酶標(biāo)儀選購的幾個關(guān)鍵參數(shù)

第第頁酶標(biāo)儀選購的幾個關(guān)鍵參數(shù)酶標(biāo)儀選購的幾個關(guān)鍵參數(shù)！核心提示：酶標(biāo)儀作為一個常用的儀器，其基本功能不外乎一個比色測定，與比色計所不同的是在測定波長范圍、吸光度范圍、光學(xué)系統(tǒng)、檢測速度、震板功能、溫度掌控、定性和定量測定軟件功能等方面的差別，當(dāng)然全自動酶免疫分析系統(tǒng)還具有自動洗板、溫育、加樣等功能。我們在選購酶標(biāo)儀時應(yīng)當(dāng)考慮如下幾個關(guān)鍵參數(shù)：濾光系統(tǒng)酶標(biāo)儀可以用濾光方式來劃分。一般來說，可以分為濾光片型和光柵型兩大類。也有一些酶標(biāo)儀里面同時裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵并不能同時完成同一個檢測，本質(zhì)上還只是把濾片和光柵放在了一起，并沒有使兩者糅合而產(chǎn)生新的技術(shù)突破。光柵型濾光系統(tǒng)具有使用方便，可以進(jìn)行光譜掃描，敏捷性等優(yōu)點。當(dāng)然，濾光片系統(tǒng)也有其顯著的優(yōu)勢，例如價格較為便宜，檢測靈敏度高，帶寬的可選擇性，可以進(jìn)行快速的濾光片切換，可配備有自動加樣系統(tǒng)，在化學(xué)發(fā)光檢測中光線的透過率高。目前，濾光片系統(tǒng)應(yīng)用更廣，由于它可以讓試驗者完成更多的試驗。測定波長一般酶標(biāo)儀的測定波長在400～750nm或800nm之間，可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶（HRP），底物通常為四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和鄰苯二胺（OPD），其在過氧化氫溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為2，2，二氨基偶氮苯（DAB）和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5．0左右時，DAB在450nm波優(yōu)點有最大汲取，當(dāng)pH值降為L0時，最大汲取波長移至492nm，同時摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸停止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有最大消光系數(shù)，假如HRP量少，H：O：和TMB過量時，則形成藍(lán)色的陽離子根。降低pH，即可使藍(lán)色的陽離子根變化為黃色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為停止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此，450nm和492nm兩個波長是目前ELISA測定很常用的。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動轉(zhuǎn)換的部件，可以同時安裝6～8片濾光片，所配備的濾光片均應(yīng)包含上述兩個波長，有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大。除了這兩個基本濾光片外，考慮到雙波長比色的需要，還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片，其他濾光片可依據(jù)本身的需要選擇。有時，有的試驗室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測定，故酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家對其生產(chǎn)的酶標(biāo)儀擴(kuò)展了紫外檢測功能，此時需要一個340nm波長濾光片。此時，酶標(biāo)儀的測定波長范圍就成為340750nm或800nm。酶標(biāo)儀有單波長和雙波長檢測功能。有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對顯色具最大汲取的波長即450nm或492nm進(jìn)行比色測定；而“雙波長”則除了用對顯色具最大汲取的波長即450nm或492nm進(jìn)行比色測定外，同時用對特異顯色不敏感的波長如630nm進(jìn)行測定，酶標(biāo)儀最終打印出來的吸光度則為二者之差。630nm波長下得到的吸光度是非特異的，來自于板孔上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的汲取。因此，在ELISA比色測定中，最好使用雙波長，且不必設(shè)空白孔。測定的吸光度范圍通常，酶標(biāo)儀的吸光度測定范圍在0～2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標(biāo)儀可測定的吸光度一般在0～2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可實現(xiàn)3.5以上，而且能保持特別好的精密度與線性。因此，對于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意努力探求大的吸光度范圍，重要要看在肯定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。光學(xué)系統(tǒng)酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道（通常為8或12通道，亦有單通道）檢測，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測定通道外，有的酶標(biāo)儀還有一個參比通道，每次測定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標(biāo)儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避開因通道不同所致的差別。檢測速度酶標(biāo)儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快，有利于提高檢測的精密度，即避開由于測定過程中，因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差別。目前市場上常見的酶標(biāo)儀檢測速度都特別快，通常在數(shù)秒鐘內(nèi)。震板功能酶標(biāo)儀的震板功能是指酶標(biāo)儀在對ELISA板孔進(jìn)行比色測定前對其進(jìn)行振蕩混勻，使板孔內(nèi)顏色均一、目前市場上常見的酶標(biāo)儀均有震板功能，所不同的是震板方式，有的可按上下、左右或旋轉(zhuǎn)等方式及振蕩幅度等任意調(diào)整；有的則較為固定。使用有震板功能的酶標(biāo)儀，在進(jìn)行ELISA測定顯色反應(yīng)完成加入停止劑后，可不必振蕩混勻，直接放人酶標(biāo)儀上測定即可。溫育功能溫育功能是指酶標(biāo)儀自身能按要求自動精準(zhǔn)明確地掌控儀器內(nèi)部的溫度，使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內(nèi)部完成，而無需再外配溫箱。目前，只有少部分酶標(biāo)儀具有此種功能，溫育功能只是酶標(biāo)儀的一個附加功能，是否具有并不能說明酶標(biāo)儀檔次的高處與低處及儀器的優(yōu)劣。作為試驗室是否選擇，則可依據(jù)本身試驗室的條件及需要來決議。軟件功能軟件功能是指酶標(biāo)儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標(biāo)動力學(xué)、紫外和凝集等數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析并報告結(jié)果的功能。軟件功能是中高檔酶標(biāo)儀的一個特別緊要的功能。假如硬件方面區(qū)別不大，則軟件就成為判定酶標(biāo)儀優(yōu)劣的惟一指標(biāo)。對于用戶來說，好的軟件功能，對實際工作會有較大的幫忙。ELISA定性測定，酶標(biāo)儀如具有陽性推斷值（cut—off）及其測定“灰區(qū)”（即指測定吸光度處于cutoff四周的肯定區(qū)域，此區(qū)域內(nèi)結(jié)果應(yīng)為“可疑”）的統(tǒng)計計算功能，不但方便了試驗室工作人員，而且在某些特定的情況下，有特別高的應(yīng)用價值。因此，如目的是定量測定，則在酶標(biāo)儀的軟件功能中，最好要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他諸如連點、直線等回歸計算，則可依據(jù)酶標(biāo)儀的應(yīng)用目的而定，如兼用于微量生化測定，則此類回歸計算就很有必需。另外，酶標(biāo)儀兼做酶標(biāo)動力學(xué)、凝集反應(yīng)測定所需的軟件是否應(yīng)具備，當(dāng)然也應(yīng)依據(jù)使用目的而定。由于此類軟件一般都較為昂貴，酶標(biāo)儀常另外單獨按需配備，假如不是試驗室特殊需要，就不必強求這種軟件功能。語言界面通常進(jìn)口的中高檔酶標(biāo)儀人機(jī)對話多采用英文。這對于某些基層試驗室可能會存在語言方面的困難，從而難以最大限度地發(fā)揮酶標(biāo)儀的作用。為解決這方面的問題，已有一些酶標(biāo)儀采用了中文界面。這樣就大大方便了廣闊基層試驗室技術(shù)人員的使用。盡管酶標(biāo)儀的發(fā)展極為快速，種類繁多，功能也不絕加強，但其最根本的功用是不變的，即比色測定。大凡比色測定，其基本要求就是在肯定吸光度范圍內(nèi)要有好的測