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文檔簡介

第一章基因工程

【教材解讀】

1.工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生

①基因工程的概念:是指狹義的遺傳工程;廣義的遺傳工程泛指把一

種生物的(細(xì)胞核、染色體脫氧核糖核酸等)移到

中去,并使這種遺傳物質(zhì)所帶的在中

表達(dá)。

②基因工程的核心是,其變異原理

是。

③限制性核酸內(nèi)切酶:主要是從細(xì)菌中分離純化出來的:【拓展:限

制酶對細(xì)菌有保護(hù)作用,某些入侵的噬菌體可因

而不能在細(xì)菌中繁殖,“限制”由此而得名,限制酶不能切開細(xì)菌自

身的,這是因?yàn)榈南汆┮骱桶寮谆艿?/p>

保護(hù)的緣故】

是能夠和DNA分子內(nèi)一小段的

酶,因此具有性?!窘馕?識別特定的和切點(diǎn);

切割切點(diǎn)處兩個(gè)核甘酸之間的1

④如:以下四種限制性核酸內(nèi)切酶能識別的序列分別是

GGATCC、、AAGCTT、AGATCT,識別的切點(diǎn)(又稱切割位

點(diǎn))G和G之間、之間、之間、A和G之間,能在

1

切點(diǎn)上兩個(gè)核甘酸之間切斷DNA,如下圖所示。

BamHIEcoRIHind.IllBglli

iII1

GGATCCGAATTCAAGCTTAGATCT

CCTAGGCTTAAGTTCGAATCTAGA

TTTT

⑤如果利用不同的處理DNA分子,就能

把DNA分子切割成許多,限制酶的切割方式分為兩

種方式:如:EcoRI切割位置是交錯(cuò)的,可以形成(虛

線框內(nèi)的結(jié)構(gòu)),為與其他核甘酸序列互補(bǔ)連接奠定基礎(chǔ);而Smal

切割位置是平齊的,形成的是。

切點(diǎn)切點(diǎn)

I;

GAA:TTCl'

II1>1II

CTT:AAG|

中軸線切點(diǎn)

黏性末端平末端

中軸線(切點(diǎn))

【注意:不同的限制酶識別不同的序列,但有時(shí)形成的粘性末端可以

發(fā)生互補(bǔ);如下圖:a酶識別的序列是,切點(diǎn)是

之間;而b酶識別的序列ACGT,切點(diǎn)A的另一側(cè)堿基不固定;兩種

限制酶形成的粘性末端的堿基可以互補(bǔ)】

________L

CTCCAGTGCA

212士*&AiGT

⑥D(zhuǎn)NA連接酶:將具有的2個(gè)DNA片段連接在一

起(形成鍵),所形成的DNA分子稱為分子。因

此,DNA連接酶可以將和連接在一起,如下圖。

2

米占一人漓

D?ZA連接西每

r1'-

【注意:DNA連接酶能夠封閉DNA雙螺旋骨架上的切口而不能封閉

缺口,如下圖所示】

(失去磷酸二酯鍵的切D(缺失核甘酸的缺口)

MWIWIIIIUUWTTmTEJ11MI川I

\DNA連接醐封閉切口QDNA連接酶無法封閉缺口

IIUIIIWUWIU口無活性

⑦載體:質(zhì)粒常作為基因的使用,質(zhì)粒是能夠自主復(fù)制的

分子,在細(xì)菌中以獨(dú)立于擬接之外的方式存在,最常用的是

的質(zhì)粒,這種質(zhì)粒常含有抗生素抗性基因,例如:四環(huán)素的抗性基因。

其他載體有人噬菌體、動(dòng)物病毒和植物病毒。

【作為載體具備的條件:①是DNA分子,這樣才能與結(jié)

合到一起;②能夠自我復(fù)制;③能進(jìn)入,并在受體細(xì)胞中

正常生存;④最好能表達(dá)特殊性狀的基因(即為基因),便

于檢測是否轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞】

2.基因工程的基本原理:是讓人們感興趣的基因(即)

