高效液相色譜法分離條件的選擇

高效液相色譜法分離條件(tiáojiàn)的選擇第六組共十頁(yè)一、高效液相色譜中的速率(sùlǜ)理論二、分離條件的選擇共十頁(yè)一、高效液相色譜(sèpǔ)中的速率1、渦流擴(kuò)散(kuòsàn)與氣相色譜相同，渦流擴(kuò)散項(xiàng)也是A=2λdp。一般為了降低渦流擴(kuò)散的影響，HPLC中一般使用3～10μm的小顆粒固定相，為了填充均勻，減少不規(guī)則因子，常用球形固定相，而且要求粒度均勻。此外，HPLC色譜柱以均漿高壓填充。2、縱向擴(kuò)散

縱向擴(kuò)散系數(shù)Ｂ=2γDm,而Dm與流動(dòng)相的黏度（η）成反比，與溫度成正比。在HPLC中，流動(dòng)相是液體，其黏度比氣體黏度大得多，而且常在室溫下進(jìn)行操作，因此組分在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)Dm比氣相色譜的要小得多。一般HPLC的流速在最佳的流速，這時(shí)縱向擴(kuò)散很小可以忽略。共十頁(yè)3、傳質(zhì)阻抗（1）固定相傳質(zhì)阻抗:在化學(xué)鍵合相色譜法中，鍵合相多為單分子層，即厚度df可以忽略，因此固體相傳質(zhì)阻抗Cs可以忽略。（2）流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗：在HPLC中存在流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗Cm.因?yàn)樵诹髀分行牡牧鲃?dòng)相中組分分子還沒(méi)來(lái)得及擴(kuò)散進(jìn)入流動(dòng)相和固定相界面，就被流動(dòng)相帶走，因此總比靠近填顆粒與固定相達(dá)到(dádào)分配平衡的分子移行得快些，結(jié)果是峰展寬。（Cm=Wm×dp2/Dm）(3)靜態(tài)流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗：HPLC中靜態(tài)流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗系數(shù)Cm也與固定相顆粒dp的平方成正比，與分子在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)成反比。共十頁(yè)4、固定相顆粒粒度對(duì)塔板高度的影響

由于A、Cm和Csm均隨固定相顆粒粒度dp的變小而變小，而且實(shí)驗(yàn)(shíyàn)還表明固體相顆粒粒度越小，柱效受流動(dòng)相線速度的影響也越小。所以根據(jù)速率理論，HPLC的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)該是：①小粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相；②低黏度流動(dòng)相，流速不宜快；③柱溫適當(dāng)。共十頁(yè)二、分離(fēnlí)條件的選擇（一）正相鍵合相色譜法的分離條件正相鍵合相色譜法一般以極性鍵合相為固定相，如氰基、氨基鍵合相等。分離含雙鍵的化合物常用(chánɡyònɡ)氰基鍵合相，分離多基團(tuán)化合物常用(chánɡyònɡ)氨基合相。

正相鍵合相色譜的流動(dòng)相通常采用烷烴加量極性調(diào)節(jié)劑，極性調(diào)節(jié)劑常從Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ組（表18-3）中選（見(jiàn)課本390頁(yè)），若還難以達(dá)到所需要的分離選擇性，還可以使用三元或四元溶劑系統(tǒng)。共十頁(yè)

（二）反相鍵合相色譜法的分離條件反相鍵合相色譜法中，常選用非極性鍵合相，非極性鍵合相可用于分離分子型化合物，也可以用于分離離子型或離子化的化合物。

在反相鍵合相色譜法中，流動(dòng)相一般極性最強(qiáng)的水為基礎(chǔ)溶劑，加入甲醇、乙氰等極性調(diào)節(jié)劑。極性調(diào)節(jié)劑的性質(zhì)以及其與水的混合比例對(duì)混合溶質(zhì)的保留值合分離選擇性有顯著影響。同時(shí)(tóngshí)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的離子強(qiáng)度也能改善分離效果。例如在流動(dòng)相中加入0.1%~1%的出酸鹽、磷酸鹽等，可減弱固定表面相殘余硅醇基的干擾作用，減少峰的拖尾，改善分離效果。共十頁(yè)（三）反相離子對(duì)色譜法的分離條件

反相離子對(duì)色譜法要求盡可能選擇表面覆蓋度高且疏水性強(qiáng)的鍵合相，短鏈烷烴基鍵合相的穩(wěn)定性較差而不宜采用。

在反相離子對(duì)色譜法中，影響試樣組分的保留值合分離選擇性的主要(zhǔyào)因素有：⑴離子對(duì)試劑的選擇；⑵流動(dòng)相pH的選擇；⑶有機(jī)溶劑及其濃度的選擇。共十頁(yè)謝謝(xièxie)觀看共十頁(yè)內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)高效(ɡāoxiào)液相色譜法分離條件的選擇。由于A、Cm和Csm均隨固定相顆粒粒度dp的變小而變小，而且實(shí)驗(yàn)還表明固體相顆粒粒度越小，柱效受流動(dòng)相線速度的影響也越小。所以根據(jù)速率理論，HPLC的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)該是：①小粒度、均勻的球形化學(xué)鍵