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PAGE10-高考模擬·課下達(dá)標(biāo)(十五)基因工程與細(xì)胞工程1.(2024·揭陽一模)蟲草中的超氧化物歧化酶(PSSOD)具有抗蒼老作用。探討人員培育了能合成PSSOD的轉(zhuǎn)基因酵母菌。請結(jié)合如圖所示回答問題:(1)如圖所示的基因表達(dá)載體含有啟動(dòng)子,它是______聚合酶識別并結(jié)合的位點(diǎn)。(2)將圖中的基因表達(dá)載體用HindⅢ和ApaLⅠ完全酶切后,可得到______種DNA片段。由于基因表達(dá)載體存在氨芐青霉素抗性基因,因此不能導(dǎo)入用于食品生產(chǎn)的酵母菌中,緣由是______________________________________________________________________________________________________________________________________。據(jù)圖分析,可用______切除該抗性基因的部分片段使其失效,再用DNA連接酶使表達(dá)載體重新連接起來。(3)作為受體細(xì)胞的酵母菌缺失URA3基因,必需在含有尿嘧啶的培育基中才能存活,因此,圖示表達(dá)載體上的URA3基因可作為____________,供鑒定和選擇;為了篩選出勝利導(dǎo)入表達(dá)載體的酵母菌,所運(yùn)用的培育基________(填“須要”或“不須要”)添加尿嘧啶。(4)構(gòu)建基因組文庫是獲得目的基因的常用方法。與基因組文庫相比,cDNA文庫的基因數(shù)相對要少,緣由是_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________。依據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理,若想將一個(gè)抗病基因?qū)胄←?單子葉植物),從理論上說,你認(rèn)為應(yīng)當(dāng)怎樣做?____________________________________________________________________________________________________________。解析:(1)啟動(dòng)子是RNA聚合酶識別并結(jié)合的位點(diǎn)。(2)圖中基因表達(dá)載體含有1個(gè)HindⅢ切割位點(diǎn)和2個(gè)ApaLⅠ切割位點(diǎn),因此將圖中的基因表達(dá)載體用HindⅢ和ApaLⅠ完全酶切后,可得到3種DNA片段。由于基因表達(dá)載體存在氨芐青霉素抗性基因,因此不能導(dǎo)入用于食品生產(chǎn)的酵母菌中,緣由是氨芐青霉素抗性基因表達(dá)的產(chǎn)物通過食品進(jìn)入人體后,會(huì)使氨芐青霉素在人體內(nèi)所起的殺菌作用減弱或失效(“使人體對抗生素產(chǎn)生抗性”或“會(huì)使人體對抗生素不敏感”)。由圖可知,限制酶ApaLⅠ的切割位點(diǎn)位于抗性基因上,因此可用ApaLⅠ切除該抗性基因的部分片段使其失效,再用DNA連接酶使表達(dá)載體重新連接起來。(3)作為受體細(xì)胞的酵母菌缺失URA3基因,必需在含有尿嘧啶的培育基中才能存活,因此,圖示表達(dá)載體上的URA3基因可作為標(biāo)記基因,供鑒定和選擇;因?yàn)橹挥泻兄亟M質(zhì)粒的酵母菌才能在該培育基上生存,因此為了篩選出勝利導(dǎo)入表達(dá)載體的酵母菌,所運(yùn)用的培育基不須要添加尿嘧啶。(4)cDNA文庫只能收集到生物發(fā)育到某時(shí)期已發(fā)生轉(zhuǎn)錄的基因(cDNA文庫是用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA片段,因此只含有某種生物已轉(zhuǎn)錄的基因),而基因組文庫能收集到全部基因。因此與基因組文庫相比,cDNA文庫的基因數(shù)相對要少。依據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理,若想將一個(gè)抗病基因?qū)胄←?單子葉植物),從理論上說,應(yīng)當(dāng)①要選擇合適(可以侵染單子葉植物)的農(nóng)桿菌菌株;②要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì),一般為乙酰丁香酮等(或酚類物質(zhì)和糖類物質(zhì))。