在中穩(wěn)定和高效地;為了實(shí)現(xiàn)這個(gè)目標(biāo),通常要

有多種、、載體和等基

因要素。

3.基因工程的基本操作步驟

3

①獲得:即獲得我們所需要的基因;獲得目的基因

通常有兩種方法:a.目的基因的序列是已知的,可以用

目的基因或用(PCR)擴(kuò)增目的基因;b.目的

基因的核甘酸序列是未知的,我們就建立一個(gè)包括目的基因在內(nèi)

的,從基因文庫中找到我們想要的?!窘庾x:

例如某生物具有我們想要的性狀,也就說明該生物體內(nèi)含有控制這個(gè)

性狀的基因,但又不確定是哪個(gè)基因,此時(shí),就把該生物的所有基因

收集在一起,建立基因文庫,然后從中篩選出我們想要的基因,即目

的基因】

②形成(核心步驟):通常是用的限

制性核酸內(nèi)切酶分別切割和(如質(zhì)粒),就

會(huì)在和的兩端形成

然后用將目的基因和連接在一起,

形成重組DNA分子。

③將重組DNA分子導(dǎo)入:用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑿纬傻?/p>

轉(zhuǎn)移到合適的中。常用的受體細(xì)胞有、枯

草桿菌、和等。如用質(zhì)粒作載體,宿主細(xì)胞應(yīng)選

擇,用處理大腸桿菌,增加大腸桿菌

的通透性(稱為細(xì)胞),使含有目的基因的進(jìn)

入大腸桿菌宿主細(xì)胞?!就卣梗喝缡荏w細(xì)胞是動(dòng)物細(xì)胞,常用

導(dǎo)入受體細(xì)胞;如受體細(xì)胞是植物細(xì)胞,常用導(dǎo)入

4

受體細(xì)胞。如果以病毒為載體,采用病毒侵染動(dòng)植物細(xì)胞的方法】【用

CaCL處理細(xì)菌,會(huì)改變其某些生理狀態(tài)。取CaCL處理過的農(nóng)桿菌與

重組質(zhì)粒在離心管內(nèi)進(jìn)行混合等操作,使重組質(zhì)粒進(jìn)入農(nóng)桿菌,完成

實(shí)驗(yàn)。在離心管中加入液體培養(yǎng)基,置于搖床慢速培養(yǎng)一段時(shí)間,其

目的是,

從而表達(dá)卡那霉素抗性基因,并大量增殖】

④篩選含有的受體細(xì)胞:并不是所有細(xì)胞都接納

了,因此需要篩選含有的受體細(xì)胞。

例如,質(zhì)粒上有如四環(huán)素的抗性基因(用作),

所以含有這種的受體細(xì)胞就能夠在有的

培養(yǎng)基中生長,而沒有接納的細(xì)胞在這種培養(yǎng)基中

生長。這樣就能篩選出含有的受體細(xì)胞。經(jīng)過培養(yǎng),

能和質(zhì)粒一起在宿主細(xì)胞內(nèi)大量擴(kuò)增。

⑤目的基因的表達(dá):目的基因在中表達(dá),能產(chǎn)生人們

需要的,如轉(zhuǎn)入了人胰島素原基因的大腸桿菌,可以合成

人,經(jīng)進(jìn)一步的后可獲得具有的胰

島素?!咀⒁猓捍竽c桿菌細(xì)胞內(nèi)不存在和內(nèi)質(zhì)網(wǎng),不能

得到具有生物活性的胰島素】

第二章克隆技術(shù)

L克?。壕褪侵赶?;克隆技術(shù):是指從眾多的

5

或中通過無性繁殖和選擇獲得或

的操作技術(shù)。

2.胚胎細(xì)胞克隆嚴(yán)格意義上的動(dòng)物個(gè)體克隆;

3.克隆的基本條件:①具有包含物種的細(xì)胞核的

活細(xì)胞;

②能有效調(diào)控發(fā)育的細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)(如去核卵的細(xì)胞

質(zhì));③完成胚胎發(fā)育的必要的環(huán)境條件。

4.植物的克隆

①植物克隆技術(shù)基礎(chǔ)是;植物克隆技術(shù)的理論基礎(chǔ)

