常用pGEX載體圖譜

/Rosetta系列的表達(dá)菌株可以提供T7RNA聚合酶，它能表達(dá)PET系列載體上的外源基因。。。pGEX系列載體上的外源基因不需要T7RNA聚合酶，普通的大腸桿菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)即可表達(dá)Tac啟動子是一組由Lac和trp啟動子人工構(gòu)建的雜合啟動子，受Lac阻遏蛋白的負(fù)調(diào)節(jié)，它的啟動能力比Lac和trp都強。其中Tac1是由Trp啟動子的－35區(qū)加上一個合成的46bpDNA片段(包括Pribnow盒)和Lac操縱基因構(gòu)成，Tac12是由Trp的啟動子-35區(qū)和Lac啟動子的-10區(qū)，加上Lac操縱子中的操縱基因部分和SD序列融合而成蛋白標(biāo)簽：Amyctagisapolypeptide

\o"Proteintag"proteintag

derivedfromthe

\o"C-myc"c-myc

geneproductthatcanbeaddedtoaproteinusing

\o"RecombinantDNA"recombinantDNA

technology.Itcanbeusedfor

\o"Affinitychromatography"affinitychromatography,thenusedtoseparaterecombinant,overexpressedproteinfromwildtypeproteinexpressedbythehostorganism.Itcanalsobeusedintheisolationofproteincomplexeswithmultiplesubunits.Amyctagcanbeusedinmanydifferentassaysthatrequirerecognitionbyan

\o"Antibody"antibody.Ifthereisnoantibodyagainstthestudiedprotein,addingamyc-tagallowsonetofollowtheproteinwithanantibodyagainsttheMycepitope.Examplesarecellularlocalizationstudiesbyimmunofluorescenceordetectionby

\o"Westernblotting"Westernblotting.Thepeptidesequenceofthemyc-tagis(in1-and3-lettercodes,respectively):N-EQKLISEEDL-C,N-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-C,whereNstandsfor

\o"Amino-terminus"Amino-terminus

andCstandsfor

\o"Carboxyterminus"Carboxyterminus.Thetagisapproximately1202

\o"Dalton(unit)"Daltons

inatomicmassandhas10aminoacids.Itcanbefusedtothe

\o"C-terminus"C-terminus

andthe

\o"N-terminus"N-terminus

ofaprotein.Itisadvisablenottofusethetagdirectlybehindthesignalpeptideofasecretoryprotein,sinceitcaninterferewithtranslocationintothe

\o"Secretorypathway"secretorypathway.Amonoclonalantibodyagainstthemyc

\o"Epitope"epitope,named9E10,isavailablefromthenon-commercial

\o"DevelopmentalStudiesHybridomaBank"DevelopmentalStudiesHybridomaBankpGEX4T1載體基本信息出品公司:GE別名:pGEX-4T-1,pGEX4T1,pGEX4T1質(zhì)粒類型:大腸桿菌蛋白表達(dá)載體表達(dá)水平:高拷貝啟動子:Tac克隆方法:多克隆位點，限制性內(nèi)切酶載體大小:4969bp5'測序引物與序列:pGEX5':

GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG3'測序引物與序列:pGEX3':CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG載體標(biāo)簽:N-GST載體抗性:Ampicillin氨芐備注:復(fù)制子是pMB1產(chǎn)品目錄號:27-4580-01穩(wěn)定性:瞬時表達(dá)Transient組成型:誘導(dǎo)表達(dá)病毒/非病毒:非病毒pGEX4T1載體質(zhì)粒圖譜和多克隆位點信息原核生物DNA復(fù)制起始點，是DNA鏈上獨特的具有起始DNA復(fù)制功能的堿基序列。大腸桿菌的復(fù)制起點包括OriC和OriHThrombin凝血酶pGEX4T1載體簡介pGEX4T1載體序列LOCUSpGEX-4T-1 4969bp DNAcircular SYNDEFINITIONpGEX-4T-1ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.COMMENT

