2024年臨床醫(yī)學(xué)檢驗主管技師考試輔導(dǎo)之檢驗主管技師體驗課

檢查主管技師精選體驗課一、重要血漿蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)、功能和臨床意義

（一）血漿蛋白質(zhì)的構(gòu)成

血漿蛋白質(zhì)是血漿中含量最多、成分極為復(fù)雜、功能廣泛的一類化合物。目前已分離出近于純品者就有200多種。

近年來有許多新技術(shù)用于研究蛋白質(zhì)，這些資料提供了有價值的病理生理信息，有助于疾病的診斷、治療。血漿中重要蛋白質(zhì)的性質(zhì)和功能蛋白質(zhì)參照值*（mg/L）半壽期（d）分子量（萬）等電點含糖量（%）功能前白蛋白200～4002.55.54.70營養(yǎng)指標(biāo)白蛋白35000～515～196.634.7～4.9有較廣泛的載體功能營養(yǎng)指標(biāo)α1-抗胰蛋白酶900～45.184.812APR，抗胰蛋白水解酶先天性缺陷時易導(dǎo)致肺氣腫、肝硬化α1-酸性蛋白酶500～120054.02.7～445APR結(jié)合珠蛋白300～28.5～404.112APR，結(jié)合Hb，溶血時減少α2-巨球蛋白1300～30005725.48抗蛋白水解酶，腎病期增長銅藍(lán)蛋白200～6004.513.24.4APR，含銅轉(zhuǎn)鐵蛋白～360077.965.76負(fù)性APR，運轉(zhuǎn)Fe，在低色素性貧血時增長血紅素結(jié)合蛋白500～11505.7結(jié)合血紅素β2-微球蛋白1～21.18C-反應(yīng)蛋白＜811.56.20APR，防御蛋白*參照值可隨所用測定措施、年齡、性別而有所不一樣（二）功能和臨床意義

1.前白蛋白（PA）

電泳位于清蛋白前面，由肝細(xì)胞合成,半壽期為2～5天。

功能

（1）參與組織修補。

（2）運載蛋白：運送激素和維生素，如運送甲狀腺激素和維生素A。臨床意義

（1）營養(yǎng)不良敏感指標(biāo)；

（2）肝功不全指標(biāo)：在肝炎發(fā)病初期血清前白蛋白濃度下降往往早于其他血清蛋白成分的變化；

（3）急性炎癥、惡性腫瘤、腎炎、創(chuàng)傷時其血清濃度減少。2.視黃醇結(jié)合蛋白（RBP）

由肝臟合成，是分子量21kD，半衰期為12小時。

RBP將視黃醇從肝臟轉(zhuǎn)運到多種靶組織，保護其不被氧化損傷。

在血漿中RBP與TTR（甲狀腺素轉(zhuǎn)運蛋白）以1:1結(jié)合，可防止小分子RBP從腎小球濾過。在靶細(xì)胞內(nèi)，隨TTR-RBP復(fù)合物的降解，視黃醇被攝入細(xì)胞。3.白蛋白（Alb）

Alb由肝細(xì)胞合成。白蛋白是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，占總蛋白的57%～68%。

功能

（1）內(nèi)源性氨基酸營養(yǎng)源；

（2）維持血漿的膠體滲透壓；

（3）具有酸堿緩沖能力，維持血漿的正常pH；

（4）運送和儲存作用：是血漿中重要的非特異性載體。

可運送許多水溶性差的物質(zhì)如膽紅素、膽汁酸鹽、前列腺素、類固醇激素、金屬離子、多種藥物等。

因分子量較小，它在血管外體液中的濃度可作為多種膜屏障完整性的良好指標(biāo)。臨床意義

（1）個體營養(yǎng)狀態(tài)的評價指標(biāo)。

（2）血漿蛋白質(zhì)濃度明顯下降時，可以影響某些內(nèi)源性的代謝物、激素和外源性的藥物在血液循環(huán)中的存在形式。

（3）血漿的清蛋白增高較少見，血液濃縮如嚴(yán)重脫水、休克、飲水局限性等。

（4）濃度減少見于

①白蛋白合成減少，如急、慢性肝?。?/p>

②營養(yǎng)或吸取不良；

③組織損傷或炎癥引起的白蛋白分解代謝增長如大面積組織損傷；

④消耗性疾?。◥盒阅[瘤，嚴(yán)重感染等）；

⑤白蛋白異常丟失，如腎病綜合征、慢性腎炎等；

⑥白蛋白分布異常，如有門靜脈高壓腹水時；

⑦遺傳性疾病等。

已發(fā)既有20種以上白蛋白的遺傳性變異。

簡樸說：攝入局限性；合成障礙；消耗增大；丟失增多；血液稀釋及分布異常；遺傳疾病。4.α1-酸性糖蛋白（AAG）

α1-酸性糖蛋白包括等分子的已糖、已糖胺和唾液酸，是重要的急性時相反應(yīng)蛋白，與抗體的免疫防御功能有關(guān)。

臨床意義：α1-酸性糖蛋白的測定目前重要作為急性時相反應(yīng)的指標(biāo)。

增高：在風(fēng)濕病、惡性腫瘤及心肌梗死患者。

減少：在營養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝損害等。5.α1-抗胰蛋白酶（AAT）

肝臟合成，α1-抗胰蛋白酶是α1-區(qū)帶顯色的重要成分。

是血液中最重要的蛋白酶克制劑，可克制多種蛋白酶的活性。

一般認(rèn)為α1-抗胰蛋白酶的重要功能是對抗由多形核白細(xì)胞吞噬作用時釋放的溶酶體蛋白水解酶。

臨床意義

（1）濃度升高：見于急性炎癥、外科手術(shù)（急性時相反應(yīng)蛋白）妊娠、長期服用可的松、雌激素等藥物也可升高。

（2）減少：可見于胎兒呼吸窘迫綜合征。

α1-抗胰蛋白酶缺陷可引起肝細(xì)胞的損害而致肝硬化，嚴(yán)重的遺傳性缺陷常伴有早年（20～40歲）肺氣腫。6.血紅素結(jié)合蛋白（haptoglobin，Hp）：結(jié)合珠蛋白、觸珠蛋白。

是肝臟合成的一種急性時相反應(yīng)蛋白。

在瓊脂糖凝膠電泳中位于α2區(qū)帶。

功能：

在血漿中結(jié)合游離的血紅蛋白，防止其由腎臟丟失，有效的保留鐵。一分子Hp結(jié)合兩分子Hb。

臨床意義：

（1）急性時相反應(yīng)時濃度增長。

（2）燒傷、腎病綜合征引起大量Alb丟失，可使其含量升高。

（3）血管內(nèi)溶血如溶血性貧血、輸血反應(yīng)、瘧疾時，Hp含量明顯下降。

（4）嚴(yán)重肝病患者Hp合成減少。7.α2-巨球蛋白（α2-MG或AMG）是血漿中分子量最大的蛋白質(zhì)。由肝細(xì)胞與單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)合成。