答案:(1)RNA(2)3氨芐青霉素抗性基因表達(dá)的產(chǎn)物通過食品進(jìn)入人體后,會(huì)使氨芐青霉素在人體內(nèi)所起的殺菌作用減弱或失效(“使人體對抗生素產(chǎn)生抗性”或“會(huì)使人體對抗生素不敏感”)ApaLⅠ(3)標(biāo)記基因不須要(4)cDNA文庫只能收集到生物發(fā)育到某時(shí)期已發(fā)生轉(zhuǎn)錄的基因(cDNA文庫是用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA片段,因此只含有某種生物已轉(zhuǎn)錄的基因),而基因組文庫能收集到全部基因①要選擇合適(可以侵染單子葉植物)的農(nóng)桿菌菌株;②要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì),一般為乙酰丁香酮等(或酚類物質(zhì)和糖類物質(zhì))2.(2024·青島一模)長春花是原產(chǎn)于非洲東海岸的野生花卉,其所含的長春堿具有良好的抗腫瘤作用?;騮ms的編碼產(chǎn)物能促進(jìn)生長素的合成,科研人員利用基因tms構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒,對愈傷組織進(jìn)行遺傳改造,解決了長春堿供不應(yīng)求的問題,操作流程如下。請回答下列問題:(1)過程①是指________,過程②采納的方法是________________。(2)從______________(填“基因組文庫”或“cDNA文庫”)中獲得的基因tms含有啟動(dòng)子,啟動(dòng)子的功能是________________________。作為運(yùn)載體的Ti質(zhì)粒應(yīng)含有____________,用以篩選含目的基因的細(xì)胞。(3)用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈,______與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合,然后在______的作用下延長,如此重復(fù)循環(huán)。(4)長春堿殺死癌細(xì)胞的同時(shí)對正常細(xì)胞也有毒性作用,為降低長春堿對正常細(xì)胞的毒性,可以利用__________制備技術(shù)制成“生物導(dǎo)彈”進(jìn)行靶向治療。解析:(1)圖中①是指脫分化;②中將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。(2)基因組文庫中獲得的基因含有啟動(dòng)子;啟動(dòng)子的功能是驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA;標(biāo)記基因的作用是篩選含目的基因的細(xì)胞。(3)PCR技術(shù)是在較高溫度下進(jìn)行的,須要Taq酶。(4)長春堿殺死癌細(xì)胞的同時(shí)對正常細(xì)胞也有毒性作用,為降低長春堿對正常細(xì)胞的毒性,可以利用單克隆抗體制備技術(shù)制成“生物導(dǎo)彈”進(jìn)行靶向治療。答案:(1)脫分化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(2)基因組文庫驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA標(biāo)記基因(3)引物Taq酶(4)單克隆抗體3.(2024·崇明區(qū)一模)回答下列有關(guān)現(xiàn)代生物技術(shù)的問題:亨廷頓舞蹈病是由單基因(HTT)突變導(dǎo)致的神經(jīng)退行性疾病,中科院利用基因編輯(CRISPR/Cas9)技術(shù)首個(gè)勝利培育出亨廷頓舞蹈病的基因“敲入”豬模型,為制備其它神經(jīng)退行性疾病大動(dòng)物模型供應(yīng)了技術(shù)范本和理論依據(jù)。詳細(xì)操作過程如圖。(1)基因編輯技術(shù)所運(yùn)用的CRISPR/Cas9系統(tǒng)須要對特定的DNA序列識別并切割,其功能類似于基因工程工具酶中的________。(2)過程①所利用的生物技術(shù)是________________。過程②體現(xiàn)的生物學(xué)原理是__________________。(3)依據(jù)圖中信息,結(jié)合已有學(xué)問推斷,基因編輯技術(shù)與轉(zhuǎn)基因技術(shù)所利用的遺傳學(xué)原理均是____________。(4)圖中成纖維細(xì)胞中的目的基因是____。A.豬的HTT基因B.人的HTT基因C.含人突變HTT基因片段的豬的HTT基因D.豬的突變HTT基因(5)在此探討之前,探討人員已建立轉(zhuǎn)基因亨廷頓舞蹈病的豬模型,但誕生不久后即死亡。由圖可知,基因“敲入”豬模型比轉(zhuǎn)基因豬模型優(yōu)勢在于____。A.可以表現(xiàn)出亨廷頓舞蹈病的癥狀B.致病基因可遺傳給后代C.培育的時(shí)間較短D.發(fā)生突變的概率更高解析:(1)基因工程工具酶是限制酶和DNA連接酶,其中限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定脫氧核苷酸序列,并使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,而DNA連接酶能將兩個(gè)具有相同末端的DNA片段連接。