DB15-T 3641-2024 馬鈴薯腐爛莖線蟲分離、鑒定及培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

15I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定托克前旗農(nóng)牧業(yè)技術(shù)推廣中心、鄂爾多斯市農(nóng)牧技術(shù)推廣1馬鈴薯腐爛莖線蟲分離、鑒定及培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程GB/T29577腐爛莖線蟲檢疫鑒定NY/T1121.1土壤檢測第1部分：土壤樣品的采集、處理和貯存3.11mg/mL蛋白酶K，2×TaqPCRMasterMix、50×TAE、核酸4.2引物序列2將土壤稱取50g、塊莖切成1cm的小塊，采用改進貝爾曼漏斗法進行分離，應(yīng)符合SN/T1132的規(guī)5.3玻片制備于65℃水浴鍋中處理3min，熱殺死線蟲后，用4%甲醛進行固定，制使用上述制備好的臨時玻片，每個樣品各選取20條雌雄蟲進行測量，主要測量線蟲體長腸前端的距離之比（b）、線蟲體長與其尾長比（c）、體前端至陰門的距離×100/體長（V）6.2分子生物學鑒定），列比對分析，從NCBIGenBank數(shù)據(jù)庫中根據(jù)E-score的高低排序，下載同源性較高的部分馬鈴薯腐爛莖3在PDA培養(yǎng)基平板上純化鏈格孢菌（Alternariatenuis）和茄腐鐮刀菌（Fusariumsolani之后接入1000條馬鈴薯腐爛莖線蟲，25℃暗培養(yǎng)30d，可獲得大量馬鈴薯腐爛莖7.2薯塊培養(yǎng)線蟲懸浮液制備：將分離得到的線蟲用0.5%次氯酸鈉溶液消毒1min后，3000r/min離心2min,棄上清液；加入0.5%硫酸鏈霉素和0.5%青霉素的混合液中消毒10min，離心后棄上清液，用無菌水沖洗3），腐爛莖線蟲培養(yǎng)擴繁：將健康馬鈴薯薯塊用流動水沖洗、去芽去泥，75%酒精表面消毒。用滅菌的打孔器在薯塊中央打孔；每個孔內(nèi)接入線蟲約500條，將取下的薯塊組織塞回原處，石蠟封口。接種后置于25℃培養(yǎng)箱中進行暗培養(yǎng)，40d后進行馬鈴薯腐爛莖線蟲的分離，于4℃保存?zhèn)溆谩１４婊蚺囵B(yǎng)菌株后的PDA培養(yǎng)基及玻璃器皿應(yīng)經(jīng)高壓蒸汽滅菌后方可清洗和處理，使其達到對環(huán)境的無4以卵、幼蟲和成蟲寄生馬鈴薯的塊莖以及根部在窖中越冬，同時幼蟲和成線蟲在5℃~34℃條件下均能發(fā)育、繁殖，20℃~27℃為最適宜的繁殖溫度，在27℃~28℃下，完成一代需要18d；20℃~24℃下則需20d~26d；6℃~10℃下需68d。通過被侵染的植物的地下器官如根的土壤進行傳播，在田間還可以通過農(nóng)5馬鈴薯腐爛莖線蟲分類、形態(tài)特征及與腐生性線蟲的形 （DitylenchusdestructorThorne）（Anguinidae）、莖線蟲屬的水平處向