SARS冠狀病毒實驗活動風險評估報告

SARS冠狀病毒實驗活動風險評估報告一、生物因子(一)一般特性SARS冠狀病毒（SARS-CoV），屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，為單股正鏈RNA病毒。SARS-CoV基因組由大約30000個核苷酸組成，在已發(fā)現(xiàn)的RNA病毒中是最大的，與經(jīng)典冠狀病毒僅有約60%的同源性，但基因組的組織形式與其他冠狀病毒相似。嚴重急性呼吸綜合征（SevereAcuteRespiratorySyndromes），又稱傳染性非典型肺炎，簡稱SARS，是一種因感染SARS冠狀病毒引起的呼吸系統(tǒng)傳染性疾病。其主要通過近距離空氣飛沫傳播，以發(fā)熱、頭疼、肌肉酸痛、乏力，干咳少痰等為主要臨床表現(xiàn)，嚴重者可出現(xiàn)呼吸窘迫。此病傳染性強，病死率高。感染后，臨床多表現(xiàn)為重癥肺炎，且以發(fā)病快、癥狀重，以及進展迅速為特點。（二）來源SARS患者是主要的傳染源，處于感染初期的患者的咳嗽癥狀最明顯，這時也是最危險的傳染源。不典型患者是比較難管理的傳染源。這類患者并無異常表現(xiàn)，僅僅是胸部有病變，因而對于他們的診斷和管理就比較困難，也就容易流散在社會上造成疫情的蔓延。國內(nèi)某些研究機構(gòu)已經(jīng)在果子貍體內(nèi)分離到了與SARS冠狀病毒基因結(jié)構(gòu)相似的冠狀病毒，但是還不能確定哪一種動物是SARS病毒的來源，需進行進一步研究；實驗室保存的傳染性SARS樣品是需要倍加重視的傳染源。另有研究發(fā)現(xiàn)，蝙蝠是類SARS病毒的自然宿主，蝙蝠攜帶冠狀病毒，蝙蝠類SARS冠狀病毒與人SARS冠狀病毒基因組序列同源性大92%，揭示了蝙蝠是類SARS冠狀病毒的自然宿主，并證明了冠狀病毒與蝙蝠宿主存在協(xié)同進化關系，為SARS冠狀病毒的宿主動物溯源提供了證據(jù)。（三）傳染性SARS冠狀病毒傳染性極強，患者的傳染性與其呼吸道癥狀呈正比，在傳播過程常常會出現(xiàn)超級傳染事件（SuperSpreadEvents，SSE），這個過程一般會導致20名以上的健康人被感染SARS冠狀病毒。新加坡的5個超級傳染事件一共使122名健康人感染了SARS冠狀病毒；北京市的1個超級傳染事件就感染了27名健康人。但沒有證據(jù)表明超級傳播者的病原具有特殊的生物學特性。（四）傳播途徑目前公認最主要的傳播途徑是：（1）呼吸道近距離的飛沫傳播。在急性期患者咽拭子、痰標本中可以檢測到很高水平的SARS冠狀病毒，因此，在一定半徑的空間內(nèi)會存在病毒從而引起近距離呼吸道傳播。氣溶膠傳播，即通過空氣污染物氣溶膠顆粒這一載體在空氣中作為中距離傳播，是經(jīng)空氣傳播的另一種方式。含有病毒的分泌物可以在許多物體表面存活，因此，在一定意義上講，與患者接觸同一公共設施也會導致被感染。（2）腸道傳播。WHO最近的研究成果顯示，SARS冠狀病毒能在腹瀉患者的排泄物內(nèi)存活多達4d，因此，不能排除經(jīng)糞—口途徑感染SARS的可能，也就是說被患者排泄物污染的水、食物和物品都可能造成感染。（3）血液傳播和垂直傳播。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些急性期患者伴有病毒血癥。（五）易感性一般來說，人群普遍易感。從發(fā)病年齡分布來看，成年人比較多見，20～30歲的發(fā)病人數(shù)最多，而10歲以下的兒童發(fā)病人數(shù)最少。老年人的病死率最高，青壯年的死亡率則較低，這可能與老年人免疫力弱、機體調(diào)節(jié)不良有關。與SARS癥狀初期的病人的密切接觸者是高危險人群之一。