所以基因編輯技術(shù)所運(yùn)用的CRISPR/Cas9系統(tǒng)功能類似于基因工程工具酶中的限制酶。(2)從題圖中可以看出,過程①是將含有目的基因的成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵細(xì)胞中,所利用的生物技術(shù)是細(xì)胞核移植技術(shù),過程②是重組細(xì)胞發(fā)育成早期胚胎的過程,體現(xiàn)的生物學(xué)原理是動(dòng)物細(xì)胞核的全能性。(3)轉(zhuǎn)基因技術(shù)所利用的遺傳學(xué)原理是基因重組,從圖中看,基因編輯技術(shù)也是進(jìn)行了基因重組。(4)從題圖中可知,科學(xué)家將人的突變HTT基因的部分片段敲入了豬的HTT基因中,得到了一個(gè)重組的目的基因,因此圖中成纖維細(xì)胞中的目的基因是含人突變HTT基因片段的豬的HTT基因。(5)在轉(zhuǎn)基因亨廷頓舞蹈病的豬模型中,可以明顯地視察到相應(yīng)的病理特征和行為改變。但是,由于表達(dá)外源性致病基因片段的毒性過強(qiáng),試驗(yàn)中的轉(zhuǎn)基因豬基本在誕生后較短時(shí)間內(nèi)死亡,同時(shí)無法傳代。因此,沒有方法達(dá)到篩選治療疾病的藥物的目的。而基因“敲入”豬模型不存在這樣的問題,可以將致病基因遺傳給后代。答案:(1)限制酶(2)細(xì)胞核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞核的全能性(3)基因重組(4)C(5)B4.(2024·南通期末)已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑,其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑,但一般不能無限增殖。鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有S途徑,但能不斷分裂增殖。將這兩種細(xì)胞在培育皿中混合,加促融劑促進(jìn)細(xì)胞融合,獲得雜種細(xì)胞,并生產(chǎn)單克隆抗體。請回答:(1)生產(chǎn)單克隆抗體時(shí),一般不干脆利用一個(gè)B淋巴細(xì)胞,主要緣由是____________________。(2)①過程中,常用的與植物細(xì)胞融合不同的誘導(dǎo)因素是____________。(3)②過程為____________培育;為了從培育液中分別出雜種細(xì)胞,需在②過程向培育液中加入____________,理由是雜交瘤細(xì)胞可利用______________途徑合成DNA,從而才能在該培育液中增殖。(4)③過程的目的是選育出________________________細(xì)胞,須要進(jìn)行克隆化培育和抗體檢測,克隆化的方法最常用的是有限稀釋法,即稀釋細(xì)胞到3~10個(gè)細(xì)胞/mL,每孔滴入______(填“0.1”“1”或“10”)mL細(xì)胞稀釋液。(5)④表示雜交瘤細(xì)胞的擴(kuò)大培育,其既可在體外培育,也可注射到小鼠______內(nèi)培育。與體外培育相比,體內(nèi)培育的優(yōu)點(diǎn)是_____________________________________________。解析:(1)B淋巴細(xì)胞不能無限增殖,故生產(chǎn)單克隆抗體時(shí),一般不干脆利用一個(gè)B淋巴細(xì)胞。(2)①過程中,常用的與植物細(xì)胞融合不同的誘導(dǎo)因素是滅活的病毒。(3)②過程為動(dòng)物細(xì)胞培育;在培育液中加入氨基蝶呤,培育后收集增殖細(xì)胞。加入氨基蝶呤后,使D合成途徑阻斷,僅有D合成途徑的骨髓細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖,淋巴細(xì)胞一般不分裂增殖。因此培育液中加入該物質(zhì)后,不能生長的細(xì)胞有骨髓瘤細(xì)胞、融合的淋巴細(xì)胞、融合的骨髓瘤細(xì)胞、淋巴細(xì)胞。人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞可以利用淋巴細(xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖。(4)③過程的目的是選育出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞,須要進(jìn)行克隆化培育和抗體檢測,克隆化的方法最常用的是有限稀釋法,即稀釋細(xì)胞到3~10個(gè)細(xì)胞/mL,每孔滴入0.1mL細(xì)胞稀釋液。(5)④表示雜交瘤細(xì)胞的擴(kuò)大培育,其既可在體外培育,也可注射到小鼠腹腔內(nèi)培育。