功能：可與不少蛋白水解酶結(jié)合影響這些酶的活性，選擇性保護某些蛋白酶的活性，也許與免疫反應(yīng)有關(guān)。

臨床意義：

升高：見于低白蛋白血癥（代償，保持血漿滲透壓）；妊娠、口服避孕藥也可使其升高。

減少：胰腺炎及前列腺癌時含量減少。8.銅藍(lán)蛋白（ceruloplasmin，CER）

銅藍(lán)蛋白是肝臟合成的含銅α2-糖蛋白，有基因多形性。

具有氧化酶的功能，對多酚及多胺類底物有催化其氧化的能力。

CER也可使Fe2+氧化成Fe3+運送。

臨床意義：

（1）最特殊的作用在于協(xié)助診斷Wilson病（肝豆?fàn)詈俗冃裕?/p>

Wilson病患者血清總銅濃度不變，銅藍(lán)蛋白含量減少（10ml/dl如下），而伴有血漿可透析的銅（游離銅）含量增長，這是本病的特性。

（2）CER也是一種急性時相反應(yīng)蛋白。

感染、創(chuàng)傷、腫瘤時升高。

肝癌（轉(zhuǎn)移性）、膽石癥、腫瘤引起的膽道阻塞、妊娠、口服避孕藥時含量升高。

（3）減低見于腎病綜合征、嚴(yán)重肝病。9.轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin，TRF）

重要由肝細(xì)胞合成，半壽期為7d。是血漿中重要的含鐵蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)鐵蛋白可逆地結(jié)合多價離子，包括鐵、銅、鋅、鈷等。

功能：以TRF-Fe3+的形式運送內(nèi)源性與外源性鐵，與成熟紅細(xì)胞的生成有關(guān)。TRF的濃度受Fe供應(yīng)的調(diào)整，缺鐵時TRF升高。自由鐵對機體有害，與TRF結(jié)合，還可防止Fe從腎丟失。

臨床意義：

（1）TRF用于貧血的診斷和治療監(jiān)測。

缺鐵性低血色素貧血：TRF升高，但鐵飽和度減少；

再生障礙性貧血：RBC對Fe運用低，TRF下降或正常，但鐵飽和度高。

（2）急性時相反應(yīng)TRF下降，炎癥、惡性病變隨Alb、PA同步下降。

（3）腎病綜合征、營養(yǎng)不良、慢性肝病下降，可作為營養(yǎng)狀態(tài)指標(biāo)。

（4）妊娠、口服避孕藥或注射雌激素可使TRF升高。10.β2-微球蛋白（β2-microglobulin，BMG）

由淋巴細(xì)胞合成的單鏈多肽，是分子量較低的蛋白質(zhì)（分子量1.18萬）。存在于所有有核細(xì)胞表面，尤其是淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，并由此釋放入血。

β2-微球蛋白可透過腎小球，在腎小管幾乎所有被重吸取并被完全降解。

臨床意義：

（1）血中濃度升高，見于腎衰、炎癥、腫瘤。

（2）臨床用于監(jiān)測腎小管功能：腎移植後如有排斥反應(yīng)影響腎小管功能時，尿中BMG排出量增多。

（3）腦脊液中濃度升高，見于急性白血病和淋巴瘤有神經(jīng)系統(tǒng)浸潤。11.C-反應(yīng)蛋白（C-reactiveprotein，CRP）

C-反應(yīng)蛋白是一種能與肺炎鏈球菌細(xì)胞壁C多糖反應(yīng)的急性時相反應(yīng)蛋白。由肝細(xì)胞合成，電泳時多分布在γ區(qū)帶，有時可延伸至β區(qū)帶。廣泛分布于人體體液中，如胸腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、血液等處。

臨床意義：

是第一種被發(fā)現(xiàn)的急性時相反應(yīng)蛋白。是急性時相反應(yīng)的一種極敏捷的指標(biāo)。

濃度升高：急性心肌梗死、創(chuàng)傷、感染、炎癥、外科手術(shù)、腫瘤浸潤、風(fēng)濕病時血漿C-反應(yīng)蛋白濃度迅速地明顯升高可達(dá)正常濃度的數(shù)仟倍。

結(jié)合臨床病史，有助于隨訪病程。小結(jié)

肝臟合成蛋白：PA、Alb、AAT、Hp、CER、CRP、AAG、TRF。

肝外合成：BMG、免疫球蛋白。

有轉(zhuǎn)運功能：PA、RBP、Alb、Hp、CER、TRF。

分子量最?。築MG。

分子量最大：α2-MG。

考綱

●尿液生成

●尿液檢查目的

●尿標(biāo)本采集

●尿標(biāo)本處理

尿液生成

（一）腎組織基本構(gòu)造

腎單位是腎臟生成尿的基本功能單位，由腎小體和腎小管構(gòu)成。腎臟基本構(gòu)造與功能的完整性是完畢泌尿功能的基礎(chǔ)。

（二）尿液生成機制

1.腎小球濾過

（1）屏障作用

①孔徑屏障：

細(xì)胞屏障：直徑50～100nm。

濾過屏障：＞7萬的物質(zhì)（球蛋白、纖維蛋白原等）幾乎不能通過。

②電荷屏障：制止帶負(fù)電荷較多的大分子物質(zhì)的濾過。

（2）濾過膜通透性

重要取決于被濾過物質(zhì)相對分子質(zhì)量大小及其所帶的電荷性質(zhì)。物質(zhì)相對分子質(zhì)量有效半徑增大，濾過量則減低。帶正電荷的物質(zhì)較易被濾過，而帶負(fù)電荷的物質(zhì)則較難通過濾過膜。（3）原尿成分：原尿除了無血細(xì)胞及含很少蛋白質(zhì)外，其他物質(zhì)如葡萄糖、氯化物、無機磷酸鹽、尿素、肌酐和尿酸等的濃度，滲透壓及酸堿度幾乎與血漿相似。

2.腎小管與集合管重吸取

在近曲小管，濾過液中的葡萄糖、小分子蛋白質(zhì)、大部分水等重吸取，而肌酐則幾乎不被重吸取而隨尿排出體外。腎近曲小管是重吸取的重要場所。原尿物質(zhì)，當(dāng)其濃度超過腎小管重吸取能力時，則可出現(xiàn)于終尿中。在抗利尿激素的作用下，遠(yuǎn)曲小管、集合管是腎臟最終實現(xiàn)濃縮和稀釋尿液功能的重要場所。