是;

②植物細(xì)胞全能性體現(xiàn):植物體的每個(gè)活細(xì)胞,即使是已經(jīng)

和的細(xì)胞,都保持了恢復(fù)到的能力,都具有

的全能性。需要指出的是,由于不同或同種植物的

個(gè)體之間的差異,細(xì)胞的全能性的大不

相同?!救苄员容^:受精卵>早期胚胎細(xì)胞〉生殖細(xì)胞〉體細(xì)胞;

植物細(xì)胞〉動(dòng)物細(xì)胞】

③植物組織培養(yǎng):植物組織培養(yǎng)就是在和人工控制的條

件下,將的植物器官、組織、細(xì)胞培養(yǎng)在人工配制的

上,給予適宜的培養(yǎng)條件,誘導(dǎo)其產(chǎn)生、生芽,最終形

成O1固體培養(yǎng)基有利于誘導(dǎo)愈傷組織,而液體培養(yǎng)基

6

有利于細(xì)胞和胚狀體增殖】

④植物組織培養(yǎng)(愈傷組織培養(yǎng)法)過程:a.配制含有適當(dāng)

和的含0.7%—1%瓊脂的培養(yǎng)基,倒在滅菌試管中凝固

成;b.從消毒的或葉上切取一些小組織塊;

c.將組織塊放在培養(yǎng)基上培養(yǎng),獲得(創(chuàng)傷組

織);d.以適當(dāng)配比的和誘導(dǎo)愈傷組織,直

到再生出o

☆跟生活的植株相似,在創(chuàng)傷表面形成一種由

的活的薄壁細(xì)胞團(tuán)組成的【該過程稱為,

即已經(jīng)的植物細(xì)胞,經(jīng)過誘導(dǎo)重新恢復(fù)

了,產(chǎn)生的過程】,通過調(diào)節(jié)營養(yǎng)物質(zhì)

和生長調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)配比,可以從這種誘導(dǎo)出芽和根的

【該過程稱為工并可由此再生出新的植株。

⑤培養(yǎng)基的成分:水、無機(jī)鹽、(如蔗糖或甘露醇)、含N

物質(zhì)(如氨基酸、維生素)、(0.7%—1%,起支持作用)、

(細(xì)胞分裂素、生長素)。

⑥植物細(xì)胞培養(yǎng)(液體懸浮培養(yǎng)法)過程:將含有愈傷組織培養(yǎng)物的

試管放在上,通過可以分散成,這

種細(xì)胞質(zhì)、而,這是的特征,

在適宜的培養(yǎng)基中,這種單細(xì)胞可發(fā)育成,繼續(xù)

發(fā)育,可以形成植株?!灸康模菏峭ㄟ^大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)以獲得人類

7

所需的細(xì)胞次級代謝產(chǎn)物】【解析:處于適當(dāng)?shù)囊后w培養(yǎng)條件

的,經(jīng)過培養(yǎng)基中成分的,可發(fā)生類似受精

卵經(jīng)過卵裂、、和形態(tài)建成而發(fā)育成的

過程,即從單細(xì)胞依次到、球形胚、和胚狀體,

最后再生出的植株;有些植物可以在的基礎(chǔ)上

直接發(fā)育出]

⑦植物原生質(zhì)體的獲得方法:在0.5?0.6mol/L的溶液

環(huán)境(較高滲透壓)下用酶和酶混合液處理根尖、

葉片、組織或細(xì)胞,將消化除去,

獲得球形的(細(xì)胞中有代謝活性的原生質(zhì)部分,包括質(zhì)

膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核)。

⑧如何實(shí)現(xiàn)器官發(fā)生和形態(tài)建成:主要通過配比進(jìn)