醫(yī)護人員和病人家屬與親友在治療、護理、陪護、探望病人時，同病人近距離接觸次數(shù)多，接觸時間長，如果防護措施不力，就很容易感染SARS冠狀病毒。從事SARS冠狀病毒相關實驗室操作的工作人員和果子貍等野生動物飼養(yǎng)銷售的人員，也可能被感染的高危人群。（六）潛伏期患者感染SARS冠狀病毒后，約經(jīng)過2周左右，一般2～12d的潛伏期，開始出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽癥狀。感染初期患者的傳染性較強，排毒量和排毒時間一般與病情輕重成正比。哈佛大學公共衛(wèi)生學院的庫珀等人用“基本傳染數(shù)R”來評價一種傳染病的傳播潛力，即R=2時就意味著一個患者可以傳染兩個健康人。通過分析香港和新加坡的疫情，發(fā)現(xiàn)SARS的基本傳染數(shù)為2.7～3，遠遠低于艾滋病、水痘、天花等傳染病。但是由于冠狀病毒可能在呼吸道上皮細胞中增殖，局部病毒濃度較高，因此，在對病人進行口腔檢查、氣管插管時極易被感染，這也正是醫(yī)務人員感染比例偏高的原因。（七）劑量—效應關系目前SARS冠狀病毒感染人的劑量無報道，但由近距離經(jīng)呼吸道飛沫傳播是肯定的，而且經(jīng)實驗結(jié)果表明，SARS冠狀病毒以1×105TCID50劑量經(jīng)滴鼻感染恒河猴，導致出現(xiàn)非典型肺炎的病理性改變。（八）致病性感染SARS冠狀病毒的病例臨床表現(xiàn)為急性起病，自發(fā)病之日起，2～3周內(nèi)病情都可處于進展狀態(tài)，主要有以下三類癥狀：（1）發(fā)熱及相關癥狀。常以發(fā)熱為首發(fā)和主要癥狀，體溫一般高于38℃，常呈持續(xù)性高熱，可伴有畏寒、肌肉酸痛、關節(jié)酸痛、頭痛、乏力。在早期，使用退燒藥可有效退熱；進入進展期，通常難以用退熱藥控制高熱。使用糖皮質(zhì)激素可對熱型造成干擾。（2）呼吸系統(tǒng)癥狀可有咳嗽，多為干咳、少痰，少部分患者出現(xiàn)咽痛。常無上呼吸道卡他癥狀?？捎行貝?，嚴重者漸出現(xiàn)呼吸加速、氣促，甚至呼吸窘迫。呼吸困難和低氧血癥多見于發(fā)病6～12d以后。（3）其他方面癥狀。部分患者出現(xiàn)腹瀉、惡心、嘔吐等消化道癥狀。（九）變異性SARS冠狀病毒基因組從5’端到3’端依次為：5’-多聚酶-S-E-M-N-3’。5’端有甲基化帽子結(jié)構(gòu)，其后是72個核苷酸的引導序列。基因組RNA約2/3為開放閱讀框架（ORF）1a/1b，編碼RNA多聚酶（Rep）。該蛋白直接從基因組RNA翻譯，形成多蛋白前體，后者進一步被病毒主要蛋白酶3CLpro切割，主要負責病毒的轉(zhuǎn)錄和復制。Rep的下游有4個ORF，分別編碼S、E、M、N四種結(jié)構(gòu)蛋白，它們從亞基因組mRNA中翻譯，亞基因組mRNA以不連續(xù)轉(zhuǎn)錄機制合成，其轉(zhuǎn)錄由轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列（TRS）起始，后者保守序列為AAACGAAC。基因組3’端有polyA尾。目前的基因序列分析表明SARS冠狀病毒的S基因尤其是S1區(qū)變異程度較高，N基因較為保守。基因組的突變率在0.4%～0.7%之間，研究結(jié)果分析沒有發(fā)現(xiàn)病毒變異與臨床病程發(fā)展之間有明確的聯(lián)系。（十）穩(wěn)定性病毒對有機溶劑敏感，乙醚4℃24h可完全滅活病毒，75%乙醇5min可使病毒失去活力，含氯的消毒劑5min可以滅活病毒。根據(jù)SARS冠狀病毒對消毒劑的抵抗力，本實驗選擇75%乙醇溶液和0.5%有效氯濃度的次氯酸鈉溶液用于SARS冠狀病毒相關實驗的消毒處理。病毒對溫度敏感，隨溫度升高，其抵抗力下降，37℃可存活4d，56℃加熱90min、75℃加熱30min能夠滅活病毒。紫外線照射60min可破壞病毒的感染性。在人體常見的三種排泄物（痰、糞便、尿液）和血液中，SARS病毒能長時間保持活力。在24℃條件下，在痰中和糞便中存活約5d，在尿液中存活約10d，在血液中可存活15d。在室內(nèi)條件下，濾紙、棉布、木塊、土壤、金屬、塑料、玻璃等表面可存活3d。（十一）預防和治療目前尚缺少針對SARS病毒的特異性治療方法，臨床上應以對癥支持治療和針對并發(fā)癥的治療為主。應避免盲目應用藥物治療，尤其應避免多種藥物（如抗生素、抗病毒藥、免疫調(diào)節(jié)劑、糖皮質(zhì)激素等）長期、大劑量地應用。具體治療方案詳見原衛(wèi)生部《傳染性非典型肺炎<SARS>診療方案》?！吨腥A人民共和國傳染病防治法》已將SARS列為法定乙類傳染病并參照甲類傳染病進行管理。要針對傳染源、傳播途徑、易感人群三個環(huán)節(jié)，采取以管理和控制傳染源、預防控制醫(yī)院內(nèi)傳播為主的綜合性防治措施，努力做到“早發(fā)現(xiàn)、早報告、早隔離、早治療”。特別是在SARS流行的情況下，要采取措施，確?！八脑纭贝胧┞鋵嵉轿弧娬{(diào)就地隔離、就地治療，避免遠距離傳播。（十二）事故分析迄今為止，國內(nèi)外共報道多起實驗室感染事件。2003年9月，由于不當?shù)膶嶒灣绦驅(qū)е挛髂崃_病毒樣本與SARS冠狀病毒在BSL-3實驗室里交叉感染，新加坡國立大學一名27歲的研究生感染SARS冠狀病毒；2003年12月，臺灣軍方醫(yī)學院防非典研究所BSL-4實驗室里，一名研究人員在處理含有SARS冠狀病毒廢棄物時，違規(guī)打開密封門，在此過程中感染SARS冠狀病毒；2004年3～4月，中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所研究人員采用未經(jīng)證實有效的滅活方法在BSL-3實驗室滅活SARS冠狀病毒后，將其帶到普通實驗室，而未經(jīng)完全滅活的病毒，感染了本實驗室兩名工作人員，引起發(fā)病，并造成社會上的再次傳染，共感染10人，其中一人死亡。二、風險評估與風險控制（一）實驗室活動BSL-3實驗室從事SARS冠狀病毒的實驗活動包括病毒核酸檢測、病毒分離培養(yǎng)和血清抗體微量中和試驗。1.病毒核酸檢測實驗存在的風險和控制措施（見表8-15）表8-15病毒核酸檢測實驗存在的風施險和控制措施名稱實驗操作可能風險發(fā)生概率發(fā)生范圍控制措施殘留風險核酸提取1.標本轉(zhuǎn)移至生物安全柜離心管掉落破裂或破碎，感染性物質(zhì)濺出，同時可能產(chǎn)生氣溶膠低生物安全柜內(nèi)標本處理時要動作輕柔，應事先在操作臺面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺面及更換新的紗布或吸水紙低2.標本振蕩和擠壓產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)標本處理時要動作輕柔，應事先在操作臺面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺面及更換新的紗布或吸水紙低3.標本離心產(chǎn)生氣溶膠或破裂溢出低生物安全柜內(nèi)或離心機實驗室采用帶有安全套蓋的離心套筒，如離心過程中發(fā)生收集管破裂，應關閉電源，在生物安全柜內(nèi)處理相關感染性物質(zhì)，徹底清潔和消毒離心機套桶。如果在不帶有安全套筒的離心機操作，離心過程中發(fā)生收集管破裂時，應關閉電源并且保持離心機蓋子關閉30min。