3.腎小管分泌

腎小管分泌作用包括腎小管和集合管的泌H+、NH4+的作用及Na+-H+互換作用。

尿液檢查目的

尿檢查是臨床上最常用的重要檢測項目之一。

重要用于：

1.泌尿系統(tǒng)疾病診斷和治療監(jiān)測

2.其他系統(tǒng)疾病診斷

3.安全用藥監(jiān)測

4.職業(yè)病輔助診斷

5.健康狀況評估

尿標(biāo)本采集

（一）患者準(zhǔn)備

1.清潔標(biāo)本采集部位；

2.明確標(biāo)識標(biāo)本；

3.防止月經(jīng)、陰道分泌物、糞便、清潔劑等多種物質(zhì)的污染；

4.使用合格容器，細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本，應(yīng)使用消毒培養(yǎng)瓶或無菌、有蓋的容器。

清潔尿：包括中段尿、導(dǎo)尿標(biāo)本或恥骨上穿刺尿。（二）標(biāo)本容器準(zhǔn)備

一般應(yīng)能容納50ml以上尿的容積；必須干燥、清潔，無污染物、無滲漏、無化學(xué)物質(zhì)。

尿液常規(guī)檢查每次留取尿標(biāo)本的量不應(yīng)少于15ml（三）尿標(biāo)本采集種類

尿標(biāo)本種類重要有：

1.晨尿

即清晨起床後第一次排尿時搜集的尿標(biāo)本，即為初次晨尿。這種標(biāo)本尿較為濃縮，可用于腎臟濃縮能力評價。初次晨尿常偏酸性，其中的血細(xì)胞、上皮細(xì)胞、病理細(xì)胞、管型等有形成分，以及如人絨毛膜促性腺激素（hCG）等的濃度較高。但夜尿在膀胱內(nèi)停留時間過長，硝酸鹽及葡萄糖易被分解，不利于檢出在酸性環(huán)境中易變的物質(zhì)，因而推薦采集第2次晨尿替代初次晨尿。

2.隨機尿

這種標(biāo)本不受時間限制。但此尿標(biāo)本僅反應(yīng)某一時段的現(xiàn)象，且易受多種原因（如運動、飲食、用藥、情緒、體位等）的影響，可致尿檢成分濃度減低或增高。3.計時尿按特定期間采集尿標(biāo)本。

（1）3h尿：一般是搜集上午6～9點時段內(nèi)的尿，多用于檢查尿有形成分，如1h尿排泄率檢查等。

（2）餐後尿：一般搜集午餐後至下午2時的尿。這種尿標(biāo)本，有助于檢出病理性糖尿、蛋白尿或尿膽原，有助于肝膽疾病、腎臟疾病、糖尿病、溶血性疾病等的臨床診斷。

（3）24h尿：患者上午8時排尿一次，將膀胱排空，棄去尿，此後搜集各次排出的尿，直至次曰上午8時最終一次排尿的所有尿。尿中某些成分24h不一樣步間內(nèi)的排泄?jié)舛炔灰粯?，如肌酐、總蛋白質(zhì)、電解質(zhì)等。為了較精確地定量分析這些成分，必須采集24h尿。

（4）特殊試驗?zāi)颍孩倌蛉囼灒憾嘤糜谀行韵履蚵芳吧诚到y(tǒng)疾病定位初步判斷。②耐受性試驗?zāi)颍喝缃?jīng)前列腺按摩後排尿搜集尿標(biāo)本。4.無菌尿

常用的措施：

（1）中段尿：留尿前先清洗外陰，在不間斷排尿過程中，棄去前、後時段的尿，用無菌容器接留中間時段的尿。

（2）導(dǎo)管尿、恥骨上穿刺尿：患者發(fā)生尿潴留或排尿困難時采用。

尿標(biāo)本處理

（一）尿標(biāo)本保留

尿標(biāo)本采集後，一般應(yīng)在2h內(nèi)及時送檢，最佳在30min內(nèi)完畢檢查，或進(jìn)行如下處理：

1.保留

多保留在2～8℃冰箱內(nèi)，或保留于冰浴中。低溫可克制微生物迅速生長，可保持尿中

存在的有形成分形態(tài)基本不變。

2.防腐常用的防腐劑：

甲醛：又稱福爾馬林。對尿細(xì)胞、管型等有形成分的形態(tài)構(gòu)造有很好的固定作用。

甲苯：可在尿標(biāo)本表面形成一層薄膜，制止尿中化學(xué)成分與空氣接觸。常用于尿糖、尿蛋白等化學(xué)成分的定性或定量檢查。

麝香草酚：可克制細(xì)菌生長，保留尿有形成分，用于尿顯微鏡檢查、尿濃縮結(jié)核桿菌檢查，以及化學(xué)成分保留。

濃鹽酸：用作定量測定尿17-羥、17-酮、腎上腺素、兒茶酚胺、Ca2+等標(biāo)本防腐。

冰乙酸：用于檢測尿5-羥色胺、醛固酮等的尿防腐。

戊二醛：用于尿沉淀物的固定和防腐。（二）質(zhì)量控制

1.冷藏時間尿標(biāo)本冷藏時間最佳不超過6h。

2.甲醛是一種還原性物質(zhì)，可產(chǎn)生假陽性。用量過大可與尿素產(chǎn)生沉淀，干擾顯微鏡檢查。

3.甲苯用量必須足夠。取樣檢查時，應(yīng)插入穿過甲苯液層，吸取尿。

4.麝香草酚用量過多時，可使尿蛋白加熱乙酸法呈假陽性反應(yīng)，干擾尿膽色素檢出。原尿中不能被腎小管重吸取的成分是

A.葡萄糖

B.肌酐

C.氨基酸

D.小分子蛋白質(zhì)

E.K+

『對的答案』B

『答案解析』在近曲小管，濾過液中的葡萄糖、小分子蛋白質(zhì)、大部分水等被腎小管與集合管重吸取，而肌酐則幾乎不被重吸取而隨尿排出體外。原尿成分與血漿成分不一樣的是

A.葡萄糖

B.肌酐

C.尿酸

D.蛋白質(zhì)

E.鉀的含量

『對的答案』D

『答案解析』原尿除了無血細(xì)胞及含很少蛋白質(zhì)外，其他物質(zhì)如葡萄糖、氯化物、無機磷酸鹽、尿素、肌酐和尿酸等的濃度，滲透壓及酸堿度幾乎與血漿相似。尿常規(guī)分析標(biāo)本最佳在多長時間內(nèi)完畢檢查