行調(diào)控;誘導(dǎo)芽的分化:細(xì)胞分裂素之生長素;誘導(dǎo)根的分化:生長

素(呵噪乙酸)二細(xì)胞分裂素

⑨植物細(xì)胞工程:培養(yǎng)植物細(xì)胞(包括原生質(zhì)體),借助方

法,將(DNA)導(dǎo)入受體細(xì)胞(包括原生質(zhì)體受體)中,

或通過、等將不同來源的遺傳物質(zhì)重

新組合,再通過對這些或進(jìn)行培養(yǎng),

獲得具有的新植株?!窘馕觯褐匦陆M合的3種方法:基因

工程、細(xì)胞融合、顯微注射】

⑩長期培養(yǎng)中,培養(yǎng)物的胚胎發(fā)生和器官形成能力下降的可能原因:

8

a.、細(xì)胞核變異或產(chǎn)生等,而且其

結(jié)果是的;b.細(xì)胞或組織中激素,或細(xì)

胞外源生長物質(zhì)的發(fā)生改變;c.隨著時(shí)間推移,由于

其他各種原因產(chǎn)生了缺乏的細(xì)胞系。

(11)應(yīng)用:在培養(yǎng)基中加入不同濃度的NaCI或病原體的毒蛋白,誘發(fā)

和篩選了—或突變體;在培養(yǎng)基中加入不同濃度的賴氨酸類

似物,能夠篩選出的突變體。

5.細(xì)胞克隆

①動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是和;

②動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng):將動(dòng)物體內(nèi)的一部分取出,經(jīng)過

消化或消化,使其分散成;然后,在

的培養(yǎng)條件下,使這些細(xì)胞得以生存,并保持生長、(繁

殖)乃至和有規(guī)律的衰老、死亡等生命活動(dòng)?!窘佑|抑

制:是將多細(xì)胞生物的細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)時(shí),分散貼壁生長的細(xì)胞一

旦相互匯合接觸,即停止移動(dòng)和生長的現(xiàn)象。細(xì)胞增殖到一定程度,

也就是互相挨在一起的時(shí)候,糖蛋白識別了這種信息,就會(huì)使細(xì)胞停

止繁殖】【貼壁生長:在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)貼附于培養(yǎng)(瓶)器皿壁上,細(xì)

胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展,然后開始有絲分裂,并很快進(jìn)入對數(shù)生長期,

一般數(shù)天后就鋪滿培養(yǎng)表面,并形成致密的細(xì)胞單層】

③動(dòng)物組織培養(yǎng):動(dòng)物組織在及人工條件下維持

9

特性。動(dòng)物組織培養(yǎng)過程中可以伴隨著o

④綜合細(xì)胞培養(yǎng)和組織培養(yǎng)的含義和規(guī)律,兩者在一定程度上可看作

是同義語,因此可將它們統(tǒng)稱為(組培),用以代

表各種生物體結(jié)構(gòu)成分的。

⑤原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng):從機(jī)體取出組織或細(xì)胞后立即進(jìn)行培養(yǎng)

(即),當(dāng)細(xì)胞從移植物中生長遷移出來,形成

并以后,接著進(jìn)行(即將原代培養(yǎng)細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)

瓶轉(zhuǎn)移或移植到另一個(gè)培養(yǎng)瓶)?!旧L暈:是指組織塊接種進(jìn)行細(xì)胞

培養(yǎng)5?6天后,在顯微鏡下觀察,可見到有細(xì)胞從組織塊周邊生長,

呈放射狀排列】

⑥懸浮培養(yǎng)法:取動(dòng)物組織塊(動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織)

一剪碎一用酶或酶處理分散成-

制成一轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶(瓶)中進(jìn)行-貼

滿瓶壁的細(xì)胞重新用或酶處理分散成單個(gè)

細(xì)胞繼續(xù)。

⑦細(xì)胞系、細(xì)胞株

a.細(xì)胞系:指可的細(xì)胞。如果不進(jìn)行分離培養(yǎng),到一

定時(shí)期培養(yǎng)的細(xì)胞就會(huì)因和引起營養(yǎng)