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VNTAUTHORNAME||FEATURESLocation/Qualifierssource1..4969/organism="pGEX-4T-1"/mol_type="otherDNA"promoter184..212/label="tac_promoter"misc_feature224..246/label="M13_pUC_rev_primer"gene258..977/label="GST(variant)"/gene="GST(variant)"CDS258..977/label="ORFframe3"misc_featurecomplement(1019..1041)/label="pGEX_3_primer"promoter1307..1335/label="AmpR_promoter"gene1377..2237/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS1377..2237/label="ORFframe3"rep_origin2392..3011/label="pBR322_origin"misc_feature3309..4400/label="lacI"CDS3441..4400/label="ORFframe3"promoter4449..4478/label="lac_promoter"misc_feature4492..4514/label="M13_pUC_rev_primer"promoter4513..4531/label="M13_reverse_primer"CDS4523..81/label="ORFframe2"misc_feature4540..4695/label="lacZ_a"promotercomplement(4543..4559)/label="M13_forward20_primer"misc_featurecomplement(4552..4574)/label="M13_pUC_fwd_primer"pGEX4T2載體基本信息出品公司:GE別名:pGEX-4T-2,pGEX4T2,pGEX4T2質(zhì)粒類型:大腸桿菌蛋白表達(dá)載體表達(dá)水平:高拷貝啟動子:Tac克隆方法:多克隆位點，限制性內(nèi)切酶載體大小:4970bp5'測序引物與序列:pGEX5':

GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG3'測序引物與序列:pGEX3':CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG載體標(biāo)簽:N-GST載體抗性:Ampicillin氨芐備注:復(fù)制子是pMB1產(chǎn)品目錄號:27-4581-01穩(wěn)定性:瞬時表達(dá)Transient組成型:誘導(dǎo)表達(dá)病毒/非病毒:非病毒pGEX4T2載體質(zhì)粒圖譜和多克隆位點信息pGEX4T2載體簡介pGEX4T2載體序列LOCUSpGEX-4T-2 4970bp DNAcircular SYNDEFINITIONpGEX-4T-2ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.COMMENT

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VNTAUTHORNAME||FEATURESLocation/Qualifierssource1..4970/organism="pGEX-4T-2"/mol_type="otherDNA"promoter184..212/label="tac_promoter"misc_feature224..246/label="M13_pUC_rev_primer"gene258..978/label="GST(variant)"/gene="GST(variant)"CDS258..974/label="ORFframe3"misc_featurecomplement(1020..1042)/label="pGEX_3_primer"promoter1308..1336/label="AmpR_promoter"gene1378..2238/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS1378..2238/label="ORFframe1"rep_origin2393..3012/label="pBR322_origin"misc_feature3310..4401/label="lacI"CDS3442..4401/label="ORFframe1"promoter4450..4479/label="lac_promoter"misc_feature4493..4515/label="M13_pUC_rev_primer"promoter4514..4532/label="M13_reverse_primer"CDS4524..81/label="ORFframe3"misc_feature4541..4696/label="lacZ_a"promotercomplement(4544..4560)/label="M13_forward20_primer"misc_featurecomplement(4553..4575)/label="M13_pUC_fwd_primer"pGEX4T3載體質(zhì)粒圖譜和多克隆位點信息pGEX4T3載體簡介pGEX4T3載體序列LOCUSpGEX-4T-3 4968bp DNAcircular SYNDEFINITIONpGEX-4T-3ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.COMMENTThiscreatedbyVectorNTICOMMENTVNTAUTHORNAME||FEATURESLocation/Qualifierssource1..4968/organism="pGEX-4T-3"/mol_type="otherDNA"promoter184..212/label="tac_promoter"misc_feature224..246/label="M13_pUC_rev_primer"gene258..976/label="GST(variant)"/gene="GST(variant)"CDS258..980/label="ORFframe3"misc_featurecomplement(1018..1040)/label="pGEX_3_primer"promoter1306..1334/label="AmpR_promoter"gene1376..2236/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS1376..2236/label="ORFframe2"rep_origin2391..3010/label="pBR322_origin"misc_feature3308..4399/label="lacI"CDS3440..4399/label="ORFframe2"promoter4448..4477/label="lac_promoter"misc_feature4491..4513/label="M13_pUC_rev_primer"promoter4512..4530/label="M13_reverse_primer"CDS4522..81/label="ORFframe1"misc_feature4539..4694/label="lacZ_a"promotercomplement(4542..4558)/label="M13_forward20_primer"misc_featurecomplement(4551..4573)/label="M13_pUC_fwd_primer"pGEX6P1載體基本信息出品公司:GE別名:pGEX-6P-1,pGEX6P1,pGEX6P1質(zhì)粒類型:大腸桿菌蛋白表達(dá)載體表達(dá)水平:高拷貝啟動子:Tac克隆方法:多克隆位點，限制性內(nèi)切酶載體大小:4984bp5'測序引物與序列:pGEX5':

GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG3'測序引物與序列:pGEX3':CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG載體標(biāo)簽:N-GST載體抗性:Ampicillin氨芐備注:復(fù)制子是pMB1產(chǎn)品目錄號:27-4597-01穩(wěn)定性:瞬時表達(dá)Transient組成型:誘導(dǎo)表達(dá)病毒/非病毒:非病毒pGEX6P1載體質(zhì)粒圖譜和多克隆位點信息pGEX6P1載體簡介pGEX6P1載體序列LOCUSpGEX-6P-1 4984bp DNAcircular SYNDEFINITIONpGEX-6P-1ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.COMMENT

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VNTAUTHORNAME||FEATURESLocation/Qualifierssource1..4984/organism="pGEX-6P-1"/mol_type="otherDNA"promoter184..212/label="tac_promoter"misc_feature224..246/label="M13_pUC_rev_primer"gene258..992/label="GST"/gene="GST"CDS258..992/label="ORFframe3"misc_feature918..938/label="precision"misc_featurecomplement(1034..1056)/label="pGEX_3_primer"promoter1322..1350/label="AmpR_promoter"gene1392..2252/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS1392..2252/label="ORFframe3"rep_origin2407..3026/label="pBR322_origin"misc_feature3324..4415/label="lacI"CDS3456..4415/label="ORFframe3"promoter4464..4493/label="lac_promoter"misc_feature4507..4529/label="M13_pUC_rev_primer"promoter4528..4546/label="M13_reverse_primer"CDS4538..81/label="ORFframe2"misc_feature4555..4710/label="lacZ_a"promotercomplement(4558..4574)/label="M13_forward20_primer"misc_featurecomplement(4567..4589)/label="M13_pUC_fwd_primer"pET28a載體基本信息出品公司:EMDBiosciences(Novagen)別名:pET28a,pet28a,pET-28a(+)質(zhì)粒類型:大腸桿菌蛋白表達(dá)表達(dá)水平:高克隆方法:多克隆位點，限制性內(nèi)切酶載體大小:5369bp5'測序引物與序列:T7:5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'3'測序引物序列:

T7t:5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'載體標(biāo)簽:N-His,N-Thrombin,N-T7,C-His載體抗性:卡那備注:N端含有Thrombin蛋白酶切位點;pET28a,b,c的差異僅僅存在于多克隆位點處。產(chǎn)品目錄號:69864-3穩(wěn)定性:瞬時表達(dá)Transient組成型:組成型Constitutive病毒/非病毒:非病毒pET28a載體質(zhì)粒圖譜和多克隆位點信息

pET28a載體簡介pET-28a-c(+)載體帶有一個N端的His/Thrombin/T7蛋白標(biāo)簽，同時含有一個可以選擇的C端His標(biāo)簽。pET28a載體的單一的多克隆位點見上面的環(huán)狀質(zhì)粒圖譜。注意：載體序列是以pBR322質(zhì)粒的編碼規(guī)矩進(jìn)行編碼的，所以T7蛋白表達(dá)區(qū)在質(zhì)粒圖譜上面是反向的。T7RNA聚合酶啟動的克隆和表達(dá)區(qū)域在質(zhì)粒圖譜中也被標(biāo)注了出來。質(zhì)粒的F1復(fù)制子是被定向的，所以在T7噬菌體聚合酶的作用下，包含有蛋白編碼序列的病毒粒子能夠產(chǎn)生，并啟動蛋白表達(dá)，同時蛋白表達(dá)將被T7終止子序列(Cat.No.69337-3)的作用下終止蛋白翻譯。pET30a載體基本信息出品公司:EMDBiosciences(Novagen)別名:pET30a,pet30a質(zhì)粒類型:大腸桿菌蛋白表達(dá)表達(dá)水平:高克隆方法:多克隆位點，限制性內(nèi)切酶載體大小:5422bp5'測序引物與序列:T7:5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'3'測序引物序列:

T7t:5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'載體標(biāo)簽:N-His,N-S,N-Thrombin,N-EK,C-His載體抗性:卡那備注:pET30a,b,c的差異只存在于多克隆位點，其他位點不存在。產(chǎn)品目錄號:69909-3穩(wěn)定性:瞬時表達(dá)組成型:組成型病毒/非病毒:非病毒pET30a載體質(zhì)粒圖譜和多克隆位點信息

pET30a載體簡介pET-30a(+)載體攜帶有一個N端的His標(biāo)簽/Thrombin酶切位點/S標(biāo)簽/EK蛋白酶切標(biāo)簽以與一個可選擇的C端His標(biāo)簽。載體的多克隆位點見上面的圖譜。需要注意的是圖譜中的核苷酸編碼順序是以pBR322載體的復(fù)制方向為正方向，所以T7表達(dá)區(qū)域在圖譜中是處于反向的位置。T7RNA聚合酶啟動的克隆和表達(dá)區(qū)域在質(zhì)粒圖譜中也被標(biāo)注了出來。質(zhì)粒的F1復(fù)制子是被定向的，所以在T7噬菌體聚合酶的作用下，包含有蛋白編碼序列的病毒粒子能夠產(chǎn)生，并啟動蛋白表達(dá)，同時蛋白表達(dá)將被T7終止子序列(Cat.No.69337-3)的作用下終止蛋白翻譯。pet32a載體基本信息出品公司:EMDBiosciences(Novagen)別名:pET32a,pet32a質(zhì)粒類型:大腸桿菌蛋白表達(dá)表達(dá)水平:高克隆方法:多克隆位點，限制性內(nèi)切酶載體大小:5900bp5'測序引物:T7：5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'3'測序引物:

T7t:5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'載體標(biāo)簽:thioredoxin(N端);His(中間和C端)載體抗性:氨芐備注:

pET32a載體用于表達(dá)可溶性，具有活性功能的蛋白;pET-32a(+)載體具有N端Thrombin（凝血酶）酶切位點，N端腸激酶酶切位點。pET32啊，pET32b，pET32c載體的差異主要是在于多克隆位點，其他地方完全一致。

產(chǎn)品貨號:69015-3穩(wěn)定性:瞬時表達(dá)組成型:組成型病毒/非病毒:非病毒pet32a載體質(zhì)粒圖譜和多克隆位點信息

pet32a載體簡介pET32系列載體是設(shè)計用來克隆構(gòu)建和高水平融合表達(dá)表達(dá)帶有109個氨基酸Trx標(biāo)簽的蛋白質(zhì)序列。將基因插入到載體的多克隆位點，能夠獲得融合表達(dá)蛋白質(zhì)。同時融合蛋白包含有His標(biāo)簽和S標(biāo)簽，這些可以用于蛋白表達(dá)檢測和純化過程。載體的多克隆位點見上面的圖譜。需要注意的是圖譜中的核苷酸編碼順序是以pBR322載體的復(fù)制方向為正方向，所以T7表達(dá)區(qū)域在圖譜中是處于反向的位置。T7RNA聚合酶啟動的克隆和表達(dá)區(qū)域在質(zhì)粒圖譜中也被標(biāo)注了出來。質(zhì)粒的F1復(fù)制子是被定向的，所以在T7噬菌體聚合酶的作用下，包含有蛋白編碼序列的病毒粒子能夠產(chǎn)生，并啟動蛋白表達(dá)，同時蛋白表達(dá)將被T7終止子序列(Cat.No.69337-3)的作用下終止蛋白翻譯。pET23a載體基本信息出品公司:EMDBiosciences(Novagen)別名:pET23a,pet23a質(zhì)粒類型:大腸桿菌蛋白表達(dá)表達(dá)水平:高克隆方法:多克隆位點，限制性內(nèi)切酶載體大小:3666bp5'測序引物: