涂片染色技術(shù)-細(xì)菌涂片染色技術(shù)（臨床檢驗(yàn)技術(shù)）

革蘭染色細(xì)菌受色原理等電點(diǎn)學(xué)說(shuō)：革蘭陽(yáng)性菌的等電點(diǎn)（PI2-3)比革蘭陰性菌等電點(diǎn)(PI4-5)低，在同一PH條件下，陽(yáng)性菌比陰性菌所帶負(fù)電荷要多，與帶正電荷的堿性染料結(jié)合力牢固，不易脫色細(xì)菌染色操作【器材及試劑的準(zhǔn)備】1.細(xì)菌標(biāo)本2.接種環(huán)、酒精燈3.載玻片4.濾紙5.革蘭染液：結(jié)晶紫溶液、革蘭碘液、95%乙醇（脫色液）、稀釋石炭酸復(fù)紅細(xì)菌染色操作1.準(zhǔn)備工作

（1）細(xì)菌涂片制作：取清潔無(wú)油載玻片一張，在其中央滴加一滴生理鹽水，將接種環(huán)用火焰燒紅滅菌，待冷卻后自固體培養(yǎng)基或瓊脂斜面上菌落挑取細(xì)菌少許混于生理鹽水中，輕輕涂抹制成直徑約1cm大小的薄層，然后將接種環(huán)用火焰燒紅滅菌。涂片置室溫自然干燥，干燥后，標(biāo)本面向上，用鐘擺樣速度來(lái)回通過(guò)火焰三次，使細(xì)菌殺死并固定于玻片上。1.準(zhǔn)備工作2.染色過(guò)程（1）用蠟筆在細(xì)菌涂片兩端畫(huà)線，以防染液溢出，然后將細(xì)菌涂片平放在染色架上。（2）初染：先加結(jié)晶紫染液數(shù)滴，以覆蓋整個(gè)菌膜為宜，染色1min。（3）用細(xì)流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）（4）媒染：滴加革蘭碘液，覆蓋整個(gè)菌膜，作用1-3分鐘。2.染色過(guò)程（5）用細(xì)流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）（6）脫色：滴加95%乙醇在菌膜上，并頻頻搖動(dòng)玻片，至無(wú)紫色脫出為止（約20秒）。（7）用細(xì)流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）2.染色過(guò)程（8）復(fù)染：加稀釋石炭酸復(fù)紅染液，覆蓋整個(gè)菌膜，半分鐘。（9）用細(xì)流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）（10）用濾紙吸干細(xì)菌涂片上水分2.染色過(guò)程思考題為什么有些細(xì)菌革蘭染色會(huì)染成藍(lán)色，有些會(huì)染成紅色？革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌的判斷對(duì)于臨床治療有何意義？抗酸染色原理

分枝桿菌細(xì)胞壁含脂質(zhì)較多,其中主要成分為分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色時(shí)與石炭酸復(fù)紅結(jié)合牢固,能抵抗酸性乙醇的脫色作用,因此抗酸菌能保持復(fù)紅的顏色,達(dá)到染色目的。結(jié)核培養(yǎng)特性小結(jié)

饞--專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求高最適生長(zhǎng)溫度為35～37℃，pH6．5～6．8。

懶--生長(zhǎng)緩慢，18h-20H分裂1次，在固體培養(yǎng)基上2～8w才出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的菌落。

丑--典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣。結(jié)核桿菌菌落涂片染色步驟抗酸染色陽(yáng)性菌石炭酸復(fù)紅（初染）3%鹽酸酒精（脫色）亞甲藍(lán)（復(fù)染）干燥油鏡下觀察5分鐘烤干至無(wú)色褪下水洗烤干1分鐘烤干抗酸陽(yáng)性菌抗酸陽(yáng)性菌抗酸陽(yáng)性菌萋-尼抗酸染色鏡檢結(jié)果分級(jí)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)：仔細(xì)查遍整張涂片或連續(xù)觀察約300個(gè)，時(shí)間不少于4分鐘，根據(jù)檢查出的細(xì)菌數(shù)量來(lái)報(bào)告：檢出抗酸桿菌（+~4+）報(bào)告方式鏡檢結(jié)果P173萋尼抗酸染色鏡檢結(jié)果-仔細(xì)檢查300個(gè)視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌+/-300個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-2條抗酸菌+100個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌2+10個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