如果在機器停止運行后發(fā)生了破裂，離心機蓋應立即關閉并保持30min，并及時通知本實驗室生物安全員采取相應措施低4.標本轉(zhuǎn)移離心管1.離心管開蓋時液體濺出，離心管滑落，打翻標本2.標本轉(zhuǎn)移時，吸頭漏液3.加樣時，感染性液體濺出，污染離心管外部、手臂或生物安全柜臺面低生物安全柜內(nèi)1.在操作時，動作要小心，以防開蓋時離心管滑落、打翻或濺出2.使用移液器時，確保吸頭與移液器連接緊密3.樣品打開前進行短暫離心，去除樣品管蓋上的殘留，避免開蓋時樣品濺出4.使用帶濾芯的吸管，動作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺面，應及時消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%的酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進行高壓處理低2.SARS病毒分離實驗操作風險識別與控制（見表8-16）表8-16SARS病毒分離實驗操作風險識別與控制措施名稱實驗操作可能風險發(fā)生概率發(fā)生范圍控制措施殘留風險接種前標本處理1.標本轉(zhuǎn)移至生物安全柜離心管掉落破裂或破碎，感染性物質(zhì)濺出，同時可能產(chǎn)生氣溶膠低生物安全柜內(nèi)標本處理時要動作輕柔，應事先在操作臺面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺面及更換新的紗布或吸水紙低2.標本振蕩和擠壓產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)標本處理時要動作輕柔，應事先在操作臺面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺面及更換新的紗布或吸水紙低3.標本離心產(chǎn)生氣溶膠或破裂溢出低生物安全柜內(nèi)或離心機實驗室采用帶有安全套蓋的離心套筒，如離心過程中發(fā)生收集管破裂，應關閉電源，在生物安全柜內(nèi)處理相關感染性物質(zhì)，徹底清潔和消毒離心機套桶。如果在不帶有安全套筒的離心機操作，離心過程中發(fā)生收集管破裂時，應關閉電源并且保持離心機蓋子關閉30min。如果在機器停止運行后發(fā)生了破裂，離心機蓋應立即關閉并保持30min，并及時通知本實驗室生物安全員采取相應措施低4.標本轉(zhuǎn)移至離心管1.離心管開蓋時液體濺出，離心管滑落，打翻標本2.標本轉(zhuǎn)移時，吸頭漏液3.加樣時，感染性液體濺出，污染離心管外部、手臂或生物安全柜臺面低生物安全柜內(nèi)1.在操作時，動作要輕緩，以防開蓋時離心管滑落、打翻或濺出2.使用移液器時，確保吸頭與移液器連接緊密，吸取或吹打液體時動作要輕緩3.樣品打開前進行短暫離心，去除樣品管蓋上的殘留，避免開蓋時樣品濺出4.使用帶濾芯的吸管，動作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺面，應及時消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%的酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進行高壓處理低接種細胞過程1.吸取處理后標本接種細胞標本滴落臺面或抽吸的過程形成氣溶膠低生物安全柜內(nèi)使用帶濾芯的吸管，動作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺面，應及時消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%的酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進行高壓處理低2.