與體外培育相比,體內(nèi)培育的優(yōu)點(diǎn)是無需再供應(yīng)養(yǎng)分物質(zhì)以及無菌環(huán)境,操作簡便。答案:(1)B淋巴細(xì)胞不能無限增殖(2)滅活的病毒(3)動(dòng)物細(xì)胞氨基蝶呤淋巴細(xì)胞中的S(4)能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤0.1(5)腹腔無需再供應(yīng)養(yǎng)分物質(zhì)以及無菌環(huán)境,操作簡便5.(2024·貴州模擬)人類生長因子是一種生物活性肽復(fù)合物。探討人員發(fā)覺轉(zhuǎn)人類生長因子基因豬可以產(chǎn)生和分泌人類生長因子,有助于促進(jìn)細(xì)胞生長和傷口愈合。請回答下列問題:(1)常通過PCR技術(shù)來擴(kuò)增獲得人類生長因子基因,與細(xì)胞內(nèi)的DNA聚合酶相比,擴(kuò)增過程運(yùn)用的DNA聚合酶最大的特點(diǎn)是________。(2)如圖表示在培育轉(zhuǎn)人類生長因子基因豬的過程中,某技術(shù)環(huán)節(jié)的一個(gè)核心步驟。①該環(huán)節(jié)須要用到的工具酶是________和DNA連接酶,這兩種工具酶的化學(xué)本質(zhì)都是________。將該表達(dá)載體導(dǎo)入豬受精卵后,經(jīng)__________________技術(shù)使其持續(xù)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因豬。②人類生長因子基因能在豬細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是______________________________________________。③為檢測人類生長因子基因在轉(zhuǎn)基因豬的細(xì)胞內(nèi)是否發(fā)生轉(zhuǎn)錄,可用標(biāo)記的________________作探針進(jìn)行分子雜交檢測,分子雜交的原理是________________。解析:(1)采納PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過程是在較高溫度下進(jìn)行的,因此運(yùn)用的DNA聚合酶最大的特點(diǎn)是耐高溫。(2)圖示為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程,這是基因工程的核心步驟。①構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),首先須要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運(yùn)載體,其次須要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA;這兩種工具酶的化學(xué)本質(zhì)都是蛋白質(zhì)。將該表達(dá)載體導(dǎo)入豬受精卵后,經(jīng)早期胚胎培育、胚胎移植技術(shù)使其持續(xù)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因豬。②目的基因能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是目的基因是否插到轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上。③為檢測目的基因是否勝利轉(zhuǎn)錄,可采納DNA分子雜交技術(shù),即用標(biāo)記的目的基因作探針進(jìn)行分子雜交檢測,分子雜交的原理是堿基互補(bǔ)配對。答案:(1)耐高溫(2)①限制酶蛋白質(zhì)早期胚胎培育、胚胎移植②人類生長因子基因是否插到轉(zhuǎn)基因豬染色體的DNA上③人類生長因子基因堿基互補(bǔ)配對6.(2024·梅州一模)電影中,“蜘蛛俠”能產(chǎn)生高強(qiáng)度的蜘蛛絲,現(xiàn)實(shí)中的基因工程也創(chuàng)建出了“蜘蛛羊”。該羊的乳汁中含有蛛絲蛋白,高強(qiáng)度的蛛絲蛋白可制成防彈背心、著陸傘繩等用于很多重要的特種工業(yè)領(lǐng)域、還可被制成人造韌帶和人造肌腱等醫(yī)學(xué)用品為人類健康帶來福音。生產(chǎn)流程如圖,請回答相關(guān)問題:(1)為保證明驗(yàn)勝利,產(chǎn)生蛛絲蛋白的基因須要從______(填“基因組”或“cDNA”)文庫中獲得。(2)將蛛絲蛋白基因和運(yùn)載體通過甲過程形成的X為__________________,該過程通常用相同的限制酶進(jìn)行切割,緣由是_________________________________。(3)細(xì)胞培育過程中,為防止代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞造成損害,應(yīng)實(shí)行的措施是________________,將細(xì)胞置于5%CO2氣體環(huán)境中的目的是________________。(4)在早期胚胎的培育中,因?yàn)槲覀儗?xì)胞所需的養(yǎng)分條件還沒有完全搞清晰,因此往往還須要添加__________。將獲得的重組細(xì)胞培育成早期胚胎后,須要移植到經(jīng)過____________處理的代孕母羊子宮內(nèi)。(5)蜘蛛羊的性狀除了能產(chǎn)生蛛絲蛋白外,與供應(yīng)ES受體細(xì)胞的個(gè)體不完全相同的緣由有___________________________________________________________。(答出兩點(diǎn)即可)解析:(1)cDNA文庫是利用mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得的,除去了基因結(jié)構(gòu)中內(nèi)含子的干擾,試驗(yàn)簡單勝利。(2)甲表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程,因此該過程形成的X為基因表達(dá)載體;構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)通常用相同的限制酶進(jìn)行切割,這樣可以使目的基因和運(yùn)載體有相同的黏性末端,便于連接。(3)細(xì)胞培育過程中,為防止代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞造成損害,應(yīng)定期更換培育液;將細(xì)胞置于5%CO2氣體環(huán)境中的目的是維持pH的相對穩(wěn)定。(4)在早期胚胎的培育中,因?yàn)槲覀儗?xì)胞所需的養(yǎng)分條件還沒有完全搞清晰,因此往往還須要添加動(dòng)物血清。將獲得的重組細(xì)胞培育成早期胚胎后,須要移植到經(jīng)過同期發(fā)情處理的代孕母羊子宮內(nèi)。(5)蜘蛛羊的性狀除了能產(chǎn)生蛛絲蛋白外,與供應(yīng)ES受體細(xì)胞的個(gè)體不完全相同的緣由有:性狀是基因與環(huán)境共同作用的結(jié)果;個(gè)體發(fā)育過程中有可能發(fā)生基因突變(變異)等。答案:(1)cDNA(2)(蛛絲蛋白)基因表達(dá)載體使目的基因和運(yùn)載體有相同的黏性末端,便于連接(3)定期更換培育液維持pH的相對穩(wěn)定(4)動(dòng)物血清同期發(fā)情(5)性狀是基因與環(huán)境共同作用的結(jié)果;個(gè)體發(fā)育過程中有可能發(fā)生基因突變(變異)等7.人血清白蛋白(HSA)是血漿中含量最豐富的蛋白質(zhì),在維持血漿滲透壓、抗凝血等方面起著重要作用,具有重要的醫(yī)用價(jià)值。如圖是用基因工程技術(shù)獲得重組HSA(rHSA)的兩條途徑。(1)為獲得HSA基因,首先要提取人血細(xì)胞中的mRNA,利用________法合成cDNA,再利用________技術(shù)進(jìn)行快速擴(kuò)增,在這一過程中,須要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便依據(jù)這一序列合成________。(2)構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體時(shí),須要選擇水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子,而不能選擇其他物種和組織細(xì)胞的啟動(dòng)子,緣由可能是__________________________________。(3)在利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中,為了吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞,需添加______物質(zhì)。(4)選用大腸桿菌作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)有________________________(答出兩點(diǎn)即可)。但相比于水稻胚乳細(xì)胞,利用大腸桿菌獲得的rHSA也有一些缺點(diǎn),請從生物膜系統(tǒng)的角度進(jìn)行分析____________________________________________________________。(5)利用上述方法獲得的rHSA不能干脆用于臨床醫(yī)療,你推想的緣由是____________________________________________________。