枯竭,正常生長,這就是必須傳代的原因。原代培養(yǎng)物在首

次傳代時(shí)就成為,能連續(xù)培養(yǎng)下去的細(xì)胞系稱為,

10

不能連續(xù)培養(yǎng)下去的細(xì)胞系稱為。二倍體細(xì)胞通常

為,連續(xù)細(xì)胞系被認(rèn)為是發(fā)生了的細(xì)胞系,

大多數(shù)具有核型。有的連續(xù)細(xì)胞系是,具

有;有的連續(xù)細(xì)胞系獲得了,但保留現(xiàn)

象,不致癌。【異體致瘤性解析:惡性腫瘤之所以很難完全清除易復(fù)

發(fā),一個(gè)重要原因是腫瘤細(xì)胞來源于自身細(xì)胞,不能被自身免疫系統(tǒng)

識別清除,而異體醫(yī)源性種植(如器官移植)來源于異體細(xì)胞,很難

不被自身免疫系統(tǒng)識別清除,所以來自異體的腫瘤細(xì)胞一般丕會(huì)導(dǎo)致

腫瘤,但有少數(shù)腫瘤細(xì)胞移植后可使異體導(dǎo)致腫瘤,即異體致瘤性】。

【異倍體核型解析:某種生物完整的一套染色體稱為該種生物的一個(gè)

染色體組;具有不成套染色體組的細(xì)胞或個(gè)體稱為星倍佳,異倍體具

有的核型即為異倍體核型,類似非整體變異】

b.細(xì)胞株:通過一定的方法,從或細(xì)胞系中獲

得的具有的細(xì)胞系。細(xì)胞株一般具有恒定

的、同功酶類型、和生化特性等。可

傳代次數(shù)有限的細(xì)胞株稱為,可連續(xù)多次傳代的細(xì)胞株

稱為。

⑧克隆培養(yǎng)法:把從群體中分離出來培

養(yǎng),使之繁衍成一個(gè)新的的技術(shù),叫克隆培養(yǎng)法

或。未經(jīng)克隆化的細(xì)胞系具有【遺傳物質(zhì)及性

狀的差異】,經(jīng)過克隆以后的細(xì)胞的后裔細(xì)胞群,來源于一個(gè)共同

11

的,所以稱為(克?。?。細(xì)胞克隆的均

一,相似,便于研究。

a.細(xì)胞克隆的最基本要求:保證所建成的克隆來源于o

b.適合于克隆的細(xì)胞:對培養(yǎng)環(huán)境有和具有

的細(xì)胞;和克隆起來有實(shí)際困難;相

反,、轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或_______________系等比較容易克

隆,單細(xì)胞與群體細(xì)胞相比,更容易克隆。

c.提高細(xì)胞克隆形成率的措施:選擇適宜的培養(yǎng)基、添加

()、以(如經(jīng)射線照射本身失去增殖

能力的小鼠成纖維細(xì)胞)、(胰島素等)刺激、使用—

培養(yǎng)箱等?!境衫w維細(xì)胞,也稱為纖維母細(xì)胞,是疏松結(jié)

締組織的主要細(xì)胞成分,這種細(xì)胞具有的功

能,如合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機(jī)基質(zhì),對其

他細(xì)胞起了的作用】

d.細(xì)胞克隆的主要用途之一:從普通細(xì)胞系中分離出缺乏

的細(xì)胞系。例如:研究缺少某種的細(xì)胞,

根據(jù)該細(xì)胞所缺失的功能,即可發(fā)現(xiàn)正常細(xì)胞中的功

能。

6.細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交

①.細(xì)胞工程是細(xì)胞水平上的生物工程,其主要的技術(shù)手段是

12

和o

②.細(xì)胞融合:是指兩個(gè)或多個(gè)不同的細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的現(xiàn)象。

植物細(xì)胞的可以相互融合,動(dòng)物細(xì)胞在一定的物質(zhì)(如滅活

的、等)介導(dǎo)下可以相互融合。技

術(shù)是在低壓交流電場中擊穿,導(dǎo)致融通,是效

率很高的新型細(xì)胞融合技術(shù)。

③.基因型不同的細(xì)胞間的融合稱為,由于細(xì)胞雜交中

容易丟失,利用雜交細(xì)胞檢測特定丟失與

產(chǎn)物(蛋白質(zhì))減少的對應(yīng)關(guān)系可以進(jìn)行【例如人一鼠

雜交細(xì)胞,由于1號染色體丟失導(dǎo)致尿首單磷酸激酶活性喪失,可知

該基因在上1

④.雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體制備過程

雜交律細(xì)胞

1細(xì)胞培養(yǎng)

