高中三年級上學期物理《動物細胞培養(yǎng)的條件和過程》教學課件

動物細胞培養(yǎng)的條件和過程動物細胞培養(yǎng)：是指從動物體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細胞生長和增殖的技術。原理：細胞增殖動物細胞培養(yǎng)所需的基本條件營養(yǎng)條件糖類、氨基酸、無機鹽、維生素等等無菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度、PH和滲透壓適宜的氣體的環(huán)境其他條件一、動物細胞培養(yǎng)的條件

將細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)（糖類、氨基酸、無機鹽、維生素等）按種類和所需量嚴格配制的培養(yǎng)基。1.營養(yǎng)（1）培養(yǎng)基構成：合成培養(yǎng)基血清等一些天然成分＋合成培養(yǎng)基：血清等一些天然成分：含有尚未研究清楚的細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)（2）培養(yǎng)基類型：液體培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）2.無菌、無毒的環(huán)境①對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行滅菌處理。②在無菌環(huán)境下進行操作。③培養(yǎng)液需要定期更換：

清除代謝物，防止細胞代謝物積累對細胞自身造成危害。3.溫度、pH和滲透壓（1）適宜的溫度：哺乳動物細胞培養(yǎng)的溫度多以___________為宜；36.5±0.5℃（2）適宜的pH：多數(shù)動物細胞生存的適宜pH為________7.2-7.4（3）適宜的滲透壓：目的________________________。維持細胞正常的形態(tài)和功能4.氣體環(huán)境（1）氣體組成及作用：O2：CO2：細胞代謝所必需維持培養(yǎng)液的pH（2）具體操作：通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶。

置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。三、動物細胞培養(yǎng)的過程取動物組織制成細胞懸液轉入培養(yǎng)液進行原代培養(yǎng)分瓶進行傳代培養(yǎng)取動物組織制成細胞懸液轉入培養(yǎng)液進行原代培養(yǎng)放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)傳代培養(yǎng)放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞貼壁接觸抑制1.取動物組織（1）取材:一般取材于動物胚胎或幼齡動物的組織、器官。（2）取材原因:細胞分化程度低，增殖能力強，容易培養(yǎng)2.制成細胞懸液（1）將組織分散成單個細胞①方法:機械法用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理一段時間②原因:Ⅰ.從動物體取出的成塊組織中，細胞與細胞靠在一起，彼此限制了生長和增殖；Ⅱ.能使細胞與培養(yǎng)液充分接觸，更易進行物質(zhì)交換。（2）用培養(yǎng)液將細胞制成細胞懸液。

當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞通常會停止分裂增殖。3.原代培養(yǎng)（1）操作方法：將細胞懸液放入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶內(nèi)，置于適宜環(huán)境中培養(yǎng)。（2）體外培養(yǎng)的動物細胞類型①懸浮生長類：能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖。

會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻。②貼壁生長類：

需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖（細胞貼壁），大多數(shù)細胞屬于此類。

除受密度、有害代謝物、營養(yǎng)物質(zhì)影響外，還會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象。接觸抑制：4.分瓶、進行傳代培養(yǎng)（1）需分瓶進行傳代培養(yǎng)的原因：

懸浮培養(yǎng)的細胞會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)等因素而分裂受阻，貼壁細胞在生長增殖時，除受上述因素影響外，還會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象（2）方法：①收集細胞a.懸浮生長類：直接用離心法收集b.貼壁生長類：

重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個細胞，然后再用離心法收集②將收集的細胞制成細胞懸液，分瓶培養(yǎng)重要名詞解釋①原代培養(yǎng)：

通常將________的細胞培養(yǎng)，即動物組織經(jīng)_____后的________稱為原代培養(yǎng)；分瓶之前處理初次培養(yǎng)②傳代培養(yǎng)：將______的細胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)；分瓶后③細胞貼壁：______體外培養(yǎng)的細胞需要___________________才能生長增殖，這類細胞往往貼附在培養(yǎng)瓶的____上，這種現(xiàn)象稱為細胞貼壁；大多數(shù)貼附于某些基質(zhì)表面瓶壁④接觸抑制：

當_____細胞生長到_____________時，細胞通常會_____________；貼壁表面相互接觸停止分裂增殖進行動物細胞培養(yǎng)時常用胰蛋白酶分散細胞，這說明細胞間的物質(zhì)主要是什么成分？用胃蛋白酶行嗎？

用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。

胃蛋白酶作用的適宜pH約為2,當pH大于6時，胃蛋白酶就會失去活性。多數(shù)動物細胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性，所以用胃蛋白酶不行。取動物組織制成細胞懸液轉入培養(yǎng)液進行原代培養(yǎng)分瓶進行傳代培養(yǎng)動物胚胎、幼齡動物機械法或胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理將組織