解析:(1)利用mRNA為模板合成cDNA的過程為逆轉(zhuǎn)錄;獲得的cDNA一般采納PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增時(shí)須要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便依據(jù)這一序列合成引物。(2)由于啟動(dòng)子具有(物種及組織)特異性,所以構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體時(shí),須要選擇水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子,而不能選擇其他物種和組織細(xì)胞的啟動(dòng)子。(3)在利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中,需添加酚類物質(zhì),目的是為了吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞。(4)大腸桿菌是原核生物,具有繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少等優(yōu)點(diǎn),常作為基因工程的受體細(xì)胞;但是大腸桿菌沒有生物膜系統(tǒng)(或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體),不能對rHSA進(jìn)行深加工,獲得的rHSA可能沒有生物活性。(5)依據(jù)以上分析已知,通過以上方法獲得的rHSA可能沒有生物活性(或功能性較差或rHSA可能有平安隱患),因此不能干脆用于臨床醫(yī)療。答案:(1)反轉(zhuǎn)錄PCR引物(2)啟動(dòng)子具有(物種及組織)特異性(3)酚類(4)繁殖快;單細(xì)胞;遺傳物質(zhì)少大腸桿菌沒有生物膜系統(tǒng)(或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體),不能對rHSA進(jìn)行深加工(5)rHSA可能沒有生物活性或功能性較差或rHSA可能有平安隱患8.(2024·佛山一模)紫杉醇是目前最好的抗腫瘤藥物之一,但其藥源植物紅豆杉非常稀缺。大多數(shù)紅豆杉細(xì)胞培育物的紫杉醇產(chǎn)量較低,探討人員通過構(gòu)建紫杉醇合成關(guān)鍵酶(Bapt)基因的超表達(dá)載體來提高紫杉醇產(chǎn)量,其流程如圖所示。(1)過程①②運(yùn)用的工具酶分別是________和________。(2)p1303載體上有一種叫增加子的元件,結(jié)合題意推想增加子的作用是__________________。除了與目的基因表達(dá)有關(guān)的功能元件之外,p1303載體上還應(yīng)有______標(biāo)記基因和____________。(3)能否通過Bapt基因探針來檢測步驟⑤是否勝利?為什么?________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)為檢驗(yàn)最終的試驗(yàn)?zāi)康氖欠襁_(dá)到,還應(yīng)檢測________________。解析:(1)①為逆轉(zhuǎn)錄過程,須要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化;②為PCR擴(kuò)增過程,該過程須要運(yùn)用Taq酶。(2)依據(jù)題干信息可知,p1303載體上增加子的作用是促進(jìn)Bapt基因的表達(dá)?;虮磉_(dá)載體的組成包括啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、目的基因、復(fù)制原點(diǎn)等,由圖可知,標(biāo)記基因是潮霉素抗性基因,因此除了與目的基因表達(dá)有關(guān)的功能元件(啟動(dòng)子和終止子)之外,p1303載體上還應(yīng)有標(biāo)記基因(潮霉素抗性基因)和復(fù)制原點(diǎn)。(3)因?yàn)榧t豆杉細(xì)胞中本身存在Bapt基因,不管超表達(dá)載體是否勝利導(dǎo)入,都能與Bapt基因探針形成雜交分子,因此不能通過Bapt基因探針來檢測步驟⑤是否勝利。(4)依據(jù)題干信息可知,為檢驗(yàn)最終的試驗(yàn)?zāi)康氖欠襁_(dá)到,還應(yīng)檢測紫杉醇的產(chǎn)量。答案:(1)逆轉(zhuǎn)錄酶Taq酶(2)促進(jìn)Bapt基因的表達(dá)潮霉素復(fù)制原點(diǎn)(3)不能,因?yàn)榧t豆杉細(xì)胞中本身存在Bapt基因,不管超表達(dá)載體是否勝利導(dǎo)入,都能與Bapt基因探針形成雜交分子(4)紫杉醇的產(chǎn)量9.紫杉醇是紅豆杉細(xì)胞中產(chǎn)生的一種高效抗癌物質(zhì),在植物體中含量極低。為取代從自然
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