A.30分鐘

B.2小時

C.4小時

D.6小時

E.12小時

『對的答案』A

『答案解析』尿標(biāo)本采集後，一般應(yīng)在2h內(nèi)及時送檢，最佳在30min內(nèi)完畢檢查。檢查尿中管型（cast）最合適標(biāo)本為

A.初次晨尿標(biāo)本

B.餐後尿標(biāo)本

C.8小時尿標(biāo)本

D.隨機尿標(biāo)本

E.24小時尿標(biāo)本

『對的答案』A

『答案解析』晨尿即清晨起床後第一次排尿時搜集的尿標(biāo)本，即為初次晨尿。這種標(biāo)本尿較為濃縮，可用于腎臟濃縮能力評價。初次晨尿常偏酸性，其中的血細(xì)胞、上皮細(xì)胞、病理細(xì)胞、管型等有形成分，以及如人絨毛膜促性腺激素等的濃度較高。蛋白尿、糖尿檢查首選的尿液標(biāo)本類型是

A.隨機尿

B.晨尿

C.餐後尿

D.12小時尿

E.24小時尿

『對的答案』C

『答案解析』餐後尿一般搜集午餐後至下午2時的尿。這種尿標(biāo)本有助于檢出病理性糖尿、蛋白尿或尿膽原。常用作尿液有形成分保留的防腐劑是

A.濃鹽酸

B.冰醋酸

C.甲苯

D.甲醛

E.二甲苯

『對的答案』D

『答案解析』甲醛對尿細(xì)胞、管型等有形成分的形態(tài)構(gòu)造有很好的固定作用?；颊撸?，24歲。停經(jīng)約50天，考慮為妊娠。檢查hCG的最佳標(biāo)本是

A.12h尿

B.晨尿

C.餐後尿

D.中段尿

E.3h尿

『對的答案』B

『答案解析』初次晨尿常偏酸性，其中的血細(xì)胞、上皮細(xì)胞、病理細(xì)胞、管型等有形成分，以及如人絨毛膜促性腺激素等的濃度較高?；颊撸?，因尿頻、尿急、尿痛就診，細(xì)菌學(xué)檢查時最合適的尿標(biāo)本是

A.晨尿

B.隨機尿

C.清潔中段尿

D.12h尿

E.24h尿

『對的答案』C

『答案解析』中段尿：留尿前先清洗外陰，在不間斷排尿過程中，棄去前、後時段的尿，用無菌容器接留中間時段的尿。屬于無菌尿中的一種。細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆?？乖?，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒後，它們與對應(yīng)抗體（或抗原）在合適電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)。第一節(jié)凝集反應(yīng)的特點

凝集試驗是一種定性的檢測措施，即根據(jù)凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)與否鑒定成果陰性或陽性；

也可進(jìn)行半定量檢測，即將抗體作一系列稀釋，與抗原結(jié)合產(chǎn)生凝集的最高稀釋倍數(shù)作為其效價或滴度。

凝集反應(yīng)分為兩個階段：①抗原抗體的特異性結(jié)合；②出現(xiàn)可見的顆粒凝聚。第二節(jié)直接凝集反應(yīng)

一、原理

細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在合適的電解質(zhì)參與下可直接與對應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集。參與凝集反應(yīng)的抗原稱凝集原，抗體則稱為凝集素。

二、措施

有玻片法和試管法兩類。

（一）玻片凝集試驗重要用于抗原的定性分析，短時間便能觀測成果。

一般用來鑒定菌種或分型；也用于人類ABO血型的測定。

（二）試管凝集試驗是用定量抗原懸液與一系列梯度倍比稀釋的待檢血清混合，保溫靜置後，根據(jù)每管內(nèi)顆粒凝集的程度，以判斷待檢血清中有無對應(yīng)抗體及其效價。

可以用來協(xié)助臨床診斷或流行病原調(diào)查研究。例如肥達(dá)試驗、外斐試驗、輸血時也常用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗。第三節(jié)間接凝集反應(yīng)

間接凝集反應(yīng)是將可溶性抗原（或抗體）先吸附于合適大小的顆粒性載體表面，然後與對應(yīng)抗體（或抗原）作用，在合適電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象。

一、間接凝集反應(yīng)的類型

（一）正向間接凝集反應(yīng)可溶性抗原致敏載體，用以檢測標(biāo)本中待測抗體的凝集反應(yīng)，稱為正向間接凝集反應(yīng)。

（二）反向間接凝集反應(yīng)特異性抗體致敏載體，用以檢測標(biāo)本中待測抗原的凝集反應(yīng)，稱為反向間接凝集反應(yīng)。

（三）間接凝集克制反應(yīng)先將可溶性抗原（或抗體）與對應(yīng)的抗體（或抗原）混合，然後再加入抗原（或抗體）致敏的載體顆粒，若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，則闡明標(biāo)本中不存在相似抗原，抗體試劑未被結(jié)合。若存在相似抗原，抗體與之結(jié)合，凝集反應(yīng)被克制，稱為正向（或反向）間接凝集克制試驗。間接血凝克制試驗可用于檢測抗體也可測定抗原。

（四）協(xié)同凝集反應(yīng)協(xié)同凝集反應(yīng)與間接凝集反應(yīng)的原理相類似，但所用載體為金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）。SPA具有與IgG的Fc段結(jié)合的特性，因此當(dāng)這種葡萄球菌與IgG抗體連接時，就成為抗體致敏的顆粒載體。如與對應(yīng)抗原接觸，即出現(xiàn)反向間接凝集反應(yīng)。協(xié)同凝集反應(yīng)也合用于細(xì)菌病毒的直接檢測。

二、間接血凝試驗

（一）原理：抗原（或抗體）包被于紅細(xì)胞表面，成為致敏載體，然後與對應(yīng)的抗體（或抗原）結(jié)合，從而使紅細(xì)胞被動的凝聚在一起，出現(xiàn)可見的紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。

（二）載體：最常用的為綿羊、家兔、雞的紅細(xì)胞及O型人紅細(xì)胞。

致敏的新鮮紅細(xì)胞只能使用2～3天。因此在致敏前先將紅細(xì)胞醛化，可長期保留而不溶血。常用的醛類有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。紅細(xì)胞經(jīng)醛化後體積略有增大，兩面突起呈圓盤狀。

（三）致敏：致敏用的抗原或抗體規(guī)定純度高，并保持良好的免疫活性。

（四）血凝試驗：可在微量滴定板或試管中進(jìn)行，將標(biāo)本倍比稀釋，一般為1:64。凡紅細(xì)胞沉積于孔底，集中呈一圓點的為不凝集（－）。如紅細(xì)胞凝集，則分布于孔底周圍。以＋＋凝集（紅細(xì)胞沉積于管底呈環(huán)狀，四面有凝集的小塊）的孔為滴度終點。

