義翹講堂《基于Beacon®平臺的單B細胞抗體開發(fā)分享》

基于Beacon平臺的單B細胞抗體開發(fā)分享孫月紅北京義翹神州科技股份有限公司義翹神州CONTENTB細胞分化與發(fā)育1義翹神州抗體制備平臺簡介2Beacon簡介3Beacon抗體篩選案例分享4B細胞分化與發(fā)育01義翹神州B細胞分化與發(fā)育中樞發(fā)育外周發(fā)育immatureBmatureBpro-BcommonLymphoidprogenitorgermminalcentercentroblastcentrocytememoryBplasmapre-B義翹神州抗體篩選平臺簡介02義翹神州雜交瘤技術(shù)技術(shù)路線成熟可進行功能性、親和力篩選成本低融合效率低：1/1000周期長物種限制CellfusionPrimaryBCell(HGPRTpos)MyelomaBCell(HGPRTneg)HATselectionHybridomaSingleBcellcultureELISA義翹神州噬菌體展示技術(shù)種屬適用范圍廣可獲取全人抗體成本低易受抗體庫影響親和力有限非天然抗體對tissueRNAcDNASCFVphagemidTransformationinfectionlibrary義翹神州單B細胞技術(shù)種屬適用范圍廣天然抗體對抗體多樣性高開發(fā)周期短抗體親和力高操作復(fù)雜

依賴大型設(shè)備LaserbeamVHDJHCY1VKJKCK義翹神州種屬流式分選——人、鼠、兔...Beacon——鼠細胞類型流式分選——記憶B細胞Beacon——漿細胞抗體功能性驗證流式分選——無Beacon——細胞結(jié)合、競爭檢測通量流式分選——高，10000cell/sBeacon——4塊芯片，80k細胞T1234義翹神州Beacon平臺簡介

02義翹神州義翹神州FlowDiffusion義翹神州

01細胞分離02細胞導入03驗證實驗04導出05ImmunizationandASCEnrichmentNanopenLoadOEPGravityIn-ChannelFluorescent”Bloom”AssayOEPNanopenExportVH/VLrecovery,cloning,expression30-60minutes30-60minutes3-4minutesperNanopenImportExport義翹神州細胞分離細胞導入驗證實驗導出樣本細胞孵育抗體磁性微粒目的細胞免疫磁性捕獲義翹神州細胞分離細胞導入驗證實驗導出義翹神州細胞分離細胞導入驗證實驗導出antigenantibodySecondaryantibodyAvidinbeadscell義翹神州細胞分離細胞導入驗證實驗導出阻斷非阻斷antibodySecondaryantibodyAvidinbeadsAvidinbeadsligandantigen義翹神州細胞分離細胞導入驗證實驗導出cellcellcell熒光配體阻斷非阻斷義翹神州細胞分離細胞導入驗證實驗導出義翹神州Beacon抗體篩選案例分享03義翹神州抗獨特型抗體（Anti-idiotypeantibody,Anti-IDAbs）篩選能夠特異性結(jié)合待測抗體位于可變區(qū)的獨特位(Idiotype)的抗體抗體藥物的藥代動力學（PK）和藥效動力學（PD）分析免疫原性分析：配體中和試驗和抗體阻斷試驗的對照藥物抗體抗獨特型抗體靶點蛋白藥物抗體抗獨特型抗體靶點蛋白抗原阻斷型抗原非阻斷型阻斷抗原抗體結(jié)合

檢測游離型抗體藥不阻斷抗原抗體結(jié)合

檢測抗體藥總量（游離，半結(jié)合，結(jié)合）義翹神州01020304動物免疫（2周）Beacon篩選（1天）抗體基因擴增（1周）抗體表達純化及檢測（2周）全長抗體藥物結(jié)合人IgG結(jié)合靶點蛋白競爭義翹神州導入11978全長抗體藥檢測772人IgG檢測151靶點蛋白競爭檢測競爭54，非競爭97

抗原/IgG結(jié)合檢測競爭抑制率檢測義翹神州修飾性抗體篩選磷酸化多肽篩選非磷酸化多肽篩選靶點導入細胞數(shù)磷酸化+磷酸化+非磷酸化-sinoA1240010963蛋白修飾指的是蛋白質(zhì)經(jīng)過翻譯后進行的基團修飾，常見的有乙?；⒎核鼗?、甲基化、磷酸化等義翹神州CD47抗體篩選CD47bindingDomainofSIRPαBlockstheDON’TEATMEsignalfromCD47butdoesnotbindtoredbloodcellsDeliversanEATMEsignaltoMacrophagesthroughFcγRs:DifferentiatedfromlgG4antibodiesSIRPαFctriggersactivationofFcγRsonmacrophagesHumanlgG1FcFcγRSIRPαFcCD47義翹神州SampleIDIC50(ug/mL)CD47-M0002-10.273CD47-M00650.074CD47-M0137-10.198CD47-M0091-10.183CD47-M0075-10.155CD47-M01200.103CD47-M0126-20.134Control-10.033Control-20.204SampleIDKD(M)kon(1/Ms)kdis(1/s)Control-15.97E-102.62E+051.56E-04Control-21.92E-092.50E+054.81E-04CD47-M0002-13.68E-107.42E+052.73E-04CD47-M00651.11E-095.45E+056.08E-04CD47-M0091-14.52E-103.87E+051.75E-04CD47-M0075-11.44E-094.41E+056.34E-03CD47-M01201.60E-095.75E+059.18E-04CD47-M0126-26.90E-104.40E+053.04E-04Control-1Control-2M0002-1M0065M0091-1M0075-1M0120M0126-2BlockingAffinityBindingwithCellsTargetCellonBeaconPCRELISABlockingWeakBindingwithRBCCD47331255,77.04%108732JurkatRBC義翹神州猴痘A29抗體篩選靶點導入細胞數(shù)抗原+A2911390321WesternBlotAssayELISAAssayTheEC50=23.98ng/ml義翹神州關(guān)于“北京義翹神州”堅持自主研發(fā)生產(chǎn)打造中國生命科學研究“一站式”試劑與服務(wù)支撐平臺人才與設(shè)施榮譽資質(zhì)設(shè)施：---27,100+平米研發(fā)中心

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