移至孵箱孵育接種后培養(yǎng)瓶跌落形成氣溶膠低實驗室核心區(qū)將培養(yǎng)瓶口擰緊，轉(zhuǎn)移時使用轉(zhuǎn)移托盤低3.孵育后Hank’s液清洗細胞形成氣溶膠，清洗液濺灑低生物安全柜內(nèi)操作時在生物安全柜內(nèi)放好帶有消毒液的紗布。用帶濾芯的吸管，動作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺面應及時消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套低4.加生長液形成氣溶膠低生物安全柜內(nèi)加生長液時動作輕柔，避免對著細胞生長面加液，加液后及時將瓶口擰緊或蓋上培養(yǎng)板板蓋低培養(yǎng)觀察1.顯微鏡觀察培養(yǎng)物移動過程跌落導致溢出或形成氣溶膠低實驗室核心區(qū)為避免大量病毒產(chǎn)生危害，一次病毒培養(yǎng)體積不超過100mL。將培養(yǎng)瓶口擰緊，放置托盤中，移動時輕緩，注意安全。大量培養(yǎng)物溢出時，停止實驗，先用一塊布或紙巾蓋上，再把消毒劑倒到上面，實驗人員先退出實驗室，至少靜置30min，然后才可把布和紙巾等物品清理走低2.培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過程形成氣溶膠低培養(yǎng)箱內(nèi)放在CO2孵箱內(nèi)的病毒培養(yǎng)瓶需擰緊，密封袋包裝，并放在托盤上，以防止污染孵箱低培養(yǎng)物收獲細胞培養(yǎng)物的收獲分裝分裝過程滴落臺面，污染管壁，凍存管封口不嚴低生物安全柜內(nèi)為避免大量病毒產(chǎn)生危害，一次病毒培養(yǎng)體積不超過100mL。操作時在生物安全柜內(nèi)放好帶有消毒液的紗布。若滴落在生物安全柜臺面，應及時消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。分裝病毒時應使用帶墊圈、密封效果好的旋蓋管，分裝時注意安全，確保病毒不污染管外壁，管外壁經(jīng)75%醫(yī)用酒精紗布擦拭后方可移出生物安全柜低3.微量中和實驗存在的風險和控制措施（見表8-17）表8-17微量中和實驗存在的風險和控制措施名稱實驗操作可能風險發(fā)生概率發(fā)生范圍控制措施殘留風險微量中和試驗在96孔板中加入已知滴度的病毒產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)加病毒時動作輕柔，應事先在操作臺面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺面并更換新的紗布或吸水紙低病毒和抗體混勻產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)混勻時動作輕柔，應事先在操作臺面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺面及更換新的紗布或吸水紙低96孔細胞培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)移細胞板跌落而產(chǎn)生氣溶膠低實驗核心區(qū)使用細胞托盤轉(zhuǎn)運細胞板，發(fā)生細胞板意外跌落時，將含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布覆蓋污染區(qū)，并用次氯酸鈉消毒劑噴灑污染區(qū)及周邊，作用半小時左右后，將污染的紗布和細胞板放于垃圾袋內(nèi)進行高壓處理；實驗室核心區(qū)疑有氣溶膠污染時，需用過氧化氫消毒器進行室內(nèi)空氣消毒，并按照程序進行意外事故報告低（二）設施設備設施設備中，生物安全柜、培養(yǎng)箱、離心機、振蕩器、冰箱、高壓滅菌器的可能風險以及控制措施見表8-18。