三、膠乳凝集試驗

是一種間接凝集試驗，載體為聚苯乙烯膠乳，帶有負(fù)電荷，可物理性吸附蛋白分子，但這種結(jié)合牢固性差。

膠乳凝集試驗分試管法和玻片法兩種。

四、明膠凝集試驗

是一種間接凝集試驗，將病毒抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒上，當(dāng)致敏顆粒與樣品血清作用時，若血清具有抗病毒抗體則可形成肉眼可見的粉紅色凝集。

該措施應(yīng)用于HIV-1抗體和抗精子抗體檢測等。

五、間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用

（一）抗原的檢測反向間接凝集試驗用于檢測病原體可溶性抗原，也可用于檢測多種蛋白質(zhì)成分。

（二）抗體的檢測可用于檢測細(xì)菌、病毒和寄生蟲等感染後產(chǎn)生的抗體，例如間接凝集試驗或明膠顆粒凝集試驗用于檢測抗人類免疫缺陷病毒（HIV）抗體以診斷艾滋病、膠乳凝集試驗用于檢測抗溶血素O等。第四節(jié)自身紅細(xì)胞凝集試驗

原理：抗人O型紅細(xì)胞的單克隆抗體能與任何種血型的紅細(xì)胞結(jié)合，但不引起凝集反應(yīng)，這種抗體與另一特異性抗體（或抗原）連接成，檢測標(biāo)本中的抗原（或抗體）。該反應(yīng)中的紅細(xì)胞是未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅細(xì)胞，因此反應(yīng)中的標(biāo)本為受檢者的全血。自身紅細(xì)胞凝集可用于HIV抗體、HBsAg的檢測。第五節(jié)抗球蛋白試驗

又稱Coombs試驗，檢測抗紅細(xì)胞的不完全抗體。

直接Coombs試驗——檢測紅細(xì)胞上的不完全抗體。

間接Coombs試驗——檢測游離在血清中的不完全抗體。

該試驗應(yīng)用于血液病的檢測：如自身免疫性溶血性貧血、藥物誘導(dǎo)的溶血、新生兒溶血癥等。還可分析結(jié)合于紅細(xì)胞上的不完全抗體的免疫球蛋白亞類。顆粒性抗原在合適的電解質(zhì)參與下與對應(yīng)的抗體結(jié)合，出現(xiàn)凝集的試驗稱為

A.正向間接凝集反應(yīng)

B.反向間接凝集反應(yīng)

C.直接凝集反應(yīng)

D.協(xié)同凝集法

E.間接凝集機制反應(yīng)

『對的答案』C

『答案解析』直接凝集反應(yīng)：細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在合適的電解質(zhì)參與下可直接與對應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集。如下物質(zhì)屬于顆粒性抗原的有

A.破傷風(fēng)桿菌及其外毒素

B.SRBC和破傷風(fēng)外毒素

C.SRBC和傷寒沙門菌

D.白喉棒狀桿菌和青霉素

E.糖蛋白和脂蛋白

『對的答案』C

『答案解析』顆粒性抗原：如多種細(xì)胞、細(xì)菌、寄生蟲等皆為顆粒性抗原。目前試驗室常采用的以肺炎支原體細(xì)胞膜成分致敏人工明膠粒子檢測血清中對應(yīng)的抗體屬于

A.協(xié)同凝集反應(yīng)

B.反向間接凝集反應(yīng)

C.間接凝集克制反應(yīng)

D.明膠凝集試驗

E.直接凝集反應(yīng)

『對的答案』D

『答案解析』明膠凝集試驗是一種間接凝集試驗，將病毒抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒上，當(dāng)致敏顆粒與樣品血清作用時，若血清具有抗病毒抗體則可形成肉眼可見的粉紅色凝集。下述試驗措施中，不能用于可溶性抗原檢出的是

A.間接血凝試驗

B.反向間接凝集試驗

C.間接凝集克制試驗

D.直接凝集試驗

E.間接凝集試驗

『對的答案』D

『答案解析』直接凝集試驗是細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在合適的電解質(zhì)參與下可直接與對應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集。檢測抗紅細(xì)胞不完全抗體可使用的凝集反應(yīng)為

A.協(xié)同凝集反應(yīng)

B.間接凝集反應(yīng)

C.間接血凝試驗

D.Coombs試驗

E.直接凝集反應(yīng)

『對的答案』D

『答案解析』Coombs試驗，檢測抗紅細(xì)胞的不完全抗體。有關(guān)不完全抗體，下列說法對的的是

A.不能與抗原結(jié)合

B.與抗原結(jié)合并出現(xiàn)凝集

C.與抗原結(jié)合不出現(xiàn)凝集

D.常為IgM類抗體

E.為多克隆抗體

『對的答案』C

『答案解析』不完全抗體能與抗原牢固結(jié)合，但因分子量較小，不能與抗原結(jié)合并出現(xiàn)凝集。膠乳凝集試驗屬于

A.沉淀反應(yīng)

B.直接凝集反應(yīng)

C.間接凝集反應(yīng)

D.間接血凝試驗

E.補體結(jié)合試驗

『對的答案』C

『答案解析』膠乳凝集試驗是一種間接凝集試驗，載體為聚苯乙烯膠乳，帶有負(fù)電荷，可物理性吸附蛋白分子，但這種結(jié)合牢固性差。臨床中，不能用直接Coombs試驗進(jìn)行檢測的疾病是

A.新生兒溶血癥

B.缺鐵性貧血

C.自身免疫性溶血癥

D.檢測母體Rh（D）抗體

E.藥物誘導(dǎo)溶血

『對的答案』B

『答案解析』缺鐵性貧血是鐵劑缺乏導(dǎo)致的，不能用直接Coombs試驗檢測。臨床中進(jìn)行肥達(dá)試驗最常采用的措施為

A.正向間接凝集反應(yīng)

B.反向間接凝集反應(yīng)

C.玻片凝集法

D.試管凝集法

E.間接凝集克制反應(yīng)

『對的答案』D

『答案解析』直接凝集反應(yīng)試管凝集法可以用來協(xié)助臨床診斷或流行病原調(diào)查研究。例如肥達(dá)試驗、外斐試驗、輸血時也常用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗。將VDRL抗原吸附于活性炭顆粒表面檢測人血清中的梅毒螺旋體血清反應(yīng)素試驗屬于

A.正向間接凝集反應(yīng)

B.反向間接凝集反應(yīng)

C.協(xié)同凝集反應(yīng)

D.直接凝集反應(yīng)

E.間接凝集克制反應(yīng)

『對的答案』A

『答案解析』將VDRL抗原吸附于活性炭顆粒表面檢測人血清中的梅毒螺旋體血清反應(yīng)素試驗是通過抗原檢測抗體，屬于正向間接凝集反應(yīng)。臨床中進(jìn)行外斐試驗最常采用的措施為

A.正向間接凝集反應(yīng)

B.反向間接凝集反應(yīng)

C.協(xié)同凝集反應(yīng)

D.試管凝集反應(yīng)

E.間接凝集克制反應(yīng)

『對的答案』D

『答案解析』直接凝集反應(yīng)試管凝集法可以用來協(xié)助臨床診斷或流行病原調(diào)查研究。例如肥達(dá)試驗、外斐試驗、輸血時也常用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗。臨床輸血時用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗屬于

A.正向間接凝集反應(yīng)

B.反向間接凝集反應(yīng)

C.協(xié)同凝集反應(yīng)

D.試管凝集反應(yīng)

E.間接凝集克制反應(yīng)

『對的答案』D

『答案解析』臨床輸血時用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗直接用顆?？乖?xì)胞）測定抗體，屬于試管凝集反應(yīng)。以自身紅細(xì)胞或“O”型紅細(xì)胞檢測患者血清中冷凝集素的試驗屬于

A.正向間接凝集反應(yīng)

B.反向間接凝集反應(yīng)

C.協(xié)同凝集反應(yīng)

D.直接凝集反應(yīng)

E.間接凝集克制反應(yīng)

『對的答案』D

『答案解析』以自身紅細(xì)胞或“O”型紅細(xì)胞檢測患者血清中冷凝集素的試驗是用顆粒抗原（紅細(xì)胞）測定抗體，屬于直接凝集反應(yīng)。臨床中常用的以紅細(xì)胞包被抗原檢測人血清中的梅毒螺旋體抗體的試驗屬于

A.正向間接凝集反應(yīng)

B.反向間接凝集反應(yīng)

C.協(xié)同凝集反應(yīng)

D.直接凝集反應(yīng)

E.間接凝集克制反應(yīng)

『對的答案』A

『答案解析』以紅細(xì)胞包被抗原檢測人血清中的梅毒螺旋體抗體的試驗是用抗原檢測抗體，屬于正向間接凝集反應(yīng)。葡萄球菌——分類

按色素及生化反應(yīng)

金黃色葡萄球菌：金黃色。

表皮葡萄球菌：白色。

腐生葡萄球菌：檸檬色。

按血漿凝固酶

凝固酶陽性葡萄球菌：金黃色葡萄球菌。

凝固酶陰性葡萄球菌：表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。葡萄球菌——生物學(xué)特性

形態(tài)與構(gòu)造

形態(tài)：球形。

大?。?.5～1.5μm（中等）。

排列：葡萄狀。

染色：G+。

特殊構(gòu)造：無鞭毛和芽胞，個別有莢膜。

培養(yǎng)特性

營養(yǎng)規(guī)定：一般。

氣體環(huán)境：需氧或兼性厭氧。

溫度環(huán)境：35～37℃；pH7.4。

菌落特性：一般瓊脂平板24～48小時培養(yǎng)，形成直徑2～3mm、圓形、凸起、表面光滑濕潤、邊緣整潔不透明、色素、溶血環(huán)。

抗原

蛋白抗原：完全抗原，有種屬特異性。結(jié)合在細(xì)胞壁的肽聚糖部分，具有抗吞噬作用，稱葡萄球菌A蛋白。

多糖抗原：半抗原，具有型特異性，有三種：①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。

抵御力：耐熱，耐干燥，耐高鹽，是抵御力最強的無芽胞細(xì)菌。葡萄球菌——微生物檢查及鑒定

標(biāo)本采集：膿汁、滲出液、血液、尿液、糞便、痰液等。

形態(tài)學(xué)檢查：革蘭陽性球菌呈葡萄串狀排列。

分離培養(yǎng)：

血標(biāo)本肉湯增菌35℃24h後或膿汁、尿道分泌物、腦脊液離心沉淀物接種血瓊脂平板。35℃18～24h，可見經(jīng)典產(chǎn)生不一樣色素的菌落。金黃色葡萄球菌在菌落周圍有透明溶血環(huán)。

糞便、嘔吐物接種高鹽卵黃或高鹽甘露醇瓊脂平板，經(jīng)35℃18～24h培養(yǎng)，可形成細(xì)小菌落，48h後形成經(jīng)典菌落。生化試驗（鑒定）觸酶試驗血漿凝固酶試驗甘露醇發(fā)酵試驗新生霉素敏感試驗金黃色葡萄球菌++++表皮葡萄球菌+-+腐生葡萄球菌+--耐藥性檢測：

苯唑西林耐藥的葡萄球菌（MRS），耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐萬古的金黃色葡萄球菌（VRSA），耐萬古的表皮葡萄球菌（VRSE）。葡萄球菌——致病性及臨床意義感染類型疾病致病原因侵襲性疾?。ɑ撔愿腥荆?/p>

皮膚軟組織感染：如毛囊炎、癤、癰等血漿凝固酶、葡萄球菌溶血素、殺白細(xì)胞素全身性感染：如敗血癥、膿毒血癥、骨髓炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎等醫(yī)院內(nèi)感染毒素性疾病食物中毒，急性胃腸炎腸毒素、表皮溶解毒素、毒性休克綜合征毒素燙傷樣皮膚綜合征中毒性休克綜合征葡萄球菌性腸炎（假膜性腸炎）金黃色葡萄球菌：引起癤、癰、外科傷口、創(chuàng)傷的局部化膿性感染，播散入血後可引起深部組織的化膿性感染；其產(chǎn)生的腸毒素可引起食物中毒，體現(xiàn)為急性胃腸炎。

表皮葡萄球菌：皮膚正常菌群，是導(dǎo)致血培養(yǎng)污染的常見細(xì)菌。已成為醫(yī)院感染的重要條件致病菌。

腐生葡萄球菌：導(dǎo)致尿路感染的常見病原菌之一。鏈球菌——分類

按血瓊脂平板溶血現(xiàn)象：

甲型（α）溶血性鏈球菌：草綠色鏈球菌，條件致病菌。

乙型（β）溶血性鏈球菌：溶血性鏈球菌，致病菌。

丙型（γ）鏈球菌：非致病菌。

按細(xì)胞壁抗原（C抗原）分類：A、B、C、D……共18個群，對人致病的90%為A群。

鏈球菌——生物學(xué)特性

形態(tài)與構(gòu)造

形態(tài)：球形。

大?。?.8～1.0μm。

排列：鏈狀。

染色：G+。

特殊構(gòu)造：無鞭毛和芽胞，個別有莢膜。

培養(yǎng)特性

營養(yǎng)規(guī)定：較高。

氣體環(huán)境：需氧或兼性厭氧，5%CO2最佳。

溫度環(huán)境：35～37℃；pH7.4～7.6。

菌落特性：血清肉湯中，溶血性菌株呈絮狀或顆粒狀沉淀生長。不溶血菌株均勻渾濁生長。

血瓊脂平板上培養(yǎng)可形成灰白色、圓形、透明或半透明，似針尖大小、凸起，菌落周圍可出現(xiàn)α-溶血或β-溶血，也可不出現(xiàn)溶血。

抗原性：細(xì)胞壁抗原（即C抗原）。

抵御力：不強，對多種常用消毒劑敏感，60℃加熱30min即可殺滅。鏈球菌——微生物檢查及鑒定

標(biāo)本采集：膿汁、咽拭、痰、血、尿等標(biāo)本。

形態(tài)學(xué)檢查：革蘭染色陽性，圓形呈鏈狀排列。

分離培養(yǎng)：

血標(biāo)本：肉湯培養(yǎng)基，分別置需氧和厭氧環(huán)境中增菌，然後接種于血平板，置需氧和厭氧環(huán)境中培養(yǎng)。

膿汁和咽拭標(biāo)本：接種血平板并涂片染色鏡檢，見形態(tài)酷似鏈球菌，并革蘭陽性。上述的培養(yǎng)物經(jīng)35℃18～24h培養(yǎng)後，觀測菌落特性和溶血狀況。（甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌可產(chǎn)生α-溶血）生化試驗（鑒定）觸酶試驗桿菌肽敏感試驗CAMP試驗?zāi)懼呷~苷試驗奧普托欣試驗?zāi)懼芫R尿酸鹽水解試驗A群鏈球菌-+B群鏈球菌-++D群鏈球菌-可生長肺炎鏈球菌-敏感甲型（α）溶血性鏈

球菌--其他試驗：直接檢測抗原。鏈球菌——致病性及臨床意義

A群、B群及肺炎鏈球菌是鏈球菌屬的3種重要致病菌。感染類型疾病病原菌致病原因急性化膿性感染丹毒、癰、蜂窩組織炎A群侵襲性：

透明質(zhì)酸酶

鏈激酶

鏈道酶

M蛋白咽炎、鼻竇炎、中耳炎腦膜炎、產(chǎn)褥熱猩紅熱變態(tài)反應(yīng)性疾病風(fēng)濕熱和腎小球腎炎毒素：

鏈球菌溶血素

致熱外毒素其他感染亞急性心內(nèi)膜炎草綠色鏈球菌（條件致?。┬律鷥悍窝?、腦膜炎和敗血癥B群鏈球菌呼吸道和泌尿道感染D群鏈球菌肺炎鏈球菌——生物學(xué)特性

形態(tài)與構(gòu)造

形態(tài)：革蘭陽性球菌。

大小：0.5～1.25μm。

排列：矛尖狀，鈍面成雙排列，有時呈短鏈狀。

染色：G+。

特殊構(gòu)造：有莢膜，無鞭毛，無芽胞。

培養(yǎng)特性

營養(yǎng)規(guī)定：較高。

氣體環(huán)境：需氧或兼性厭氧。

溫度環(huán)境：35～37℃；pH7.6～8.0。

菌落特性：在肉湯及瓊脂培養(yǎng)基上生長不良，在含3%～5%兔或羊血清肉湯中生長良好。在血瓊脂平板上可形成灰色扁平、中心凹陷直徑為0.5～1.0mm的菌落（臍窩狀），周圍有草綠色溶血圈。在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，呈均勻混濁，培養(yǎng)時間過長，可因自溶，培養(yǎng)液變澄清，管底沉淀。

抗原性：莢膜多糖抗原。

抵御力：較弱。肺炎鏈球菌——微生物檢查及鑒定

標(biāo)本采集

形態(tài)學(xué)檢查：革蘭陽性矛尖狀雙球菌。

分離培養(yǎng)：

血液、腦脊液經(jīng)葡萄糖硫酸鎂肉湯增菌後，可呈均勻混濁，并且有綠色熒光。

膿汁或腦脊液沉渣接種于血瓊脂，置5%～10%C02環(huán)境中，經(jīng)35℃18～24h培養(yǎng)後觀測菌落。

生化試驗（鑒定）觸酶試驗動物試驗莢膜腫脹試驗奧普托欣試驗?zāi)懼芙饩仗前l(fā)酵試驗肺炎鏈球菌-敏感+敏感++甲型（α）溶血性鏈球菌

草綠色鏈球菌-耐藥--肺炎鏈球菌——致病性及臨床意義

致病物質(zhì)：莢膜、溶血素。

所致疾?。捍笕~性肺炎、支氣管炎?？衫^發(fā)胸膜炎、膿胸，也可引起中耳炎、鼻竇炎、腦膜炎及敗血癥。<大綱要點>

一、血紅蛋白的構(gòu)造與功能

二、血紅蛋白異常的檢查及其應(yīng)用

三、血紅蛋白病的試驗診斷一、血紅蛋白的構(gòu)造與功能

（1）血紅素血紅素是Hb、肌紅蛋白、多種酶（如過氧化氫酶）和多種細(xì)胞色素的輔基，其合成的場所重要在骨髓內(nèi)的幼紅細(xì)胞和肝細(xì)胞線粒體。與臨床有關(guān)的是尿卟啉、糞卟啉和原卟啉，當(dāng)卟啉代謝障礙時，血紅素合成不全，并也許產(chǎn)生卟啉病。

（2）珠蛋白人類的珠蛋白肽鏈有α、β、γ、δ、ε、ζ鏈；這些肽鏈按四級構(gòu)造形成Hb。

（3）生理性血紅蛋白幾種正常生理性血紅蛋白在胎兒時期和出生後有明顯的不一樣。新生兒期內(nèi)HbF（α2γ2）仍高，後來2～4個月漸下降，1歲左右靠近成人水平。成人血紅蛋白HbA（α2β2）出生後逐漸增多，占95%～97%，HbA2（α2δ2）出生後占1.2%～3.5%。（純熟掌握）

血紅蛋白構(gòu)造及功能示意圖

正常生理性珠蛋白鏈的合成二、血紅蛋白異常的檢查及其應(yīng)用

1.血紅蛋白電泳（原理理解，其他掌握）

2.抗堿血紅蛋白測定（純熟掌握）

3.異丙醇沉淀試驗（掌握）

4.紅細(xì)胞包涵體試驗（掌握）

5.HbA2測定（純熟掌握）

6.珠蛋白肽鏈分析（掌握）

7.紅細(xì)胞鐮變試驗（掌握）1.血紅蛋白電泳

原理：根據(jù)不一樣的血紅蛋白帶有不一樣的電荷，等電點不一樣，在一定的pH緩沖液中，緩沖液的pH不小于Hb的等電點時其帶負(fù)電荷，電泳時在電場中向陽極泳動，反之，Hb帶正電荷向陰極泳動。經(jīng)一定電壓和時間的電泳，不一樣的血紅蛋白所帶電荷不一樣、相對分子質(zhì)量不一樣，其泳動方向和速度不一樣，可分離出各自的區(qū)帶，同步對電泳出的各區(qū)帶進(jìn)行電泳掃描，可進(jìn)行多種血紅蛋白的定量分析。

參照值：

pH8.6TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳，正常血紅蛋白電泳區(qū)帶：HbA＞95%、HbF＜2%、HbA2為1.0%～3.1%。pH8.6TEB緩沖液適合于檢出HbA、HbA2、HbS、HbC，但HbF不易與HbA分開，HbH與HbBarts不能分開和顯示，應(yīng)再選擇其他緩沖液進(jìn)行電泳分離。

pH6.5TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳，重要用于HbH和HbBarts的檢出。HbH等電點為5.6，在pH6.5TEB緩沖液中電泳時泳向陽極，HbBarts則在點樣點不動，而其他的血紅蛋白都向陰極移動。臨床意義

通過與正常人的血紅蛋白電泳圖譜進(jìn)行比較，可發(fā)現(xiàn)異常血紅蛋白區(qū)帶，如HbH、HbE、HbBarts、HbS、HbD和HbC等。

HbA2增多，見于β珠蛋白合成障礙性貧血，為雜合子的重要試驗室診斷指標(biāo)。HbE病時也在HbA2區(qū)帶位置處增長，但含量很大（在10%以上）。HbA2輕度增長亦可見于肝病、腫瘤和某些血液病。

β-地貧血紅蛋白電泳成果示意圖2.抗堿血紅蛋白測定

原理：又稱堿變性試驗。胎兒血紅蛋白（HbF）具有抗堿和抗酸作用。其抗堿作用比HbA更強。將待檢的溶血液與一定量的NaOH溶液混合，作用1min後加入半飽和硫酸銨中斷堿變性反應(yīng)。HbF抗堿變性作用強，沒有變性的存在于上清液中，HbA變性沉淀，取上清液于540nm處測定吸光度，檢測出HbF的濃度。此試驗也稱為堿變性試驗，其檢測的是抗堿血紅蛋白，除HbF外，HbBarts和部分HbH也具有抗堿能力，需通過電泳鑒別。

參照值：新生兒＜40%，2歲後來至成人＜2.5%。

臨床意義：珠蛋白生成障礙性貧血HbF增長，持續(xù)性胎兒血紅蛋白癥HbF高至100%。

某些疾病時HbF相對增長，包括惡性疾病如放射療法後骨髓纖維化、惡性腫瘤骨髓轉(zhuǎn)移、急性或慢性白血病、漿細(xì)胞瘤；非惡性疾病有再生障礙性貧血、純紅細(xì)胞再障、PNH、未治療惡性貧血、卟啉病等。3.異丙醇沉淀試驗

原理：不穩(wěn)定血紅蛋白較正常血紅蛋白更輕易裂解，在異丙醇這種能減少血紅蛋白分子內(nèi)部的氫鍵的非極性溶劑中，不穩(wěn)定血紅蛋白更快地沉淀。通過觀測血紅蛋白液在異丙醇中的沉淀現(xiàn)象對不穩(wěn)定血紅蛋白進(jìn)行篩檢。

成果：正常人血紅蛋白液為陰性（30min內(nèi)不沉淀）。

臨床意義：不穩(wěn)定血紅蛋白（包括HbH）于5min時出現(xiàn)沉淀，20min內(nèi)沉淀逐漸增長，甚至成絮狀或粗顆粒狀。血液中具有較多HbF、HbH、HbE時也可出現(xiàn)陽性成果。

4.紅細(xì)胞包涵體試驗

原理：將煌焦油藍(lán)液與新鮮血液一起孵育，不穩(wěn)定血紅蛋白易變性沉淀形成包涵體。

成果：陰性。

臨床意義：不穩(wěn)定血紅蛋白病、HbH病呈陽性。

紅細(xì)胞包涵體形成試驗陽性5.HbA2測定

原理：同血紅蛋白電泳。

參照值：1.2%～3.5%。

臨床意義：同血紅蛋白電泳。

6.珠蛋白肽鏈分析

（1）原理：尿素或?qū)β裙郊姿崮芷茐难t蛋白的空間構(gòu)造，血紅蛋白的珠蛋白可被裂解成肽鏈亞單位，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳可分離出各肽鏈區(qū)帶。

參照值：HbA裂解後有四條帶，可泳出四條帶，分別為β、HbA、HbA2、α帶。

（2）臨床意義：

①若有異常血紅蛋白，則出現(xiàn)異常Hb和異常肽鏈。

②肽鏈合成速率檢測對地中海貧血診斷有參照價值。

③聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴增結(jié)合等位特異寡核苷酸（ASO）探針雜交診斷法（PCR-ASO法）是目前采用的最常用的診斷α-珠蛋白生成障礙性貧血或β-珠蛋白生成障礙性貧血的措施。7.紅細(xì)胞鐮變試驗

（1）原理：在低氧分壓條件下，HbS轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原狀態(tài)後溶解度減少，從而聚合成短棒狀凝膠使紅細(xì)胞變形，呈鐮刀狀。

成果：陰性，無鐮變細(xì)胞。

（2）臨床意義：陽性見于鐮狀細(xì)胞貧血（HbS病）、HbBart、HbI病可見少許鐮狀細(xì)胞。

鐮狀紅細(xì)胞溶解度減少，左為HbS患者，右為正常對照三、血紅蛋白病的試驗診斷

1.血紅蛋白病的定義和分類（純熟掌握）

2.鐮狀細(xì)胞性貧血（理解）

3.血紅蛋白E?。ɡ斫猓?/p>

4.高鐵血紅蛋白血癥（HbM）（理解）

5.不穩(wěn)定血紅蛋白?。ɡ斫猓?/p>

6.珠蛋白生成障礙性貧血（純熟掌握）

1.血紅蛋白病的定義和分類（純熟掌握）

一組由于生成血紅蛋白的珠蛋白肽鏈（α、β、γ、δ）的構(gòu)造異?；蚝铣呻逆溗俾实淖兓?，而引起血紅蛋白功能異常所致的疾病。血紅蛋白病分類Ⅰ.構(gòu)造性血紅蛋白病：Hb氨基酸序列變化，引起物理化學(xué)功能異常異常血紅蛋白HbS：異常Hb聚合作用，O2親和力變化高親和力：紅細(xì)胞增多癥低親和力