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文檔簡介
免疫細(xì)胞的別離2024/11/71.免疫細(xì)胞1、概念直接參與免疫應(yīng)答及與免疫應(yīng)答相關(guān)的所有細(xì)胞。2、分類*單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng):單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞〔DCs)*淋巴細(xì)胞系統(tǒng):T淋巴細(xì)胞〔Th/Tc) B淋巴細(xì)胞NK細(xì)胞*粒細(xì)胞系統(tǒng):中性粒細(xì)胞 噬酸性粒細(xì)胞 噬堿性粒細(xì)胞2024/11/72.免疫細(xì)胞的別離人外周血單個(gè)核細(xì)胞的別離淋巴細(xì)胞的別離免疫細(xì)胞亞群的別離2024/11/73.細(xì)胞別離原理細(xì)胞的大小和比重細(xì)胞外表標(biāo)志細(xì)胞黏附于各種物質(zhì)外表的特性2024/11/74.一、人外周血單個(gè)核細(xì)胞的別離
——Ficoll分層離心法人外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC):Monocyte、Lymphocyte。原理:血液中各細(xì)胞成分的比重不同,經(jīng)離心沉淀,即可在分層液與血漿之間獲得比較純的單個(gè)核細(xì)胞,其中淋巴細(xì)胞占90%以上。
2024/11/75.不同細(xì)胞密度不同
紅細(xì)胞和多形核白細(xì)胞1.092
單個(gè)核細(xì)胞1.070
分層液1.077
2024/11/76.一、人外周血單個(gè)核細(xì)胞的別離
——Ficoll分層離心法
Ficoll分層液:蔗糖聚合物+泛影葡胺,密度1.077+0.001g/L。2024/11/77.二、淋巴細(xì)胞的別離
尼龍棉柱法E花環(huán)別離法補(bǔ)體細(xì)胞毒法免疫熒光法
2024/11/78.二、淋巴細(xì)胞的別離
——尼龍棉柱法原理:B細(xì)胞和單核細(xì)胞具有易黏附的特性,將淋巴細(xì)胞懸液加至尼龍纖維柱上,37℃作用1~2h后,洗脫的為非黏附性的T細(xì)胞。PBMC尼龍纖維棉柱B細(xì)胞單核細(xì)胞T細(xì)胞2024/11/79.二、淋巴細(xì)胞的別離
—E花環(huán)別離法〔純化T細(xì)胞〕原理*成熟T細(xì)胞外表有綿羊紅細(xì)胞受體〔E受體,CD2分子〕,可和SRBC形成E花環(huán),B細(xì)胞那么無。*E花環(huán)比重大,沉淀,經(jīng)別離液別離來。*E花環(huán)周圍的綿羊RBC可用低滲法除去。.三、免疫細(xì)胞亞群的別離免疫磁珠別離法流式細(xì)胞術(shù)2024/11/711.三、免疫細(xì)胞亞群的別離
—免疫磁珠別離法原理:將抗體交聯(lián)于磁珠外表形成免疫磁珠〔Immunomagneticbead,IMB〕,免疫磁珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上,從而與細(xì)胞相連,在高強(qiáng)度、梯度磁場(chǎng)中到達(dá)細(xì)胞磁性別離的目的。2024/11/712免疫細(xì)胞的別離.三、免疫細(xì)胞亞群的別離
—免疫磁珠別離法1.直接法:抗細(xì)胞外表分子抗體+磁性微球免疫磁珠+細(xì)胞懸液與免疫磁珠結(jié)合的細(xì)胞2.間接法:第二抗體+磁性微粒第一抗體+細(xì)胞特定細(xì)胞...免疫磁珠法分選裝置.三、免疫細(xì)胞亞群的別離
—流式細(xì)胞術(shù)〔FlowCytometry,F(xiàn)CM〕FCM將免疫熒光技術(shù)應(yīng)用于流式細(xì)胞儀,對(duì)單個(gè)細(xì)胞的外表標(biāo)志〔抗原或受體〕進(jìn)行快速、精確的分析和自動(dòng)檢測(cè),并將不同類型的細(xì)胞分選收集。原理:細(xì)胞經(jīng)熒光染色后,通過高速流動(dòng)系統(tǒng),細(xì)胞排成單行,逐個(gè)流經(jīng)檢測(cè)區(qū)。當(dāng)細(xì)胞從流動(dòng)室噴嘴處流出時(shí),超聲震動(dòng)液流,使液流段裂成一連串的均勻小滴,每個(gè)小滴內(nèi)最多含一個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞經(jīng)激光束照射產(chǎn)生熒光和散射光,由光電倍增管接收,轉(zhuǎn)換成脈沖信號(hào),數(shù)據(jù)經(jīng)電腦處理,分辨細(xì)胞類型。2024/11/717.流式細(xì)胞儀工作原理2024/11/718.流式細(xì)胞儀2024/11/719.免疫細(xì)胞的別離人外周血單個(gè)核細(xì)胞的別離——Fi
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