II選擇培養(yǎng)細(xì)胞I

III遍卜培奇I

從限水提取|從培養(yǎng)液提取

I單克理抗體\

⑤.雜交瘤技術(shù)解決了抗血清的問題,利用仙臺病毒使

經(jīng)羊細(xì)胞的小鼠細(xì)胞與細(xì)胞融合,經(jīng)篩選

獲得了針對羊紅細(xì)胞的抗體?!酒⒓?xì)胞:從供體獲取的脾

13

臟,通過機(jī)械的方法或其他方法將脾組織搗碎制成游離的脾細(xì)胞保存

于等滲鹽水中即形成,其中含有大量的

和巨噬細(xì)胞,脾臟是機(jī)體和的中心]

⑥.雜交瘤技術(shù)制備單抗的基本方法:

a.用外界刺激動(dòng)物(如小鼠),使其發(fā)生反應(yīng),使

B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生;

b.利用仙臺病毒或聚乙二醇等作,使經(jīng)免疫的動(dòng)物的

細(xì)胞(或脾細(xì)胞)與可以無限傳代的細(xì)胞融合;

c.經(jīng)過篩選、克隆培養(yǎng),獲得來自細(xì)胞的既能產(chǎn)

生、又能的雜交瘤細(xì)胞克隆。

⑦a.單克隆抗體的制備運(yùn)用和技

術(shù);b.兩次篩選的目的:第一次篩選是在細(xì)胞融合后選出

細(xì)胞;第二次篩選是對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)后選出能

的細(xì)胞群,繼續(xù)培養(yǎng);c.雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):可

以從特異抗原成分比例極少的中獲得o特

異性,靈敏度;

7.動(dòng)物的克隆繁殖

①受精卵的第一次卵裂所得到的2個(gè)分裂球,每一個(gè)都可以發(fā)育

為,所以第一次卵裂后喪失,隨著胚胎發(fā)

育的繼續(xù),有的細(xì)胞不再具有發(fā)育為的能力,只具有分化

14

出的潛能,這樣的細(xì)胞叫,例如:

多能造血干細(xì)胞;有的細(xì)胞只能分化為,如單能造血干

細(xì)胞;另外,低等動(dòng)物細(xì)胞的全能性一般體現(xiàn);癌細(xì)胞仍

能逆轉(zhuǎn)為;無論是分化還是癌化,變化的都

是,基因組成的可以保留。

②動(dòng)物難以克隆的根本原因:細(xì)胞分化使得細(xì)胞發(fā)生了基因

的,有的基因,有的基因;動(dòng)物的體細(xì)胞均已

發(fā)生了,基因組中的基因的,不能像受精卵那

樣發(fā)揮細(xì)胞的,以此為起點(diǎn)進(jìn)行動(dòng)物克隆,難度很大。

③哺乳動(dòng)物的卵細(xì)胞體積—,核移植需要借助精密的和

高效率的。

④體細(xì)胞克隆成功證明了:高度分化細(xì)胞經(jīng)過一定技術(shù)處理,也可以

回復(fù)到類似時(shí)期的功能;在胚胎和個(gè)體發(fā)育中,細(xì)胞質(zhì)具有

(包括異源的細(xì)胞核)發(fā)育的作用。

⑤克隆羊成功的部分原因:重組卵細(xì)胞最初分裂時(shí)雖然復(fù)制

了,但基因的并未開始;同時(shí),供體核DNA開始丟

失來源于乳腺細(xì)胞的,而正是這些最初阻止了核

基因的;在重組卵細(xì)胞開始第次分裂時(shí),原乳腺細(xì)胞的

便全部被卵細(xì)胞質(zhì)中的替換了,因此核DNA被,

胚細(xì)胞開始表達(dá)的基因,進(jìn)而調(diào)控在代孕母子宮中的進(jìn)一

步。因此,羅斯林研究所的科研人員采用融

15

合技術(shù),選擇分裂次時(shí)的細(xì)胞進(jìn)行移植。

第三章胚胎工程

L動(dòng)物有胚胎發(fā)育是指發(fā)育成的過程;

2.成熟的精卵融合成為受精卵的過程稱為受抽;受精大體包

括、精子附著于卵膜、等過程。同種

動(dòng)物精子、卵細(xì)胞表面有識別的蛋白,這是同種動(dòng)物精

卵才能結(jié)合的原因之一。

3.胚胎發(fā)育的過程:受精卵一(包括包括2細(xì)胞期、4細(xì)

胞期、8細(xì)胞、16細(xì)胞期、32細(xì)胞期)-*―原腸胚期

f幼體;

4.卵裂期:受精卵不斷進(jìn)行細(xì)胞分裂即,卵裂產(chǎn)生的細(xì)胞團(tuán)

稱,隨著卵裂球細(xì)胞數(shù)目的增加,細(xì)胞逐漸,當(dāng)卵

裂球含個(gè)細(xì)胞時(shí),其中的每一個(gè)細(xì)胞都具有,即均

可以發(fā)育成一個(gè)完整的個(gè)體。

5.囊胚:又稱為,是中空的,囊胚外表為一層扁平

細(xì)胞,稱,可發(fā)育成胚胎的附屬結(jié)構(gòu)或如

囊胚內(nèi)部的細(xì)胞團(tuán)不斷增殖分化,將發(fā)育成完整的;內(nèi)細(xì)胞

團(tuán)的細(xì)胞為,是一種的細(xì)胞(核型),

具有性,能分化出成體動(dòng)物的所有。

6.原腸胚:有三個(gè)胚層,具有。原腸胚

16

的內(nèi)、中、外三個(gè)胚層逐漸分化形成各種。

胚胎工程

1.胚胎工程通常指各種胚胎操作技術(shù)。胚胎工程的研究對象主要限定

于動(dòng)物,特別是0研究的重點(diǎn)內(nèi)容

有:、、、胚胎分割、

等。

2.體外受精和胚胎體外培養(yǎng):

①體外受精就是采集雌性動(dòng)物的和雄性動(dòng)物

的,使其在中受精。

②培養(yǎng)過程:

a.將成熟的精子放入中培養(yǎng),使精子達(dá)到【注

意:獲得具有完成受精的能力】狀態(tài),這樣才能穿入到內(nèi)

部;

b.采集卵母細(xì)胞的和培養(yǎng):首先從卵巢中獲得的

細(xì)胞,最常用的方法是卵巢經(jīng)處理【用促性腺激素處理

卵巢】后,使其確定卵泡的位置,插入吸

取,取出細(xì)胞,在體外經(jīng)人工培養(yǎng),促進(jìn)

其;

c.的精子和培養(yǎng)的卵細(xì)胞在體外合適的環(huán)境

卜,完成受精;

17

d.胚胎的體外培養(yǎng):受精后形成的受精卵需經(jīng),才

能完成植入或著床,通常移植的最適宜時(shí)期是發(fā)育到

的胚胎,如;

e.經(jīng)分娩產(chǎn)仔就得到“試管動(dòng)物”。

③由于胚胎不同發(fā)育時(shí)期的需求不同,進(jìn)行胚胎體外培

養(yǎng)時(shí),必須配置含有一系列含有的培養(yǎng)液,用以培養(yǎng)

的胚胎;目前尚無從受精卵到新生兒的技術(shù),所以,

為胚胎工程中獲得后代的唯一方法。

3.胚胎移植的基本過程:一頭母畜(供體)發(fā)情排卵并經(jīng)后,

在一定時(shí)間內(nèi)從其生殖器官中(和)取

出,然后把它們分別移植到另外一頭與供體排

卵、但的母畜(受體)的相應(yīng)部位(或),

這個(gè)來自供體的胚胎能夠在受體的子宮、并繼續(xù)生長發(fā)育,

最后產(chǎn)下的后代。

4.胚胎分割

①是指借助技術(shù)將(囊胚之前)切

割成幾等份(如2等份、4等份等),再移植到發(fā)

育,產(chǎn)生后代的技術(shù)。胚胎分割可胚胎

數(shù)量,是一種快速繁殖良種畜的方法。

②胚胎分割基本過程:將發(fā)育良好的移入含的培養(yǎng)皿

18

中;在下用或分割胚胎,或用

等方法將中的細(xì)胞分開;分割的胚胎或細(xì)胞

給受體,或在體外培養(yǎng)到階段再移植到受體內(nèi),著床發(fā)

育產(chǎn)仔。

5.胚胎干細(xì)胞:當(dāng)受精卵分裂發(fā)育成()

時(shí),內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞為(簡稱ES細(xì)胞),是一種

的細(xì)胞,具有和二核型。

①培養(yǎng)關(guān)鍵:需要一種能,但

的培養(yǎng)體系。

②培養(yǎng)過程:在培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞時(shí),首先要在底部制備一

層細(xì)胞,稱為【一般是細(xì)胞,因?yàn)?/p>

細(xì)胞可以分泌一些能的物質(zhì),滿足干細(xì)胞生長

的同時(shí)的條件】,然后將干細(xì)胞接種在上;把胚胎

放在中繼續(xù)培養(yǎng),直到內(nèi)細(xì)胞團(tuán),然后

用或機(jī)械剝離內(nèi)細(xì)胞團(tuán),再把它用成

細(xì)胞,置于新鮮培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

6.胚胎干細(xì)胞核移植:

①是指將胚胎干細(xì)胞核移植到去核的中,經(jīng)

過、、后直接由受體完成克隆動(dòng)物(并非

嚴(yán)格意義上的克?。┑募夹g(shù)。

19

②胚胎干細(xì)胞核移植需要的技術(shù)流程:一

一胚胎移植。

③胚胎干細(xì)胞可以進(jìn)行基因敲除,獲得動(dòng)物,如用基

因敲除手段可以獲得適合人體移植的豬器官,排斥

反應(yīng);人體的胚胎干細(xì)胞可以轉(zhuǎn)變?yōu)槿梭w的任何一種

和,利用這一特性可以培育用于的細(xì)胞、組織

或器官。

第五章生態(tài)工程

L生態(tài)工程原理:;生態(tài)工程學(xué)的研究對象:

復(fù)合生態(tài)系統(tǒng);

2.生態(tài)工程主要類型:

①的生態(tài)工程:城市生活垃圾進(jìn)行、

化、_______化處理,如將生活垃圾中有機(jī)部分、人畜的糞便等轉(zhuǎn)化

為;農(nóng)村地區(qū)發(fā)展養(yǎng)殖業(yè),將農(nóng)作物秸桿

“",利用禽畜糞便與作物秸桿培養(yǎng)后再培養(yǎng)

蚯蚓,蚓糞殘?jiān)僮鳛榉柿希攘颂镩g燒草給環(huán)境帶來

的污染,又增加了產(chǎn)值。

②處理與應(yīng)用的生態(tài)工程:

a.干旱和半干旱地區(qū)開展雨水和地表水的,在廣大農(nóng)業(yè)區(qū)域

實(shí)施技術(shù),城市、工業(yè)節(jié)水系統(tǒng)的開發(fā)等屬于

20

的生態(tài)工程;

b.糖廠用廢棄的糖蜜制,造紙廠利用廢液回收、

等物質(zhì),屠宰場利用廢血提取生產(chǎn)、等,這些

都是工業(yè)廢水、生活污水等實(shí)施―、回蚊、、再循環(huán)的

措施,屬于生態(tài)工程。

③山區(qū)小流域的生態(tài)工程:在治理恢復(fù)

小流域生態(tài)環(huán)境的基礎(chǔ)上,利用小流域自然資源,

將、、與發(fā)展草業(yè)、

結(jié)合起來。

④系統(tǒng)利用的生態(tài)工程:

a.農(nóng)作物秸桿、生活垃圾等

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