維生素c含量測定方法

1、維生素維生素C含量測定含量測定方法綜述方法綜述目前研究維生素C測定方法的報道較多，如滴定法、光度分析法、高效液相色譜法等，各種方法各有特點(diǎn)。特別是高效液相色譜法是近年來發(fā)展較快的一種方法。維生素維生素C是可溶于水的無色結(jié)晶，是一種分子結(jié)是可溶于水的無色結(jié)晶，是一種分子結(jié)構(gòu)最簡單的維生素。維生素構(gòu)最簡單的維生素。維生素C有防治壞血病的功有防治壞血病的功能，所以在醫(yī)藥上常把它叫做抗壞血酸。維生素能，所以在醫(yī)藥上常把它叫做抗壞血酸。維生素C能保持巰基酶的活性和谷胱甘肽的還原狀態(tài)，能保持巰基酶的活性和谷胱甘肽的還原狀態(tài)，起解毒作用等。其廣泛存在于植物組織中，新鮮起解毒作用等。其廣泛存在于植物組織中，新

2、鮮的水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉、的水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉、獼猴桃、柑橘等食品中含量尤為豐富。準(zhǔn)確測定獼猴桃、柑橘等食品中含量尤為豐富。準(zhǔn)確測定維生素維生素C的含量，對飲食健康、醫(yī)療保健都具有的含量，對飲食健康、醫(yī)療保健都具有十分重要的意義。十分重要的意義。 測定維生素測定維生素C常用的方法有常用的方法有2,6-二氯靛酚滴定法、二氯靛酚滴定法、苯肼比色法、熒光法及高效液相色譜法等。苯肼比色法、熒光法及高效液相色譜法等。2,6-二氯靛酚滴定法測定的是還原型抗壞血酸，該法二氯靛酚滴定法測定的是還原型抗壞血酸，該法簡便，也較靈敏，但特異性差，樣品中的其他還簡便，也較靈敏

3、，但特異性差，樣品中的其他還原性物質(zhì)會干擾測定，使測定值偏高，且對深色原性物質(zhì)會干擾測定，使測定值偏高，且對深色樣液滴定終點(diǎn)不易辨別。苯肼比色法和熒光法測樣液滴定終點(diǎn)不易辨別。苯肼比色法和熒光法測得的都是抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。高效得的都是抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。高效液相色譜法可以同時測得抗壞血酸和脫氫抗壞血液相色譜法可以同時測得抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的含量，具有干擾少、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好、酸的含量，具有干擾少、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好、靈敏、簡便、快速等優(yōu)點(diǎn)，是上述幾種方法中最靈敏、簡便、快速等優(yōu)點(diǎn)，是上述幾種方法中最先進(jìn)、最可靠的方法。先進(jìn)、最可靠的方法。維生素維生素C的結(jié)構(gòu)式的結(jié)構(gòu)

4、式 維生素C：六碳的多羥基內(nèi)酯CCCHOHOCHOOCHHOCH2OH滴定法測定滴定法測定維生素維生素C C高效液相色譜法高效液相色譜法測定維生素測定維生素C C 原理原理染料2,6-二氯靛酚在酸性溶液中呈粉紅色（在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色），被還原型抗壞血酸還原后顏色消失。還原型抗壞血酸還原染料后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質(zhì)干擾時，一定量的樣品提取液還原標(biāo)準(zhǔn)染料液的量，與樣品中還原型抗壞血酸含量成正比。 2，6一二氯靛酚法2，6一二氯靛酚法n試劑試劑 1%的乙二酸溶液，2%的乙二酸溶液，1%淀粉溶液，6%碘化鉀溶液。 抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取20mg抗壞血酸，溶于1%的乙二酸中，并

5、稀釋至100mL，置冰箱中保存。用時取出5mL，置于50mL容量瓶中，用1%乙二酸溶液定容，配成0.02mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。 標(biāo)定：吸取此標(biāo)準(zhǔn)液5mL于三角瓶中，加入6%碘化鉀溶液0.5mL，1%淀粉溶液3滴，以0.001mol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，終點(diǎn)為淡藍(lán)色。2，6一二氯靛酚法120.088VcV計算：式中： c抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度mg/mL； V1滴定時消耗0.001mol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL； V2滴定時所取抗壞血酸的體積，mL； 0.0881mL0.001mol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于抗壞血酸的量，mg/mL。 2，6一二氯靛酚法n試劑試劑 0.000167mol/L

6、碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取干燥的碘酸鉀0.3567g，用水稀釋至100mL，取出1mL，用水稀至100mL，此溶液1mL相當(dāng)于抗壞血酸0.088mg。 2,6-二氯靛酚溶液：稱取2,6-二氯靛酚50mg，溶于200mL含有52mg碳酸氫鈉的熱水中，待冷，置于冰箱中過夜。次日過濾于250mL棕色容量瓶中，定容，在冰箱中保存。每周標(biāo)定1次。 標(biāo)定：取5mL已知濃度的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入1%乙二酸溶液5mL，搖勻，用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉紅色，在15s內(nèi)不褪色即為終點(diǎn)。 2，6一二氯靛酚法計算：式中：T每毫升染料溶液相當(dāng)于抗壞血酸的毫克數(shù)，mg/mL； c抗壞血酸的濃度，mg/mL； V

