蜜蜂急性接觸毒性在蜜蜂被麻醉后，將不同濃度試驗藥液點滴在受試蜜蜂的中胸背板處，待溶劑揮發(fā)后，將蜜4.3蜜蜂幼蟲單次暴露毒性試驗），6溫度可出現(xiàn)一定的偏差，但不應低于23℃或高于40℃,且每24h內出現(xiàn)的偏差不應超過一次，除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為6.1.3丙酮（C3H6OCAS號：67-64-1）。6.1.5二甲基亞砜（C2H6OS，CAS號：67-68-5）。6.1.6葡萄糖-D（C6H12O6，CAS號6.1.9蔗糖（C12H22O11，CAS號：57-506.2供試生物4195.1的要求飼養(yǎng)，受試蜜蜂應為健康、大小一致前對蜂群進行了衛(wèi)生處理（如螨蟲或疾病治療），需7該控制器應避免放置在蜂箱邊緣。第2天檢查新卵6.2.2.3移蟲前將移蟲針、人工育工臺基浸沒在75%酒精（體積比）或其他6.3人工飼料6.3.2.1應待酵母提取物、葡萄糖6.3.2.2整個試驗期間，在每次試驗開始前7.1試驗蜂籠（易清潔、通風好，材質可為不銹鋼、金屬絲網(wǎng)、7.2蜂王產卵控制器，構成見附錄A7.6聚苯乙烯或聚丙烯材質的育王臺基，構成見附錄B的圖88.2參比物按正式試驗的條件，以較大間距設置4個～5個處理組，以確定正式試驗的劑量理組，并設空白對照組，使用有機溶劑、乳化劑、分散劑等助溶的還需增設溶劑對照組。每組3可使用有機溶劑、乳化劑或對蜜蜂毒性較低的分散劑（如丙酮、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜等）），99.2蜜蜂急性接觸毒性按正式試驗的條件，以較大間距設置4個～5個處理組，以確定正式設置上限劑量100μga.i./蜂，即在被試物達100μga.i./蜂時仍未見蜜蜂死亡，則無需繼續(xù)試9.3蜜蜂幼蟲單次暴露毒性試驗方法置于同一細胞培養(yǎng)板中，每孔一個育王臺基一只幼蟲。每組處理組用一個細胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)板應按正式試驗的條件，以5倍~10倍幾何級差設置處致，并置于同一細胞培養(yǎng)板中。如果與空白對照組相比，死亡率具有統(tǒng)計學上的顯著性差異，應每次試驗均應設置參比物對照組，樂果暴露a）用無菌水或有機溶劑將被試物溶解并稀釋至不同濃度，將不同濃度被試物溶液分別與人對照組。臺基（參見附錄B）。所有幼蟲每天定時(±0.5h）投喂一次（除第2d），投喂前將飼料預熱至9.3.7.2判斷蜜蜂幼蟲死亡的標準為9.3.8試驗終止在第7天（D7在≤-10℃冷凍培養(yǎng)板以表格形式總結數(shù)據(jù)，給出每個觀察時間，處理組和對照組中每個重復亡率和中毒癥狀。以濃度對數(shù)為橫坐標，以累積死亡百分率對應的概率單位為縱坐標，繪制每個暴露周期內的劑量-效應曲線，并選擇適宜的統(tǒng)計方法和程序估算LD50及其95%置信區(qū)間。P--被試物處理組的死亡百分比（%數(shù)量，D5、D6和D7的死亡數(shù)（即分別為被試學方法（如概率單位法、移動平均、二項式概率等）分析死亡數(shù)據(jù)。在每個觀察時間點繪制劑量11.1蜜蜂急性經口毒性和急性接b)參比物樂果對蜜蜂急性經口試驗結果LD50(24h)內，樂果對蜜蜂急性接觸試驗結果LD50(24h)應在0.10μga.i./蜂～0.30μga.i./蜂范圍之內。a)從第4天（D4）到第7天（D7），對照組b)到第7天（D7）、用參比物對照組中幼蟲累積死亡率應＞52）收集試驗用蜂的采集方法、采集日期、大概日齡（以周計算）、健康狀況、飼養(yǎng)情況、3）試驗給藥方法，包括使用的載體溶劑、使用的試驗溶液的體積、使用的麻醉方式4）試驗設計，例如，所使用試驗濃度和數(shù)量，對照組數(shù)量，各處理籠重復數(shù)以及每籠中蜜蜜蜂拒食情況）、處理組和對照組食物的消耗b）供試生物3）幼蟲試驗培養(yǎng)條件：溫度（平均值、標準偏差、最大值和最小值）、相對濕度及試驗方5）貯備液中被試物的配制濃度和實測濃度，實測濃度與配制濃度的偏B.1幼蟲應在透明的聚苯乙烯材質的育王臺基（內直徑為8.8mm，深度為9.5mm）或聚丙烯材質的育王臺基（內直徑為8.5mm，深度為8.3mm）中飼養(yǎng)。育王臺基在試驗開始時進行殺菌，如可用酒精或其他殺菌溶液浸泡30min，取出后在通風櫥中晾干，將育王臺基每個格放置于48孔細胞培養(yǎng)板的一個小孔中。宜將一片牙科棉吸入加有150g/L甘油的殺菌液500μLB.2將這些培養(yǎng)板放入密封的有機玻璃干燥器。為保持干燥器中空氣水分飽和，其中放一個盛有硫酸鉀（K2SO4）飽和溶液的培養(yǎng)皿。將干燥器置于一個配有強制空氣循環(huán)系統(tǒng)的培養(yǎng)箱中，試B.3蜜蜂幼蟲毒性試驗人工飼養(yǎng)單元孔構成見圖B[1]OECD(1998a)Guideline213:Honeybees,acuteoralto