表8-18設施、設備使用中的可能風險及控制措施儀器名稱可能風險發(fā)生可能性后果描述控制措施生物安全柜氣流異常不大可能對實驗人員及實驗室的高度危險操作培訓，設備定期維護。使用時，觀察窗不要抬得過高；柜內(nèi)盡量少放儀器和物品，不要阻塞后面氣口處的空氣流通；禁止在柜內(nèi)使用酒精燈；在柜內(nèi)的所有工作都要在工作臺中央或后部進行，并且通過觀察窗能看見柜內(nèi)的操作；盡量減少操作者后面的人員走動，操作者不要頻繁移動及揮動手臂以免破壞定向氣流；前面的空氣柵格不要被吸管或其他材料擋?。簧锇踩竦娘L扇在工作開始前及操作結(jié)束后至少要再運行5min培養(yǎng)箱二氧化碳泄漏；電源短路；培養(yǎng)物產(chǎn)生氣溶膠可能性低人員接觸污染1.每次使用二氧化碳培養(yǎng)箱時，注意觀察二氧化碳氣表以及培養(yǎng)箱顯示是否正常，確保電源線連接正常，電源線周圍無液體存在2.定期更換二氧化碳培養(yǎng)箱的空氣濾膜3.嚴格規(guī)范操作，定期檢查離心機離心管發(fā)生破裂而氣溶膠釋放可能性低人員接觸污染配備有安全套筒的離心機，可把它轉(zhuǎn)移到生物安全柜內(nèi)處理振蕩器產(chǎn)生氣溶膠、泄漏和容器破裂可能性低人員樣品接觸污染必須使用塑料的器皿，因為玻璃可能會破裂而釋放出感染性物質(zhì)，而且可能傷及操作者。在操作結(jié)束后，容器應在生物安全柜里才能重新開啟冰箱保存管泄漏可能性極低人員樣品接觸污染操作培訓，做好個人防護高壓滅菌器人員接觸高溫部位，發(fā)生燙傷可能性中等人員發(fā)生燙傷操作培訓，做好個人防護（三）人員1.健康監(jiān)護和健康狀況評估實驗人員、輔助人員、后勤保障人員上崗前應建立個人健康檔案，進行定期的健康體檢和相應的免疫接種。人員的健康狀況應當符合實驗室的安全工作要求。從事SARS冠狀病毒研究的實驗室工作人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進入BSL-3實驗室工作，出現(xiàn)下列情況時不能進入:患發(fā)熱性疾?。桓忻?、上呼吸道感染，或其他導致抵抗力下降的情況；妊娠；已經(jīng)在實驗室控制區(qū)域內(nèi)連續(xù)工作4h以上，或其他原因造成的疲勞狀態(tài)；心理素質(zhì)不穩(wěn)定的也盡量避免進入實驗室；未經(jīng)充分專業(yè)操作技能培訓的人員。SARS冠狀病毒實驗人員的健康監(jiān)護從開始進行實驗當日開始，直至實驗結(jié)束后最長潛伏期結(jié)束，期間應每日早晚測量體溫并觀察相應癥狀并記錄。若操作者或其所在實驗室的工作人員在此期間出現(xiàn)發(fā)熱、體溫高于38℃等類似癥狀，則應被視為可能發(fā)生實驗室感染，應立即報告實驗室負責人，采取早發(fā)現(xiàn)、早報告、早隔離、早治療以控制管理傳染源為主的綜合性防治措施。對疑似感染者，采取嚴格的隔離防護措施，送至指定醫(yī)院就診，并做好轉(zhuǎn)運過程的安全隔離和防護、消毒工作。另外的措施有實驗活動前采集本底血清樣本，實驗活動期間每天測體溫，必要時采集血液樣本進行前后對比檢測，以確定是否感染。2.人員資質(zhì)和培訓實驗人員、輔助人員、后勤保障人員上崗前均須接受嚴格的生物安全，以及相關操作的技術培訓，包括實驗室設施、設備、個人防護、實驗操作等培訓。同時，必須熟悉和嚴格遵守實驗室的管理要求。SARS病毒實驗操作人員風險識別與控制明細表見表8-19.