7、1抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL； V2消耗2,6-二氯靛酚的體積，mL。12c VTV2，6一二氯靛酚法n測定步驟測定步驟提取n鮮樣制備：稱100g鮮樣，加等量的2%乙二酸溶液，倒入組織搗碎機(jī)中打成勻漿。取1040g勻漿（含抗壞血酸12mg）于100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀釋至刻度，混合均勻。n干樣制備：稱14g干樣（含12mg抗壞血酸）放入研缽內(nèi)，加1%乙二酸溶液磨成勻漿，倒入100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀釋至刻度。過濾上述樣液，不易過濾的可用離心機(jī)沉淀后，傾出上清液，過濾備用。 2，6一二氯靛酚法n測定步驟測定步驟滴定 吸取510mL濾液，置于50mL三角瓶中，快速用2，6-二氯靛

8、酚溶液滴定，直到紅色不能立即消失，而后再盡快地一滴一滴地加入（樣品中可能存在其他還原性雜質(zhì)，但一般雜質(zhì)還原染料的速度均比抗壞血酸慢），以呈現(xiàn)的粉紅色在15s內(nèi)不消失為終點(diǎn)。同時做空白實驗。 2，6一二氯靛酚法n結(jié)果計算結(jié)果計算0()100VVTXm式中：X樣品中抗壞血酸含量，mg/100g； m滴定時所取溶液中含有樣品的質(zhì)量，g； T1mL染料溶液相當(dāng)于抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的量，mg/mL； V滴定樣液時消耗染料的體積，mL； V0滴定空白時消耗染料的體積，mL。2，6一二氯靛酚法n注意事項注意事項（1）所有試劑最好用重蒸餾水配制。（2）樣品采取后，應(yīng)浸泡在已知量的2%乙二酸溶液中，以防止維生素C

9、氧化損失。測定時整個操作過程要迅速，防止抗壞血酸被氧化。（3）若測動物性樣品，需用10%三氯乙酸代替2%乙二酸溶液提取維生素C。（4）若樣品濾液顏色較深，影響滴定終點(diǎn)觀察，可加入白陶土脫色后再過濾。白陶土使用前應(yīng)測定回收率。2，6一二氯靛酚法n注意事項注意事項（5）若樣品中含有Fe2+、Sn2+、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等還原性雜質(zhì)時，會使結(jié)果偏高；Cu2+可與抗壞血酸反應(yīng)，也干擾測定。有無這些干擾離子可用以下方法檢驗：取樣品提取液、偏磷酸-乙酸溶液各5mL混合均勻，加入0.05%亞甲基藍(lán)水溶液2滴。如亞甲基藍(lán)顏色在510s消失，即證明有干擾物存在；此檢驗對Sn2+無反應(yīng)，可在另一份10mL的樣品

10、溶液中加入1：3鹽酸溶液10mL，加0.05%靛胭脂紅水溶液5滴，若顏色在510s消失；證明有Sn2+或其他干擾性物質(zhì)存在。為消除上述雜質(zhì)帶來的誤差，可采取以下測定方法：取10mL提取液兩份，各加入0.1mL10%硫酸銅溶液，在110加熱10min，冷卻后在用染料滴定。有銅存在時，抗壞血酸完全被破壞，從樣品滴定值中扣除校正值，即得抗壞血酸含量。CCCHOHOCHOOCHHOCH2OHOClClNOHOHClClNOHCCOCHCOOOCHCH2OHHO 維生素C 2,6-二氯酚靛酚 維生素C 2,6-二氯酚靛酚（還原型） （氧化型，粉紅色） （氧化型） （還原型） + + = v2,6-二氯酚

11、靛酚染料的鈉鹽在水溶液中顯藍(lán)色，在酸性溶液中呈紅色，被還原后紅色消失。2高效液相色譜法測定維生素高效液相色譜法測定維生素C原理原理樣品中的維生素C經(jīng)乙二酸溶液（1g/L）迅速提取后，在反相色譜柱上分離測定。 主要儀器及試劑主要儀器及試劑高效液相色譜儀，紫外檢測器等。乙二酸溶液（1g/L）。維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取維生素C樣本2mg與50ml容量瓶中，用乙二醇溶液（1g/L）溶解、定容，搖勻備用，用前配制。2高效液相色譜法測定維生素高效液相色譜法測定維生素Cn樣品處理樣品處理液體樣品：取原液5mL與25mL容量瓶中，用乙二醇溶液（1g/L）定容，搖勻后經(jīng)0.45m濾膜過濾后待測。固體樣本：稱1

12、g樣品于研缽中，用5mL乙二醇溶液（1g/L） 迅速研磨，過濾，殘渣用乙二醇溶液（1g/L）洗滌，合并提取液于25mL容量瓶中，蒸餾水定容，搖勻后經(jīng)0.45m濾膜過濾后待測。2高效液相色譜法測定維生素高效液相色譜法測定維生素Cn測定測定 取5m標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行色譜分析，重復(fù)進(jìn)樣3次，取標(biāo)樣峰面積的平均值。然后在相同條件下，取5L樣品液進(jìn)行分析，以相應(yīng)峰面積計算含量。 n色譜條件色譜條件 色譜柱，-Bondapak C18（直徑3.9mm*300mm）；流動相，H2C2O4（1g/L）；流速，1.0mL/min；檢測器，紫外245nm；進(jìn)樣量，5L。 2高效液相色譜法測定維生素高效液相色譜法測定維生素Cn計算結(jié)果計算結(jié)果122211100m A VXm AV式中： X樣品中維生素C的含量，mg/100g或mg/100mL； m1標(biāo)樣進(jìn)樣體積中維生素C含量，g； m2樣品質(zhì)量（或體積），g或mL； A1標(biāo)