表8-19SARS病毒實驗操作人員風險識別與控制措施潛在風險因素發(fā)生可能性后果嚴重性控制措施實驗人員技術水平技術培訓不足或操作不熟練導致誤操作低嚴重實驗人員需接受相關技術培訓并考核合格后方能上崗，定期進行相關培訓及演練人員健康水平實驗人員身體狀況不佳或患有基礎疾病低中實驗室工作人員每年參加體檢，預留本底血清標本；實驗人員進入BSL-3實驗室前需測量體溫，體溫高于37℃者不能進入未經(jīng)授權(quán)人員未經(jīng)授權(quán)人員進入BSL-3實驗室低嚴重進入BSL-3實驗室須得到相關部門和實驗室負責人的批準，應詳細登記出入時間，并保證2名以上的人員同時進入（四）意外事件、事故帶來的風險SARS冠狀病毒實驗的安全防護重點是實驗操作過程中盡量減少氣溶膠的產(chǎn)生和相關人員的呼吸道的保護，如佩戴N95口罩等，防止通過吸入氣溶膠而感染。1.臨床標本的處理對疑似SARS冠狀病毒感染的病人的咽拭子、肺組織和血液標本，這些標本當中有可能含活病毒，但濃度不詳。對此類臨床標本的操作都必須在實驗室生物安全柜內(nèi)操作，實驗操作人員按三級防護級別進行個體防護。2.涉及活病毒的操作涉及活病毒的操作是指如病毒分離、組織培養(yǎng)、TCID50測定、中和試驗、間接免疫熒光實驗等，以及SARS冠狀病毒抗原、抗體檢測前，對血清進行56℃水浴90min滅活處理，以及SARS冠狀病毒電鏡標本制作，超薄切片標本甲醛、鋨酸固定前的實驗。此類實驗必須在生物安全三級實驗室的生物安全柜內(nèi)進行。實驗操作人員按三級防護級別進行個人防護。3.已滅活的病毒或標本的操作已滅活的病毒或血清標本等用于病毒特異性核酸、抗原、抗體檢測和電鏡切片的觀察實驗時，可在BSL-2實驗室進行操作。實驗操作人員按二級防護級盡量使用塑料材質(zhì)的實驗物品，避免使用尖銳物品和利器。必須使用時應倒放在耐扎的容器內(nèi)，使用后收集在特定的帶蓋的銳器容器內(nèi)保存至最后作消毒處理或銷毀。禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。嚴格禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片等銳器。禁止徒手處理破損或打碎的玻璃器材。對于實驗室的臺面，應當對其銳角進行處理，如加裝桌角保護器或?qū)ψ澜沁M行打磨等，使桌角保持光滑，避免割傷皮膚。4.實驗室操作后的消毒措施涉及臨床標本和活病毒的實驗操作，在實驗完畢后用含0.5％有效氯的次氯酸鈉消毒劑溶液擦拭工作臺面、生物安全柜內(nèi)壁及臺面，實驗器材表面用70％酒精擦拭后移出生物安全柜。廢棄物在實驗室內(nèi)121℃高壓處理30min后才允許運出實驗室。在BSL-2實驗室中進行核酸擴增、抗體檢測等實驗時，為了確保安全，實驗過程中產(chǎn)生的廢液和使用過的耗材等都必須用含10％有效氯的次氯酸鈉消毒液浸泡30min后，才允許運出實驗室，并存放在指定的存放點進行集中處理。5.標本接種處理量的控制出于安全考慮以及便于操作，如果處理臨床標本以備接種，每次操作的標本不應超過20份。如果處理經(jīng)過擴增后的標本，病毒的原始容積≤2.5mL/份時，每次操作的標本不能超過10份；2.5～10.5mL/份時，每次實驗的標本不能超過5份；＞10.5mL/份時，每次操作的標本不能超過3份。（五）其他風險控制其他風險主要包括對化學、物理、輻射、電器和水災、火災等自然災害等的引起的風險。1.化學風險應熟知實驗涉及的試劑的化學品安全說明書（MSDS），本實驗過程中可能接觸免疫學檢測中的酸、堿，抗原片制備過程中的固定試劑，遠離火源，通風良好，應注意操作輕緩，防止濺落而接觸皮膚。如發(fā)生皮膚接觸，應停止實驗，在做好緊急處置后，撤離實驗區(qū)，用大量水沖洗，如有需要應就醫(yī)。2.物理風險如破損器皿的刺傷